BPTF因子在肺腺癌中的表达及临床意义

代 萌，任丽娜，江 玲，王齐敏，刘 媛，刘春芳

(1.大连医科大学附属大连市中心医院 呼吸内科, 辽宁 大连116000; 2. 大连医科大学附属第二医院 病理科, 辽宁 大连 116027)

代 萌(1982-)，女，主治医师。E-mail：446916982@qq.com

刘春芳，教授。E-mail：zxyylcf611@126.com

论著

10.11724/jdmu.2017.05.04

BPTF因子在肺腺癌中的表达及临床意义

代 萌1，任丽娜1，江 玲1，王齐敏2，刘 媛1，刘春芳1

(1.大连医科大学附属大连市中心医院 呼吸内科, 辽宁 大连116000; 2. 大连医科大学附属第二医院 病理科, 辽宁 大连 116027)

目的探讨溴区PHD结构域转录因子(bromodomain and PHD domain transcription factor, BPTF)在肺腺癌中的表达及其对预后的影响。方法收集来自大连医科大学附属第二医院病理科及上海超芯公司的90例肺腺癌及其癌旁的组织标本, 通过免疫组化检测BPTF因子表达情况,分析其与患者临床病理资料的相互关系, 并对随访资料进行Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析。结果BPTF因子在肺腺癌高表达率为68.9%，与癌旁组织(1.3%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。BPTF因子表达与肿瘤淋巴结转移及TNM临床分期有关(P均<0.05)。BPTF高表达5年总生存率为44.2%，低表达为70.77%，两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示临床分期以及BPTF的表达水平为肺腺癌患者的预后影响因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。结论BPTF高表达对肺腺癌患者预示更差的预后。

BPTF；肺腺癌；预后

肺癌近年来其发病率和死亡率在全球范围内呈持续明显上升的趋势[1]，BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) 是近年来发现的新的癌蛋白，作为NURF(nucleosome remodeling factor)的最大的一个亚基，在正常细胞中起到参与染色质重塑的作用。然而当其过度表达时，BPTF对黑色素细胞瘤及肺癌细胞起到重要的发生发展的作用。目前发现BPTF通过激活MAPK及PI3K通路同时抑制caspase-8细胞凋亡途径来促进肿瘤细胞的生长。然而，在人类肺腺癌样本的水平上研究BPTF对患者预后的影响目前报道很少，本研究旨在探讨BPTF在肺腺癌中的表达情况及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 病例资料

共收集90例肺腺癌病例，其中75例来自于上海超芯公司，直接购买该公司组织微阵列芯片，另外15例来自于于大连医科大学附属第二医院。90例样本均有其癌旁正常肺组织作为对照。所有病例均为2004年1月至2010年12月手术治疗的肺腺癌患者，且手术前未行放化疗，患者均有较完整的临床病理资料，包括年龄，性别，家族史，手术后病理信息等等。本研究已通过医院伦理委员会批准。

1.2 随 访

大连医科大学附属第二医院来源的病例，通过电话随访及门诊复查两个途径进行随访跟踪，随访内容主要为生存情况，术后辅助治疗情况，复发，影像学检查及肿瘤标志物水平。随访时间截止为患者发病后5年，最后截止时间为2016年12月。本研究的终点事件定义为任何原因导致的死亡。总生存时间为术后第1天到任何原因导致死亡的时间。上海超芯公司来源的的病例其随访资料由公司提供。

1.3 IHC检测BPTF方法及评判标准

免疫组织化学染色(IHC)：经二甲苯脱蜡，梯度水化，除去内源性过氧化物酶(Peroxidase)活性，高压抗原修复，PBS缓冲液洗涤，IHC油性笔绕切片周围划圈，圈好后滴加羊血清封闭30 min。一抗孵育：BPTF(购自Abcam公司)按1∶50进行稀释，覆盖整张切片，4 ℃孵育过夜。再PBS缓冲液洗涤4次，每次3 min。二抗孵育：滴加二抗，室温孵育1 h。PBS缓冲液洗涤4次，每次3 min。DAB显色2～3 min，清水冲洗终止反应。苏木素复染1～2 min，盐酸酒精分化1～3 s。脱水干燥，中性树脂封片，观察。

阳性结果判定标准：两名资深病理医师依据染色强弱的程度作出评分。依据染色深浅把“-”评为0分，“+”评为1分，“++”评为2分，“ +++”评为3分，4个等级。依据组织染色面积把<25%评为1分，25%～50%评为2分，50%～75%评为3分，超过75%评为4分。总分为染色深浅评分X 染色面积评分，最高分12分，我们定义7分以上为高表达，低于6分为低表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行统计分析。计数资料比较及BPTF表达与临床病理特征关联性分析采用卡方检验。应用Kaplan-Meier法(组间生存率比较采用Log-rank检验)和Cox比例风险回归模型进行生存分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 BPTF因子肺腺癌及癌旁组织的表达

BPTF因子在肺腺癌高表达率为68.9%，癌旁组织中仅为1.3%，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

2.2 BPTF因子表达与临床病理特征之间的关系

BPTF因子表达与肿瘤淋巴结转移及TNM临床分期有关(P均<0.05)，而与性别、年龄、浸润深度无关。见表1。

2.3 BPTF因子表达与患者术后生存期的关系

对90例患者进行随访，BPTF因子高表达者5年总生存率为44.2%，低表达者为70.77%，两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。见图 2。

2.4 BPTF表达对肺腺癌患者预后的影响

Cox回归单因素分析显示肿瘤浸润、淋巴结转移、临床分期及BPTF的表达为肺腺癌患者的预后影响因素。多因素分析显示临床分期以及BPTF的表达水平为肺腺癌患者的预后影响因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。见表2。

3 讨 论

BPTF是NURF(核小体重塑因子，nucleosome remodelling factor)的最大的一个亚基，染色质重塑是基因表达调控的基本的也是最重要的环节。目前发现BPTF在参与染色体重塑中起到识别组蛋白甲基化和乙酰化位点的作用，PHD锌指结构域可以特异性识别并结合二甲基或是三甲基H3K4(H3K4me2/3)，其临近的溴区结构域可以特异性结合在H4在K12、K16或是K20乙酰化肽段。通过与这些甲基化和乙酰化位点结合后，基因转录活性可以被大大增强[3]。BPTF在生物学功能上可以调控真核细胞的发育。研究表明BPTF突变后，小鼠的外胚层发育受到抑制，胚胎在晚期出现流产[4]，胸腺的发育也会受到抑制[5]。另外，还发现当BPTF表达失控时与肺癌，膀胱癌，肝癌及黑色素细胞瘤也有一定的关系。Balbs-Martínez等[7]通过外显子测序的方法揭示了BPTF基因在膀胱癌中出现频繁突变。Buganim等[8]检测了17 q24.3即BPTF基因所在位置，发现BPTF与肺的癌前病变有关，并且有27%的肺癌中检测到17q24.3基因突变。进一步研究显示BPTF在黑色素细胞瘤及非小细胞肺癌[9-10]，通过激活MAPK及PI3K-AKT通路，并抑制caspase-8及BCL-2凋亡通路来促进肿瘤细胞的生长。进一步研究表明BPTF通过与c-Myc启动子结合从而调控c-Mcy蛋白的表达。

A～B: BPTF因子在肺腺癌高表达; C～D: BPTF因子在肺腺癌低表达; E～F: BPTF因子在癌旁低表达。A、C、E(×50); B、D、F(×200)图1 BPTF因子在肺腺癌及癌旁组织中的表达Fig 1 Expression of BPTF in adenocarcinoma and in normal lung tissue

Tab 1 Association among BPTF and clinicopathological features in 90 cases with lung adenocarcinoma n (%)

总数(n=90)BPTF高表达(n=62)BPTF低表达(n=28)P性别0.120 男性4929(59.18)20(40.82) 女性4133(80.49)8(19.51)年龄(岁)0.823 <604229(69.05)13(30.95) ≥604833(68.75)15(31.25)肿瘤分期0.436 T1+T27146(64.79)25(35.21) T3+T41916(84.21)3(15.79)淋巴结转移0.025 N0+N16033(55.00)27(45.00) N2+N31919(100.00)0(0) Nx11临床分期0.016 I4726(55.32)21(44.68) II1812(66.67)6(33.33) III2120(95.24)1(4.76) IV44(100.00)0(0)

图2 90例肺腺癌患者BPTF低表达与BPTF高表达总生存分析Fig 2 Overall survival analysis with high and low expression of BPTF in 90 lung adenocarcinoma

RR95%CI两组数据比较P单因素分析 肿瘤分期2.1351.706-4.787T1+T2/T3+T40.045 淋巴结转移5.4232.483-11.579N0+N1/N2+N30.000 临床分期1.7831.331-2.473I/II期/III/IV期0.000 BPTF8.4932.591-28.220高表达/低表达0.000多因素分析 临床分期1.8901.405-2.900I/II期/III/IV期0.000 BPTF7.9672.251-28.732高表达/低表达0.001

本研究检测90例肺腺癌BPTF的蛋白表达，发现68.9%高表达。BPTF蛋白阳性表达率与所报道的bptf基因突变阳性表达率不一致，很多的因素影响BPTF的转录以及翻译，基因组畸变仅仅是其中一个主要的因素。本研究90例临床组织样本中，发现BPTF高表达与淋巴结转移数和临床分期有关，淋巴结转移数越多、越是晚期病人BPTF的表达越高。肺腺癌病人的生存期与BPTF蛋白表达以及临床分期有关。越是晚期病人、BPTF表达越高则生存期越短。最后，通过Kaplan-Meier分析结果显示，BPTF高表达的病人生存期比BPTF低表达的病人生存期短。综上所述，BPTF在人类肺腺癌标本中是一个关键的因子，为肺腺癌提供了潜在的治疗靶点。

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EffectofBPTFexpressionontheprogressoflungadenocarcinoma

DAI Meng1, REN Lina1, JIANG Ling1,WANG Qimin2, LIU Yuan1, LIU Chunfang1

(1.RespiratoryDepartment,DalianCentralHospitalAffiliatedtoDalianMedicalUniversity,Dalian116000,China；2.DepartmentofPathology,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China)

ObjectiveTo research the effect of BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) on human lung adenocarcinoma.MethodsNinety lung adenocarcinoma tissue samples from affiliated 2nd hospital, Dalian medical university and Shanghai Xinchao Company were collected and analized about the relationship between BPTF and clinical phathological characteristics. Further, Kaplan-Meier and Cox regression analysis were carried out.ResultsBPTF positive expression rate was 68.9%, comparing to the adjacent normal lung tissue (1.3%), the difference was significant (P<0.05). BPTF high expression was related with lymph node metastasis and TNM clinical phases (P<0.05). The five-year overall survival was 44.2% in BPTF high expressed group, but it was 70.77% in BPTF low expressed group. The difference in the two groups was signifecant(P<0.05). Multipal factor analisis showed the clinical phrase and the expression of BPTF was the important effective factors to the lung adenocarcinoma prognosis(RR=1.890, 95%CI 1.405-2.900,P<0.01, RR=7.967, 95% CI 2.251-28.73,P<0.01).ConclusionThe high expressed BPTF predicted a poor prognosis in lung adenocarcinoma.

BPTF; lung adenocarcinoma; prognosis

R734.2

A

1671-7295(2017)05-0433-04

代萌，任丽娜，江玲，等.BPTF因子在肺腺癌中的表达及临床意义[J].大连医科大学学报，2017,39(5)：433-436，445.

2017-09-10；

2017-10-03)