御风胶囊抗脑缺血的药效学研究

许贵军，王文芝，胥莉莉，张哲源，孙忠人

(1.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001；2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

御风胶囊抗脑缺血的药效学研究

许贵军1，王文芝1，胥莉莉1，张哲源1，孙忠人2*

(1.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001；2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：研究御风胶囊对实验性脑缺血大鼠的治疗作用。方法：造模成功Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性药对照组、御风胶囊组4组，观察御风胶囊对模型大鼠脑组织含水量、脑组织病理形态学、血小板聚集率、颈动脉体内血栓、凝血时间等指标的影响。结果：御风胶囊组与模型组比较，能明显降低脑缺血模型大鼠脑组织含水量，改善脑织病理形态学，使血小板聚集率降低，降低颈动脉体内血栓重，延长凝血时间。结论：御风胶囊对实验大鼠的脑缺血具有很好的治疗作用。

御风胶囊；脑缺血；药效学研究

脑缺血是一种常见的急性脑血管病，类似脑出血或脑梗塞，可反复发作，极易导致老年痴呆症和脑中风的发生，严重危害患者的生命健康和生存质量。御风胶囊是黑龙江中医药大学附属第二医院自主研发的制剂品种(黑药制字Z20170013)，由黄芪、川芎、天麻、丹参、当归、赤芍、制远志7味药材经提取、粉碎等工序制成的中药复方胶囊剂，益气活血、祛痰通络，用于气虚血瘀之中风先兆。本实验采用结扎大鼠右侧颈总动脉的脑缺血模型，对御风胶囊治疗实验性脑缺血的药效学进行研究。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

御风胶囊(黑龙江中医药大学附属第二医院制剂室)；银杏叶片(批号120704，石家庄以岭药业股份有限公司)；水合氯醛(批号20120420，天津市瑞金特化学品有限公司)。

1.2 动物

Wistar大鼠，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK黑2011001，雌雄各半，体质量(200±20)g。

1.3 仪器

KDC-160HR高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司)；BL-420F生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)；LBY-NJ2血小板聚集仪(北京普利生仪器有限公司)；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。

2 实验方法

2.1 造模、分组与给药[1-3]

Wistar大鼠喂养适应环境1周后，用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g)，分离并结扎右侧颈总动脉。假手术组只手术不结扎颈总动脉，手术后伤口缝合后回笼饲养。以神经学评分测定结果评定，造模成功的大鼠按体质量随机分组，分别为空白对照组(假手术组)、模型组、阳性药对照组(银杏叶片组)、御风胶囊组，保证每组造模成功的动物数为8只。造模后第2天开始灌胃给药治疗14天，御风胶囊组按4.86 g/kg灌胃给药，阳性药对照组按0.54片/kg灌胃给予银杏叶片，空白对照组和模型组给予等量生理盐水。

2.2 方法与观察指标

2.2.1 脑组织病理形态学观察

末次给药1 h，各组大鼠断头取脑，每只取半脑用10%福尔马林固定，石蜡切片进行常规HE染色，光学显微镜下观察各组大鼠脑组织结构变化。

2.2.2 脑组织含水量测定

末次给药1 h，各组大鼠断头取脑，迅速取出脑组织，每只取半脑用千分之一电子天平称重后置烘箱中70℃烘24 h，冷却后称干脑组织重量，分别计算脑组织含水量。

2.2.3 血小板聚集功能的影响

末次给药1 h，各组大鼠以3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g)，打开腹腔，从下腔静脉取血2.5 ml放入加3.8%枸椽酸钠的试管内，将已抗凝的全血以1 000 r/min离心8 min，制备富血小板血浆(PRP)，放置在0.5 ml的Eppedorf管中闭盖保存，置恒温孔备用；余下抗凝血以3 000 r/min离心10 min所得上清为贫血小板血浆(PPP)。采用LBY-NJ2血小板聚集仪测定血小板聚集率。

2.2.4 颈动脉体内血栓形成的影响

末次给药1 h，各组大鼠用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g)，测左颈总动脉与右颈外静脉导管中丝线血栓湿重。

2.2.5 凝血时间

末次给药0.5 h，各组大鼠以毛细管于眼眶内取一管血，记录凝血时间。

2.3 统计学处理

3 实验结果

3.1 脑组织病理形态学观察

结果见图1～4。

空白对照组：脑组织神经元细胞形态尚规整，无炎细胞浸润和少量充血。

模型组：缺血区可见出血周围区神经元固缩、水肿，大量炎细胞出现，中心区可见神经纤维呈现网格状结构，大量神经细胞凋亡，消失。

御风胶囊组：与模型组比较，神经元细胞形态较规整，凋亡数量明显减少，中心区少见神经纤维网格状结构，炎细胞明显减少，水肿程度明显减轻，稍优于阳性药对照组，与空白对照组比较无明显差别。

图1 空白对照组脑组织病理图

图2 模型组脑组织病理图

图3 阳性药对照组脑组织病理图

图4 御风胶囊组脑组织病理图

3.2 脑组织含水量测定

模型组脑组织含水量明显增加，与空白组比较有统计学意义(P<0.05)，御风胶囊组脑组织含水量明显减少，与模型组比较有统计意义(P<0.05)。结果见表1。

脑组织含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%

表1 御风胶囊对大鼠脑组织含水量的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

3.3 御风胶囊对血小板聚集功能的影响

模型组血小板聚集率升高，与空白组比较有统计学意义(P<0.05)，御风胶囊对血小板聚集率有显著下调，与模型组比较有统计意义(P<0.05)。结果见表2。

表2 御风胶囊对血小板聚集率的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

3.4 御风胶囊对颈动脉体内血栓形成的影响

模型组的血栓重明显增加，与空白对照组比较有统计学意义(P<0.05)，御风胶囊组的血栓重显著下调，与模型组比较有统计意义(P<0.05)。结果见表3。

表3 御风胶囊对血栓的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

3.5 御风胶囊对凝血时间的影响

模型组的凝血时间明显缩短，与空白组比较有统计学意义(P<0.05)，御风胶囊组的凝血时间延长，与模型组比较有统计意义(P<0.05)。结果见表4。

表4 御风胶囊对凝血时间的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

4 讨论

中风病(脑卒中)从2009年来已成为我国第一位死因，严重威胁着人们的生命健康。具有高发病率、高死亡率和高致残率等特点，在存活下来的患者中，仅有10%左右能完全恢复正常功能，绝大多数患者都遗留有偏瘫、失语等后遗症，中风的康复研究是当今医学界瞩目的重大课题[4]。中风的病机特点为阴阳失调、气机紊乱、痰瘀阻滞。气血亏虚是中风先兆发病基础之一。御风胶囊是以补阳还五汤[5]为基础加减而成，由黄芪、当归、 川芎、 天麻、 赤芍、丹参、制远志7味中药组成，诸药相互配伍，具有补气养血、通脉活络之功效，用于中风病中经络症。同时药效学证实“御风胶囊”具有抑制血小板聚集和血栓形成、降低血液黏度、降低血清总胆固醇和低密度脂蛋白、抗脂质过氧化等作用。

本实验研究所选择的实验动物造模方法为国内外所认可的经典造模方法，所选取的实验指标脑组织含水量、脑组织病理形态学、血小板聚集率、颈动脉体内血栓、凝血时间均为抗脑缺血动物实验的经典方法，而且也是临床上常用的针对脑缺血中风患者的检查指标。

实验结果表明，御风胶囊对模型实验大鼠具有显著的抗脑缺血作用，对中风病有一定的预防和保护作用。

[1] 李仪奎.中药药理试验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:10.

[2] 徐叔云.药理试验方法学[M].北京:北京人民卫生出版社,2002:1.

[3] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:北京人民卫生出版社,2006:1.

[4] 王晶,廖晓凌,王伊龙,等.2014年美国国际卒中大会热点回顾[J].中国卒中杂志,2014,9(4):269-271.

[5] 杨佳昕,海英.王清任补阳还五汤治疗中风病文献研究[J].实用中医内科杂志,2014,6(11):10-11.

PharmacodynamicsStudyofYufengCapsuleintheTreatmentofCerebralIschemia

XU Gui-jun1, WANG Wen-zhi1, XU Li-li1, ZHANG Zhe-yuan1, SUN Zhong-ren2*

(1.TheSecondAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150001,China;2.HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective: To explore the therapeutic effect of Yufeng capsule in the treatment of cerebral ischemia in rats. Methods: The successful models were randomly divided into the blank control group, the model group, the positive control group, and Yufeng capsule group. Water content and pathomorphology of the brain tissue, platelet aggregation rate, carotid thrombosis, and blood clotting time were observed to evaluate the effect of Yufeng capsule. Results: The therapy of Yufeng capsule can obviously improve the above indicators when compared to those of the model group. Conclusion: Yufeng capsule has a very good therapeutic effect on cerebral ischemia in rats.

Yufeng capsule; Cerebral ischemia; Pharmacodynamics study

R285.5

A

1002-2406(2017)06-0045-03

全国中药特色技术传承人才培训项目(2015)

许贵军(1975-)，男，博士，副主任药师，硕士研究生导师，黑龙江省中药特色技术传承人才，主要研究方向：新制剂新剂型研究。

孙忠人*(1960-)，男，教授，博士研究生导师，博士后合作指导教师，主要研究方向：针灸防治中风病的研究；经穴疗效客观化的神经生物学基础研究；针法灸法研究；神经功能障碍的针康法治疗。

2016-09-01

修回日期：2016-09-10