贵州一动物园黑叶猴支原体及继发链球菌感染的诊治

石远菊胡玲玲汤德元* 曾智勇王 彬黄 涛李 达韦冠东龙冬梅李 波

(1.贵州大学动物科学学院，贵阳，550025；2.贵州省贵阳市黔灵山公园动物园，贵阳，550003；3.遵义市红花岗区农牧局，遵义，563000)

贵州一动物园黑叶猴支原体及继发链球菌感染的诊治

石远菊1胡玲玲1汤德元1*曾智勇1王 彬1黄 涛1李 达1韦冠东1龙冬梅1李 波3

(1.贵州大学动物科学学院，贵阳，550025；2.贵州省贵阳市黔灵山公园动物园，贵阳，550003；3.遵义市红花岗区农牧局，遵义，563000)

黑叶猴；支原体；链球菌；治疗

贵州一动物园饲养有国家Ⅰ级保护动物黑叶猴发生气喘、咳血等症状，且已病死2只。为查明病因，通过临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和PCR检测等方法进行诊断。结果表明该黑叶猴为支原体和链球菌感染；且根据细菌药敏试验结果，制定出相应的防治措施。

2016年8月下旬，贵州省一动物园国家I级保护动物黑叶猴(Trachypithecusfrancoisi)12只(1～12岁不等，平均体重3 kg)均出现有流涎、喘气、全身无力等症状，其中2只发病1 d后死亡。该黑叶猴没有接种过任何疫苗。于是送检黑叶猴(10岁左右)1只到贵州大学动物医院进行诊断。根据临床症状、病理剖检和实验室诊断，确诊黑叶猴为支原体感染及继发链球菌感染而死。现将诊治结果报道如下。

1 临床症状

黑叶猴发病前未见明显异常现象，发病后心跳为101次/min、呼吸次数为81次/min，伴有喘气、食欲下降、口鼻有半透明黏稠液体流出、同时出现轻度拉稀现象，随着病情的发展发病黑叶猴出现全身无力、心力衰竭和呼吸衰竭死亡。

2 剖检变化

剖检发现病死黑叶猴(10岁左右)腹腔有积液，胃肠充气，有较厚的肠系膜脂肪覆盖，胃肠黏膜轻度充出血；气管及鼻腔中有大量黏稠液体；肺脏出现不同程度坏死灶(图1)；肝脏表面有严重瘀斑(图2)，且变脆，边缘部分出现坏死灶；脾脏色泽变深、变硬；心脏包囊有积液，也有少许瘀斑。

图1 肺脏严重坏死病变Fig.1 The lung serious necrosis

图2 肝脏严重瘀斑、变脆Fig.2 The liver serious ecchymosis and brittle

3 实验室诊断

3.1 细菌分离培养

对死亡黑叶猴的心、肝、脾、肺、肾、血液进行细菌分离培养，接种于血琼脂培养基中，37 ℃ 、5% CO2恒温箱中厌氧/需氧培养 24～48 h观察细菌的生长状态和菌落特征，然后挑取单个菌落进行纯培养。结果在需氧和厌氧环境下，血琼脂培养基中均有菌落生成，判定分离菌为兼性厌氧菌，培养24 h后能观察到灰白色、露滴状、表面光滑，边缘整齐的菌落，菌落周围有明显的溶血环。革兰氏染色镜检可见，蓝紫色圆形、链状革兰阳性球菌(图3)。

图3 10×100油镜下的革兰氏阳性链状球菌Fig.3 Oil immersion lens(10×100)G+chain aureus

3.2 细菌的生化特性鉴定

分离菌经 24 h 纯培养后，得到的纯培养物接种于微量生化鉴定管中，37℃，5%CO2恒温培养箱培养24～48 h，结果显示：该分离菌株能发酵葡萄糖、山梨糖、乳糖、麦芽糖、木糖、蔗糖、淀粉，不能利用6.5%氯化钠、甘露醇、肌醇、0.1%美兰牛乳，不液化明胶，生化试验结果显示与标准菌株相比具有典型的链球菌的生化特性，再结合细菌培养特性，判断该分离菌为链球菌。

3.3 药敏试验

药敏试验结果显示：对庆大霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢曲松、氨苄西林抑菌圈直径<10.00 mm属低敏；卡那霉素和青霉素抑菌圈均>13.00 mm属中度敏感；而氧氟沙星抑菌圈为17.50 mm属高敏。

3.4 支原体PCR检测

解剖采集黑叶猴的肺脏，适量取样研磨后反复冻融3次，匀浆器磨20 min后收集匀浆，12 000 r/min离心10 min，取上清提取DNA(按支原体PCR检测核酸提取试剂盒使用说明书)。用支原体PCR 检测试剂盒(购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司)进行 PCR 核酸检测。反应体系为(总体积20 μL)：16 μL PCR反应液，2 μLTapDNA 聚合酶，2 μL 模板 DNA。PCR扩增程序为：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，35个循环；72 ℃ 延伸10 min。反应结束后取5 μL PCR产物于1%的1×TAE琼脂糖凝胶中电泳检测(90 V，30 min)，凝胶成像系统拍照记录。其结果病料中检测出支原体特异性阳性条带(图4)，说明黑叶猴为支原体感染。

图4 PCR检测结果Fig.4 PCR Test results注： M.DL2000 Marker；1.黑叶猴支原体PCR检测结果Note：M.DL2000 Marker；1.Francois’ langurs Mycoplasma PCR Test results

4 确诊

根据临床症状、病理解剖诊断、细菌染色镜检、生化鉴定及支原体核酸PCR检测，确诊该动物园黑叶猴为支原体感染及继发链球菌感染。

5 防治

首先对有临床症状的黑叶猴立即进行针对性的隔离救治。药物治疗是控制动物支原体病的一个重要手段。由于支原体无细胞壁，因此应选择作用于细菌蛋白质合成的相关药物，如环丙沙星、氧氟沙星、土霉素、四环素抗菌药等治疗效果较好。具体治疗方法为：左氧氟沙星1片/次，2次/d；卡那霉素，3～5 mL/次，2次/d；连用5 d。结合中药处方治疗，用白矾散加减：白矾5 g、白芷5 g、浙贝母5 g、葶苈子5 g、黄连5 g、黄芩5 g、大黄4 g、郁金5 g、甘草5 g、桔梗5 g、紫苑5 g、冬花5 g，水煎后加蜂蜜25 g，每天3次灌服，连用3剂，用药时应使用足够剂量与疗程。对已死亡黑叶猴尸体进行严格深埋消毒，并对被粪便、血液等的污染物及弃尸地进行消毒，圈舍、用具等用10%石灰乳或5%氢氧化钠液严格消毒。垫草等污染物焚烧处理。粪便堆积后用5%氢氧化钠液表面消毒后生物热处理。

其次对黑叶猴进行免疫接种，能有效地预防和控制支原体肺炎的发生；在幼猴1月龄时进行灭活苗的免疫，肌肉注射，每头接种0.5 mL，14 d后加强免疫1 mL，能起到很好的防治效果。同时将可疑黑叶猴全部隔离饲养，患病黑叶猴群则隔离治疗并进行带猴消毒。经以上方法治疗和防护后，根据近2月的观察未发现黑叶猴新病例。

Francois’ langurs；Mycoplasma；Streptococcus；Treatment

Diagnosis and Treatment of Mycoplasma and Secondary Streptococcus Infection in Francois’ Langurs(Trachypithecus francoisi) at a Zoo in Guizhou Province

Shi Yuanju1Hu Lingling1Tang Deyuan1*Zeng Zhiyong1Wang Bin1Huang Tao1Li Da2Wei Guandong1Long Dongmei1Li Bo3

(1.College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang，550025，China；2.Qianlingshan Park，Guizhou Province，Guiyang，550003，China；3.Agriculture Bureau of Animal Husbandry in Honghuagang District，Zunyi，563000，China)

Francois’ langur(Trachypithecusfrancoisi)，a first-class nationally protected species，exhibited symptoms of asthma，hemoptysis and other symptoms，and two langurs died at a zoo in Guizhou Province.To identify the cause，we conducted clinical observation，pathological autopsy，bacterial isolation and culture，biochemical identification and PCR detection and other methods for diagnosis.The results showed that the langurs were infected with mycoplasma and streptococcus；and according to the results of bacterial susceptibility test，the corresponding control measures were worked out.

稿件运行过程

2017-03-06

修回日期：2017-04-19

发表日期：2017-11-10

S858.9

A

2310-1490(2017)04-654-03

2017年贵州省教育厅《生物多样性及其保护生物学》一流课程建设教改项目资助

石远菊，女，24岁，硕士研究生；主要从事动物传染病病原分子生物学的科研学习。

*通讯作者：汤德元，E-mail：tdyuan@163.com