HPLC测定短葶山麦冬药材中短葶山麦冬皂苷C

●林鹏飞 冯凤桃 宋涵 王海燕

HPLC测定短葶山麦冬药材中短葶山麦冬皂苷C

●林鹏飞 冯凤桃 宋涵 王海燕

目的采用HPLC 法测定短葶山麦冬药材中短亭山麦冬皂苷C含量。方法：色谱柱为Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸二氢钾溶液（用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.0）（77:23）为流动相，柱温为15℃，检测波长203nm。结果：短亭山麦冬皂苷C在浓度为10.95μg/mL-175.19μg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为101.6%，RSD = 1.03%(n = 6)。结论：所用方法简便、快速、准确，可控制短葶山麦冬药材的质量。

短葶山麦冬；短葶山麦冬皂苷C；高效液相检测法

短葶山麦冬Liriopemuscari(Decne.)Bailey为百合科山麦冬属植物, 此属植物包括8个种(1个变种)[1], 其中短葶山麦冬和湖北山麦冬一同收载于中国药典2010 年版山麦冬项下[2]。短葶山麦冬主要分布在福建泉州市洛江区及莆田市仙游等地, 其具有养阴生津、润肺清心的作用, 含有多糖和多种鲁斯可皂苷, 其中短葶山麦冬皂苷C含量较多, 也是重要的活性成分, 现代研究表明[3～5], 短葶山麦冬皂苷C具有良好的免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳等作用。目前, 中国药典收载的山麦冬(短葶山麦冬和湖北山麦冬), 它们的药用部位是块根, 大量的须根资源被弃之。本文建立了HPLC法, 测定短葶山麦冬中短葶山麦冬皂苷C含量。所建立的方法可以为短葶山麦冬的质量控制研究提供一些有用的参考。

1 仪器、试药和样品

Agilent 1260 高效液相色谱仪；DAD检测器；Agilent色谱数据工作站。

短葶山麦冬皂苷C对照品购于上海诗丹德标准技术服务有限公司。

2 溶液制备

2.1 对照品溶液的制备

取短葶山麦冬皂苷C对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL约含短葶山麦冬皂苷C 50μg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取短葶山麦冬须根、块根粉末(过3号筛)约1 g, 精密称定,加乙醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）15分钟，取出，补足重量，放冷至室温，过滤，精密量取续滤液25 mL, 减压回收溶剂,残渣用甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中, 摇匀, 即得。

3 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸二氢钾溶液（用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.0）（77:23）为流动相，柱温为15℃，流速1ml/min，检测波长203nm。理论板数按短葶山麦冬皂苷C计应不低于2000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各40μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得,对照品及样品色谱图见图1。

图1 对照品(A)、短葶山麦冬块根样品(B)色谱图

4 线性关系考察

取短葶山麦冬皂苷C对照品适量，精密称定，用50%甲醇溶解，定容。配制成质量浓度分别为每1mL含短葶山麦冬皂苷C 175.19μg的溶液。分别依次将其稀释一倍，稀释4次，得到5个浓度的对照品溶液短葶山麦 冬 皂 苷 C 175.19μg/mL、87.60μg/mL、43.80μg/mL、21.90μg/mL、10.95μg/mL的溶液。将以上共五个浓度的对照品进样分析，按“3”项上述色谱条件测定短葶山麦冬皂苷C峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），样品浓度（μg/mL）为横坐标（X），得短葶山麦冬皂苷C回归方程为y = 14.799x-44.41。本方法线性相关系数为r=0.9993，表明本方法短葶山麦冬皂苷C在10.95μg/mL-175.19μg/mL范围内线性关系良好。

5 精密度试验

取“ 2.1”项下的对照品溶液，分别精密吸取同一对照品溶液40μL，连续测定6次，按“3”项上述色谱条件测定短葶山麦冬皂苷C的峰面积，本方法仪器精密度RSD=0.34%，RSD值小于2%，表明本方法精密度良好。

6 重复性试验取短葶山麦冬须根样品1 共6 份, 每份1 g, 精密称定, 依“2.2”项下方法制备供试品溶，按3项上述色谱条件测定短葶山麦冬皂苷C的含量，外标法计算短葶山麦冬皂苷C的含量，结果表明本方法重复性RSD=0.73%，RSD值小于3%，表明本方法重复性良好。

7 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别在0h、2.5h、5h、7.5h、10h、12.5h小时进样，按“3”项上述色谱条件测定短葶山麦冬皂苷C的峰面积。样品溶液在12.5小时内样品溶液RSD=0.63%，RSD值小于2%，结果显示样品溶液稳定性良好。

8 加样回收率试验

取已测知短葶山麦冬皂苷C含量(0.1137%)的短葶山麦冬须根样品6份, 每份0.5 g，精密称定，分别加入0.5491mg·mL-1的对照品溶液0.5mL，挥干溶剂，依“2.2”项下方法制备供试溶液, 进样测定, 计算回收率。结果平均回收率(n=6)为101.64%，RSD=1.03%，本方法回收率良好。

9 样品测定

取不同批次短葶山麦冬的块根样品，依“2.2”项下方法制备供试品溶液, 在“3”项色谱条件下进样测定, 以外标法计算各样品中短葶山麦冬皂苷C含量。结果3批块根样品中短葶山麦冬皂苷C含量分别为0.0537%, 0.0642%, 0.0597%。

10 讨论

以往文献中报道短葶山麦冬须根中的短葶山麦冬皂苷C和其他多个组分在紫外检测器中无吸收[6]，但在实验中发现短葶山麦冬在皂苷C存在末端吸收, 故本实验选择紫外检测器，选择203nm波长下进行测定短葶山麦冬中短葶山麦冬皂苷C含量，有较好的响应值，且可以排查其他杂质的干扰。本方法克服了以往难以用紫外检测器测定短葶山麦冬须根中的短葶山麦冬皂苷C含量，为短葶山麦冬药材的质量控制提供很好的帮助。

(作者单位：福建省闽东力捷迅药业有限公司)

[1]余伯阳, 徐国钧.中药麦冬资源的利用研究[J].中草药, 1995,26(4):205.

[2]ChP(中国药典).2015. (一部):26.

[3]Wu Feihua, Cao Jingsong, Jiang Jieyun, etal. Ruscogen in glycoside(Lm-3) isolated from Liriopemuscari improves liver injury by dysfunctioningl iver-infiltrating lymphocytes[J].J Pharm Pharmacol,2001,53(5):681.

[4]LiuJianli, ChenTing, YuBoyang, etal.Ruscogenin glycoside(Lm-3)isolated from Liriopemuscari inhibits lymphocy teadhesion to extra cellularmatrix. JPharm Pharmacol, 2002,54(7):959.

[5]余伯阳, 殷霞, 荣祖元, 短葶山麦冬皂苷C的药理活性研究[J].中国药科大学学报, 1994, 25(5):286.

[6]狄天云,王刚力,林瑞超,刘丽芳[J].PLC-ELSD法测定短葶山麦冬中短葶山麦冬皂苷C的含量,药物分析杂志.2011, 31(1):127-130.

Determination of Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC

LIN Peng–fei1⋆,WANG Hai-yan1，SONG Han1，FENG Feng-tao1
（1.Rejuvenation Pharmacy co,Ningde,Fujian,350002 P. R.china)

OBJECTIVE To determination the Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC. METHODS HPLC method was adapted, with Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) as analytical column. The mobile phase consisted of methanol-0.1% potassium dihydrogen phosphate solution (adjusted to pH 8.0 with 10% sodium hydroxide solution) (77:23) with theflow rate of 1. 0 mL·min-1and the column temperature of 15 ℃ . RESULTS The method displayed good linearity within the concentration ranges of 10.95 -175.19μg/mL with average recovery of 101.6 % and RSD of 1.03% ( n =6). CONCLUSION This method is simple，accurate，repeatable and suitable for the determination of Liriope muscari(Decne.)Bailey.

Liriope muscari(Decne.)Bailey;Determination of Liriope muscari baily saponins C; HPLC