不同芍药甘草配伍用于溃疡性结肠炎的治疗作用及机制研究

陈晓峰，谢 君*

（张家港市中医医院药剂科，江苏 张家港 215600）

不同芍药甘草配伍用于溃疡性结肠炎的治疗作用及机制研究

陈晓峰，谢 君*

（张家港市中医医院药剂科，江苏 张家港 215600）

目的研究不同芍药甘草配伍用于溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及机制。方法纳入90只实验小鼠作为研究对象，随机抽签分为观察1组、观察2组及对照组，各30只。观察1组和观察2组采用乙酸法建立UC小鼠模型，分别以3∶1和1∶1比例配伍芍药甘草，以芍药甘草汤进行干预。对照组正常饲养，未行其他干预。记录3组小鼠胸腺指数、脾脏指数及结肠组织核因子-kBp65(NF-kBp65)，比较观察1组和观察2组小鼠结肠收缩频率、扭体次数、炎性细胞数、炎性细胞面积、平均光密度及平均黑度总和。结果观察1组给药30min和1h后结肠收缩频率和扭体次数显著低于观察2组和给药前（P＜0.05）。观察1组胸腺和脾脏指数均高于观察2组，结肠组织NF-kBp65低于观察2组（P＜0.05）。观察1组炎性细胞数、炎性细胞面积、平均光密度及平均黑度总和均显著低于观察2组（P＜0.05）。结论3∶1比例配伍芍药甘草较1∶1比例配伍的芍药甘草汤用于治疗UC，其止痛止泻效果更佳，这可能与控制炎性浸润、刺激免疫器官分泌免疫细胞，抑制NF-kBp65激活有关。

芍药；甘草；溃疡性结肠炎

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)属非特异性炎症性疾病，主要累及黏膜和黏膜下层，临床以腹泻、腹痛、便血为主要表现，属中医“肠癖、脏毒”范畴。既往认为肠癖多因脾胃虚弱、气血阻滞而致，本虚标实、脾虚湿盛为本病病理基础[1]。芍药甘草汤出自伤寒论，以调和肝脾、缓急止痛为主要功用，临床在UC、萎缩性胃炎等消化系统疾病中得到广泛应用[2]。芍药、甘草是方剂芍药甘草汤主要组成药物，目前，临床对芍药、甘草的不同配伍疗效认识尚有争议，且缺乏对其作用机制的研究[3]。既往多认为1∶1比例可达到理想缓急止痛效果，但近年来有报道认为3∶1疗效可能更好[4]。为此，本研究纳入90只小鼠，建立UC小鼠模型，分析芍药、甘草不同配伍比例的芍药甘草汤对UC的治疗效果及作用机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

实验小鼠均由广西药学院动物实验室提供，合格证号：08A038。观察1组30只，雌性17只，雄性13只；年龄 （12.54±3.68）周；体质量 （214.51±20.84）g。观察2组30只，雌性16只，雄性14只；年龄（13.02±3.71）周；体质量（220.17±22.36）g。对照组 30 只，雌雄各 15 只，年龄（12.77±3.54）周，体质量（209.36±21.17）g。3组小鼠性别、年龄及体质量比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 UC小鼠建模

观察1组和观察2组小鼠禁食24h，行戊巴比妥钠腹腔麻醉，成功后清洁灌肠，用尼龙导管经肛门插入结肠8cm处，注入5%冰乙酸溶液1mL，间隔2d，连续重复4次。然后正常饲养2周。期间对照组正常饲养。

1.3 治疗药物及方法

观察1组配方:芍药0.6g/kg，甘草0.2g/kg；观察2组配方:芍药0.2g/kg，甘草0.2g/kg。两组分别按上述配方取药材10g，加入10倍量清水浸泡煮沸30min，过滤分离，取上清液，冷冻干燥，备用。两组均从饲养结束后第10天开始给药，用生理盐水每日灌胃1次，按3g/（kg·d）剂量给小鼠灌服芍药甘草汤煎剂混悬液，分2次灌服，连续给药3d。给药结束后即可开始记录小鼠扭体反应次数。

1.4 病理标本切片检测

观察1组和观察2组给药完成后禁食12h，用乌拉坦800mg/kg行小鼠尾静脉浅麻醉，沿腹中线做3cm切口，找出结肠段两端并用缝合线固定在肠管固定管两侧小孔上，缝合线一端从肠管固定管中央穿出连接BL-420S生物机能实验系统，放回腹腔，记录结肠收缩频率。3组小鼠灌胃后1d内处死，取近肛门端3cm处结肠作为病理标本。切片4 μm，行HE染色，以平均吸光度反应评定核因子-kBp65(NF-kBp65)活性。摘取脾脏、胸腺，计算脾脏指数和胸腺指数。将观察1组和2组小鼠标本置于20×10倍视野光镜下观察炎性细胞浸润区域，采用MIAS 2 000型计算机图形系统测定炎性细胞数量、面积、平均光密度及平均黑度总和。

1.5 统计学方法

选用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析和处理，计量资料以“±s”表示，多时点对比采用重复测量的方差分析，单一时点的对比采用多变量的方差分析，两组间比较行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠收缩频率和扭体次数比较

给药后，两组各时间点(30min,1h)结肠收缩频率和扭体次数均减少（P＜0.05）。观察 1组给药30min和1h后结肠收缩频率和扭体次数显著低于观察2组（P＜0.05）。见表1。

2.2 3组免疫指标比较

表1 结肠收缩频率和扭体次数比较 （n=30，±s）

表1 结肠收缩频率和扭体次数比较 （n=30，±s）

注：与给药前比较，*P＜0.05；与观察 2 组比较，△P＜0.05。

组别观察1组观察2组项目收缩频率/（次/min）扭体次数/（次/20min）收缩频率/（次/min）扭体次数/（次/20min）给药前1h 165.33±25.58 35.69±5.22 167.04±21.39 36.13±6.71给药30min后146.42±20.31*△20.26±4.18*△158.68±20.73*33.79±5.59*给药1h后130.29±18.85*△14.73±3.92*△142.88±18.21*22.87±4.46*F 23.714 19.671 18.639 17.443P 0.000 0.000 0.000 0.000

观察1组与对照组比较胸腺指数差异无统计学意义（P＞0.05）。观察1组和2组脾脏指数和结肠组织 NF-kBp65 均高于对照组（P＜0.05）。观察 1 组胸腺和脾脏指数均高于观察2组，结肠组织NF-kBp65 低于观察 2 组（P＜0.05）。见表2。

2.3 两组炎性指标比较

观察1组炎性细胞数、炎性细胞面积、平均光密度及平均黑度总和均显著低于观察2组，差异有统 计学意义（P＜0.05）。 见表3。

表2 3组免疫指标比较 （n=30，±s）

表2 3组免疫指标比较 （n=30，±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与观察 2 组比较，△P＜0.05。

组别观察1组观察2组对照组F P胸腺指数/（mg/10g）0.23±0.07△0.18±0.03*0.26±0.08 12.584 0.001脾脏指数/(mg/10g)0.68±0.13*△0.56±0.09*0.34±0.05 15.584 0.000结肠组织NF-kBp65 0.04±0.01*△0.06±0.02*0.02±0.01 17.302 0.000

表3 两组炎性指标比较 （n=30，±s）

表3 两组炎性指标比较 （n=30，±s）

注：与观察 2 组比较，*P＜0.05。

组别观察1组观察2组t P炎性细胞数/个281.37±65.13*353.72±89.24 3.587 0.001炎性细胞面积/μm2 3 424.13±576.48*5 509.56±781.23 11.765 0.000平均光密度30 976.85±4 452.92*34 012.23±5 124.76 2.449 0.017平均黑度总和35 162.08±4 872.36*42 158.29±5 516.97 5.206 0.000

3 讨论

UC与自身免疫性疾病、遗传及感染等因素密切相关[5]，但其具体机制尚未完全阐明，是临床难治性疾病之一。目前，免疫抑制剂、激素及手术外科治疗疗效不甚满意，且毒副作用较多[6]。近年来，中医药逐渐引起临床重视，芍药甘草汤作为缓急止痛的经典方剂在UC中得到广泛应用[7]。本研究对比不同配伍剂量芍药甘草汤在UC中的疗效，结果显示观察1组给药30min和1h后小鼠结肠收缩频率和扭体次数均显著低于给药前和观察2组，提示3∶1比例配伍芍药甘草汤用于UC模型小鼠对结肠蠕动亢进具有明显拮抗性抑制作用，能缓解结肠痉挛性蠕动，从而发挥止痛止泻作用。杨艳等[8]研究也认为大剂量芍药甘草配伍能直接影响回肠平滑肌频率和张力变化率，增强解痉止痛效果，与本文结论相符。

胸腺和脾脏是机体重要免疫器官，分别通过分泌胸腺素和T淋巴细胞参与细胞免疫[9]。胸腺指数和脾脏指数指每10g体重脏器的重量，对评价淋巴细胞增殖能力具有重要意义[10]。本研究中，观察1组与对照组胸腺指数无显著性差异，提示3∶1比例配伍芍药甘草汤能刺激UC小鼠受损胸腺的细胞增殖，对恢复和调节免疫机能有重要意义。另外，有研究还认为芍药甘草及柴胡配伍能发挥协同作用[11]，有助于增强免疫功能。脾脏被认为是机体细胞免疫中心，芍药甘草配伍能提高腹腔巨噬细胞吞噬率，促进淋巴细胞转化和溶血素的形成[12]。本研究显示观察1组和2组脾脏指数显著高于对照组，而观察1组较2组更为明显，说明芍药甘草汤对恢复机体免疫功能作用显著，芍药甘草3∶1配伍较1∶1比例效果更好。徐晓娟等[13]也认为3∶1配伍较1∶1比例能通过升高血浆-β内啡肽而达到更好的止痛效果，与本文结论一致。NF-kB异常活化在UC病理进展中具有重要作用[14]，本研究显示观察1组和2组结肠组织NK-kBp65均高于正常对照组，提示建模成功，而观察1组NF-kB显著低于2组，提示3∶1配伍芍药甘草抑制NF-kBp65激活作用优于1∶1配伍组。

溃疡、糜烂是UC的主要病理变化，炎性浸润是UC诊断治疗的主要依据[15]。甘草内含甘草甜素具有肾上腺皮质激素样作用[16]，因而具有抗变态反应，抑菌消炎作用。炎性细胞面积和平均光密度能对结肠黏膜溃疡和炎症程度进行定量、客观、精准评估[17]。本研究中，观察1组炎性细胞数、炎性细胞面积、平均光密度及平均黑度总和均显著低于观察2组，提示观察1组在改善炎症病理状态，抑制结肠黏膜溃疡进展方面效果优于2组。

综上所述，芍药甘草汤能显著改善UC腹泻、疼痛症状，以3∶1比例配伍芍药甘草较1∶1比例配伍疗效更为显著，这可能与控制炎性浸润，刺激免疫器官分泌免疫细胞，抑制NF-kBp65激活有关。

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Study on Therapeutic Effect and Mechanism of Different Compatibility of Peony and Licorice on Ulcerative Colitis

CHEN Xiaofeng,XIE Jun*
(Department of pharmacy,Zhangjiagang Traditional Chinese Medicine Hospital,Zhangjiagang,Jiangsu 215600,China)

ObjectiveTo study the therapeutic effect and mechanism of different compatibility of peony and licorice on ulcerative colitis (UC).MethodsThe 90experimental mice were randomly divided into the No.1observation group,No.2observation group,and control group,30mice in each group.The UC model mice of the No.1observation group and No.2observation group were built by the acetic acid method,intervened with interved peony Licorice decoction,the compatibility of peony and licorice with 3∶1and 1∶1in the two groups.The control group was fed normally without other interventions.The thymus spleen index and colonic tissue nuclear factor-kBp65(NF-kBp65)were recorded in three groups,the colonic contraction fre quency,writhing,inflammatory cell number,size,density and average total blackness between No.1observation group and No.2observation group were observed.ResultsThe colonic contraction frequency and writhing frequency in No.1observation group after giving medicine for 30minutes and 1hour were lower than the control group and before drug administration(P＜0.05).The thymus and spleen indexes in No.1observation group were higher than that in the No.2observation group,and colon tissue NF-kBp65 was lower than the No.纸="1075"/> c group (P＜0.05).The number of inflammatory cells,inflammatory cell area,the average optical density and the average total blackness of the No.1observation group were significantly lower than those in No.2observation group(P＜0.05).ConclusionThe 3∶1proportion of peony and licorice are more effective in improving the pain and diarrhea than 1∶1ratio in the treatment for UC.This may be related to controlling inflammatory infiltration,stimulating immune organ secreting immune cells and inhibiting NF-kB activation.

peony;licorice;ulcerative colitis

本文引用：陈晓峰，谢 君.不同芍药甘草配伍用于溃疡性结肠炎的治疗作用及机制研究[J].湖南中医药大学学报，2017，37（10）：1074-1077.

R259；R285.6

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2017.010.006

2016-12-26

江苏省自然科学基金计划(815269)。

陈晓峰,男,本科,副主任药师,主要从事药学研究。

*谢 君,女，主管药师，E-mail：262229220@qq.com 。

（本文编辑 李 杰）