表皮生长因子在胃肠胰腺神经内分泌肿瘤中的表达水平与临床病理特征的关系

苟佳丽

【摘要】 目的：检测胃肠胰腺神经内分泌瘤中表皮生长因子（EGF）水平，并分析EGF与临床病理特征的关系。方法：选取在笔者所在医院确诊的胃肠胰神经内分泌瘤（GEP-NEN）患者，采用免疫组织化学法检测组织EGF表达，分析其与淋巴结转移及淋巴管密度（LVD）的关系。结果：对于出现淋巴结转移的GEP-NEN组，其LVD值高于淋巴结未转移组患者，差异有统计学意义（P<0.05）；淋巴结转移组EGF阳性率占52.6%，淋巴结未转移组EGF阳性率仅占18.2%，差异有统计学意义（P<0.05）；EGF阳性表达的患者，其LVD显著高于EGF阴性表达的患者，差异有统计学意义（P<0.05）；EGF的表达与LVD呈正相关（P<0.05）。结论：对于胃肠胰腺神经内分泌肿瘤患者，其EGF表达阳性率高，其表达水平与LVD呈正相关，尤其对于出现淋巴结转移的晚期患者，其EGF水平更明显。

【关键词】 胃肠胰腺神经内分泌肿瘤； 表皮生長因子； 淋巴管密度； 淋巴结

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.28.003 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2017）28-0005-03

【Abstract】 Objective：To detect the level of epidermal growth factor（EGF） in gastrointestinal neuroendocrine tumors and to analyze the relationship between EGF and clinicopathological features.Method：Patients admitted to our hospital and confirmed with gastrointestinal neuroendocrine tumor（GEP-NEN） adopted immunohistochemical method to test the expression of EGF and to analyze its relationship with lymphatic metastasis and lymphatic vessel density （LVD）.Result：Regarding the GEP-NEN group with lymphatic metastasis transferring，the LVD value of which was higher than that of patients with non-lymphatic metastasis transferring and the difference was statistically significant（P<0.05）；the positive rate of EGF in lymph node metastasis transferring group was 52.6%，and was only about 18.2% in non-lymphatic metastasis transferring group，and the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）；regarding patients with EFG positive expression，the LVD of which was significantly higher than that of patients with EGF negative expression，and the difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of EGF was positively correlated with LVD（P<0.05）.Conclusion：Regarding patients with gastrointestinal neuroendocrine tumors，it has higher positive rate of EGF expression and the expression level is positively correlated with LVD，especially for lymph node metastasis patients in advanced stage.

【Key words】 Gastrointestinal pancreatic neuroendocrine tumor； EGFR； LVD； Lymph node

First-authors address：The Peoples Hospital of Anyue，Anyue 642350，China

胃肠胰神经内分泌肿瘤（gastroenteropancreafic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）发病率仅次于大肠癌，在消化系统恶性肿瘤中占第二位，由于其早期的临床表现缺乏特异性，患者常常忽视，待症状加重就诊时，多数已经进展为转移性的NENs。对于晚期的胃肠NENs患者，目前临床常常采用的治疗手段包括手术、药物、介入、靶向等[1-3]。表皮生长因子（endothelial growth factor，EGF）于20年前被分离并纯化，其能够发挥诱导其受体酪氨酸激酶细胞内的酪氨酸残基磷酸化的作用[4]。现已经过检测发现，EGF是一种最早的淋巴管内皮细胞标记物，在成年人体内被发现，其表达水平可能与在淋巴管的发育水平及正常与否均密切相关[5-6]。本研究通过检测胃肠胰腺NENs患者组织中EGF水平的变化，分析其与患者淋巴结转移及淋巴管密度的关系。endprint

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取于2016年1月-2017年1月在笔者所在医院接受治疗，并经过病理学诊断确诊为GEP-NEN的患者60例作为研究对象，其中男30例，女30例，年龄30～70岁，平均（50.5±4.2）岁，根据是否发生淋巴结转移，将入组患者分为淋巴结转移组38例，淋巴结未转移组22例。两组患者的性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 试验试剂及器材 EGF ELISA试剂盒，EGF封闭液+一抗，兔抗鼠二抗试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；离心机（上海飞鸽）；显微镜（日本Olympus）；酶标仪（英国TECNA）；脱水机（日本TIYODA）；切片机（德国Leica）；计算机图像分析系统（美国惠普）。

1.2.2 检测淋巴管密度（LVD） 淋巴管密度的判定：在肿瘤的区域范围内，凡未成腔的EGF阳性即镜下观察到胞浆含有棕黄色颗粒的内皮细胞或细胞团，以及EGF呈阳性，但已经形成管腔，形态尚不规则的单层内皮细胞。镜下取3个染色丰富区，200倍视野下计数3个不重叠区每个视野内的阳性淋巴管数，取平均值。

1.2.3 免疫组织化学法检测组织中EGF的表达 福尔马林固定、脱水、透明；包埋、切片；热修复；过氧化氢阻断；正常山羊血清封闭；加一抗（浓度1∶100）50 μl静置1 h；加二抗（浓度1∶100）50 μl 静置10 min；显色、终止；复染、分化；封片。EGF阳性结果判定以细胞核不染色，胞膜或胞质出现棕黄色颗粒为阳性，染色细胞数阴性（-）：≤10%；弱阳性（+）：11%～25%；阳性（++）：26%～50%；强阳性（+++）：>50%。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，多因素用Logistic回归模型，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 入组GEP-NEN患者LVD的表达

根据入组GEP-NEN患者是否存在淋巴结转移分为两个亚组，均进行EGF的表达检测，结果发现，淋巴结转移组的LVD均值达（0.83±0.14）个，明显高于淋巴结未转移组（0.23±0.11）个，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 入组胃肠胰神经内分泌瘤患者组织中EGF的表达水平变化

根据入组GEP-NEN患者是否存在淋巴结转移分为两个亚组，均进行EGF的表达检测，结果发现，对于出现了淋巴结转移的NENs患者，EGF阳性20例，阳性率达到52.6%，而对于淋巴结未转移的NENs患者，其出现EGF阳性4例，阳性率占18.2%，两组比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 入组GEP-NEN患者EGF与LVD的关系

EGF阳性表达的患者，其LVD为（1.33±0.15）个，EGF阴性表达的患者为（0.43±0.11）个，EGF阳性者高于EGF阴性者，差异有统计学意义（P<0.05），且EGF的表达与LVD呈正相关（r=0.360，P=0.012）。

3 讨论

胃肠神经内分泌肿瘤（neuroendocrine tumors，NET）是消化道常见的肿瘤，对于分布在胃肠道NET的主要来源于胃肠道神经内分泌细胞，而胰腺NET主要来源于胰岛细胞[7]。在胚胎期发育时期，尤其是淋巴管发育、形成及病理状态下淋巴管生成的过程中，EGF发挥着非常重要的作用，EGF不仅能够选择性地促进淋巴管形成，还能够增加淋巴管的通透性，促进肿瘤细胞经淋巴管向远处扩散[8-10]。本研究选取了在笔者所在医院确诊并接受治疗的GEP-NEN患者作为研究对象，检测其EGF的表达，观察LVD的情况，分析EGF表达与NETs患者是否存在淋巴结转移及与LVD的关系。

文献[11-12]显示，EGF在包括肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、恶性黑色素瘤等多种不同类型的人类恶性肿瘤中均存在，且表达阳性率较高。在本研究中，首先根据入组的GEP-NEN患者是否出现淋巴结，将试验对象分为两组，检测入组GEP-NEN患者的LVD，出现淋巴结转移的GEP-NEN患者其LVD均值明显高于未出现淋巴结转移的患者。进一步对入组患者EGF的表达情况进行检测发现，淋巴结转移组出现EGF阳性率高达52.6%，但淋巴结未转移组EGF阳性率仅占18.2%。这提示，对于出现淋巴结转移的GEP-NEN患者，其EGF表达阳性率显著升高，LVD值明显升高。关于EGF的生物學作用，有研究者指出，EGF-C能够特异性的作用于淋巴管内皮细胞，EGF与淋巴结转移及淋巴管形成可能存在一定的关联，但具体机制未阐明[13]。这与本研究结果近似。

最后，本研究对胃肠胰神经内分泌瘤患者组织中EGF的表达与LVD的关系及淋巴结转移与否进行了分析，对于EGF呈现阳性表达的GEP-NEN患者，其LVD值明显高于EGF阴性表达的患者，EGF的表达水平与LVD呈正相关。关于EGF表达与淋巴管形成的关系分析上，既往有研究者指出，EGF能够与其受体发生特异性结合，酪氨酸激酶发生磷酸化，细胞骨架蛋白进一步激活，活化细胞内的多条信号传导通路，从而发挥了促进淋巴管内皮细胞增殖、分化、迁移，诱导淋巴管内皮细胞及蛋白发生重组，刺激新生淋巴管形成的作用[15]。这与本研究结果相一致。

综上所述，对于胃肠胰腺神经内分泌肿瘤患者，其EGF表达阳性率高，其表达水平与LVD呈正相关，尤其对于出现淋巴结转移的晚期患者，其EGF水平升高更明显。EGF可能成为判断胃肠胰腺神经内分泌肿瘤预后的新指标，但具体作用机制仍需进一步基础研究证实。endprint

參考文献

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（收稿日期：2017-06-30）endprint