结核感染T细胞斑点试验在结核性胸膜炎诊断中的应用与研究

●邹晓颖 王柏欣

结核感染T细胞斑点试验在结核性胸膜炎诊断中的应用与研究

●邹晓颖 王柏欣

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在结核性胸膜炎诊断中的临床应用价值。方法：选取牡丹江市康安医院诊治的胸腔积液患者45例，根据诊断标准分为结核性胸膜炎组（A组）与恶性胸腔积液组（B组），所有患者在入院后均行外周血T-SPOT.TB试验、胸水腺苷脱氨酶（ADA）检测及胸水结核杆菌培养，进而分别对三个不同检验方法的检验指标进行评价。结果：经临床诊断：A组34例、B组11例。外周血T-SPOT.TB试验、胸水ADA检测、胸水结核杆菌培养的敏感性分别是91.1%、64.7%%、14.7%，特异性分别是：90.9%、27.3%、100%。外周血T-SPOT.TB试验的敏感性高于胸水ADA的敏感性（P＜0.05），且高于胸水结核菌培养的敏感性（P＜0.05）。外周血T-SPOT.TB试验的特异性高于胸水ADA的特异性（P＜0.05），但与胸水结核菌培养的特异性无明显区别（P＞0.05）。结论：外周血T-SPOT.TB试验可作为临床诊断结核性胸膜炎的有效方法。

结核感染T细胞斑点试验；结核性胸膜炎；诊断；疗效

结核病作为发病率和死亡率最高的传染病之一，在我国，约30%人口感染过结核分枝杆菌，而这其中约15%的人口将会发展为结核病。近年来，佳木斯市的结核杆菌感染率呈上升趋势[1]。结核性胸膜炎、胸腔恶性肿瘤、胸膜腔感染均可形成胸腔积液，在我国，结核性胸腔积液可占到渗出性胸腔积液的50.0%-53.5%[2]。结核性胸膜炎作为最常见的肺外结核病[3-4]，其诊断需要根据患者的临床表现、胸腔积液的生化检查，必要时还要行胸膜活检等有创检查进行综合判断。传统的检验手段（如结核菌素试验）的敏感性及特异性较低，胸腔积液结核菌培养时间长且阳性率低，对于合并肺结核的结核性胸膜炎患者，痰培养虽然也具有一定的诊断价值[5]，但这些方法均不能在临床上做出快速的诊断。胸膜活检作为结核性胸膜炎诊断的金标准，大大提高了其确诊率，但因其是有创检查，并发症较多，大多数患者难以接受，且阳性率仅为62.2%-69.7%[6-7]，因此不适合作为常规检查。作为这一种新型结核菌感染的诊断手段，酶联免疫斑点技术（ELISPOT）已经被世界卫生组织列为结核菌感染的标准检验方法，近年来，基因工程技术的不断发展有力地推动了临床检验的水平，使其从细胞水平扩展到分子水平。

1 方法

1.1 研究对象

选取2014年3月至2016年3月牡丹江市康安医院诊治的胸腔积液患者45例，排除漏出液后(测胸水LDH与血LDH的比值，大于0.6则为渗出性胸腔积液)，按临床诊断标准分为结核性胸膜炎组(A组)和恶性胸腔积液组（B组），所有受试者均行外周血T-SPOT.TB试验、胸水ADA检验及胸水中结核杆菌培养。对于A组进行抗结核治疗12周后再次进行外周血T-SPOT.TB试验。

1.2 分组方法

（1）A组诊断依据∶①有消瘦、地热等结核菌中毒症状;②B超提示有胸腔积液；③胸水为渗出液（胸水中ADA≥45U/L）;④抗结核治疗后可见胸腔积液吸收，且症状明显好转;⑤胸水中癌细胞检查阴性;⑥痰中结核分枝杆菌涂片阳性或胸膜活检(如结核性肉芽肿等)明确诊断为结核病变;符合①一⑤或⑥[8-9]。

（2）B组诊断标准∶病理学或细胞学检查诊断为恶性胸腔积液，末经过治疗，既往无结核病病史与接触史，无活动性肺结核。

所选患者均无HIV感染。

1.3 试验方法

（1）T-SPOT.TB试验步骤∶采集4-6ml血液标本（使用肝素钠抗凝管），实验室提取外周血单个核细胞并计数;分别加入阳性对照孔（a孔），结核特异性抗原ESAT-6（b孔）和抗原CFP-10（c孔），空白对照孔（d孔）。放入37度恒温培养箱培养16-24 h。后加入酶和显色剂，使得测试孔显色产生斑点。根据斑点数判断结果∶a孔＜5时，b孔、c孔、或d孔的斑点数≥6时为阳性;如不符合以上要求，且阳性孔未见异常则为阴性。

（2）胸腔积液中腺苷脱氨酶(ADA)检测∶采用速率法检测，采集5ml胸腔积液样本,2000r/min离心10分钟后，再上清液，应用TBA-40FR生化分析仪进行分析，结果判断∶当ADA＞45U/L时为阳性，反之则为阴性。

（3）胸腔积液结核菌培养∶取5ml胸水于试管中进行消化处理，取0.5ml胸水，然后分别放入培养基内进行培养，培养阳性者均以鉴别培养基对其菌种进行鉴别，将非结核菌排除。

1.4 统计学方法

应用SPSS 19.0软件进行数据分析，p＜0.05有统计学意义。

2 结果

（1）A组34例患者均行外周血T-SPOT.TB试验、胸水ADA检测、胸水结核菌培养三种检验方法检测，其结果如下∶在A组34例患者中，外周血T-SPOT.TB试验∶阳性患者31例，阴性患者3例；胸水ADA检测∶阳性患者22例，阴性患者12例；胸水结核菌培养∶阳性患者5例，阴性患者29例，对于A组患者，外周血T-SPOT.TB试验的敏感性为91.1%（3134）,胸水ADA检测的敏感性为64.7%（2234），胸水结核菌培养的敏感性为14.7%（534）。外周血T-SPOT.TB试验与其他两种检验方法的敏感性比较如表1。

表1 外周血T-SPOT.TB试验与其他两种检验方法敏感性比较

由表1可知∶外周血T-SPOT.TB试验的敏感性高于胸水ADA（P＜0.05）；外周血T-SPOT.TB试验的敏感性高于胸水结核菌培养（P＜0.05）。

（2）B组11例患者均行外周血T-SPOT.TB试验、胸水ADA检测、胸水结核菌培养三种检验方法检测，其结果如下∶在A组11例患者中，外周血T-SPOT.TB试验∶阳性患1例，阴性患者10例；胸水ADA检测∶阳性患者8例，阴性患者3例；胸水结核菌培养∶阳性患者0例，阴性患者11例。对于B组患者外周血T-SPOT.TB试验的特异性为90.9%（1011）;胸水ADA检测的特异性为27.3%（311）；胸水结核菌培养的特异性为100%（1111），外周血T-SPOT.TB试验与其他两种检验方法的特异性比较如表2。

表2 外周血T-SPOT.TB试验与其他两种检验方法特异性比较

由表2可知∶外周血T-SPOT.TB试验的特异性高于胸水ADA（P＜0.05）；外周血T-SPOT.TB试验的特异性与胸水结核菌培养无明显区别（P＞0.05）。

3 结论

T-SPOT.TB试验是在2001年由Lalvani等人发明，并在4年后被美国食品药品管理局视作结核菌感染的快速诊断方法，近来已经在美国、欧洲等国家得到了一致认可。T-SPOT.TB试验原理基于以下2点∶(1)ESAT-6和CFP-10可刺激人体T淋巴细胞成为效应T细胞，进而产生γ因子；(2)T-SPOT.TB检测是由ELISPOT（一种新型的酶联免疫技术）发展而来的，通过此项技术检测产生γ干扰素的单个T细胞，进而判断机体是否处于结核菌感染状态。本实验结果显示，对于外周血T-SPOT.TB试验，无论是斑点形成数目还是阳性率，A组均高于B组。

Lee等对45例胸腔积液患者(其中20例确诊为结核性胸膜炎)的胸腔积液和外周血分别进行了T-SPOT.TB试验，胸腔积液T-SPOT.TB试验的敏感性、特异性分别为94.5%、80.7%，外周血T-SPOT.TB试验的敏感性、特异性分别为78.8%、89.5%，本实验的敏感性高于Lee等的研究结果，特异性与Lee等的研究结果相类似。Lois等认为胸腔积液中的单核细胞比外周血中的单核细胞更加具有诊断价值，但外周血T-SPOT.TB试验作为一种非创伤性检验手段，仍有其存在价值。

研究显示，效应T淋巴细胞伴随着结核菌存在或消失，因此检查效应T淋巴细胞也能判断人体有没有结核菌，进而进行治疗效果评定。因本实验实验对象较少，希望将来有更多的实验进一步支持。

综上所述，对于外周血T-SPOT.TB试验的优点总结如下∶(1)体外试验，非创伤性；（2）检测快速，检测全过程只需24一48h;(3)特异性高，不受卡介苗接种的影响，交叉反应较少;(4)敏感性高，可以从100 0000个细胞因子分泌细胞中检测出单个细胞。因此外周血T-SPOT.TB试验在结核性胸膜炎的诊断中具有较高的临床应用价值。

（作者单位：佳木斯大学）

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邹晓颖（1973～），女，在读研究生。

王柏欣（1969～），男，佳木斯大学硕士研究生导师，副教授，硕士。