HPLC测定夏枯草散结胶囊中熊果酸的含量

滕建良

（上海市宝山区中西医结合医院药剂科中药房，上海 201999）

HPLC测定夏枯草散结胶囊中熊果酸的含量

滕建良

（上海市宝山区中西医结合医院药剂科中药房，上海 201999）

目的 建立HPLC法测定夏枯草散结胶囊中熊果酸的含量。方法 采用C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相：甲醇-水(85∶12)，流速：1.0 mL/min，检测波长：210 nm的色谱条件测定熊果酸的含量。结果 熊果酸的线性范围为0.252～1.258 μg，r=0.9997，平均回收率为98.17%，RSD=1.36%。结论 该方法灵敏度高、分离度好、重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。

夏枯草散结胶囊；HPLC；熊果酸；中药化学

夏枯草散结胶囊系临床协定处方，由夏枯草、生牡蛎、当归、炮穿山甲、山慈菇、生山楂、半夏等15味中药组成的复方制剂，具有清热化痰、开郁散结的作用，临床上用于治疗甲状腺结节。夏枯草（Prunella vulgaris L.）为唇形科夏枯草属植物夏枯草的干燥果穗[1]。夏枯草含有丰富的三萜类、甾体类、黄酮类、多糖类、挥发油等化学成分，其中主要成分熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用[2]。现代临床多用夏枯草治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾病[3]。夏枯草为该处方中主要组成药物，为了控制该制剂的质量，采用HPLC测定该制剂中熊果酸的含量，该方法灵敏度高、分离度好、重现性好，操作简便，能有效地控制该制剂的质量，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 Agilent高效液相色谱仪 (四元泵，DAD检测器，自动进样器)，Agilent1200工作站；BP211D型电子分析天平 (德国Sartoius)；熊果酸对照品 (供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号742-200111)；夏枯草散结胶囊（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

1.2 研究方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Gemini C 18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水 (85∶12)；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长：210 nm；进样量10 μL。在此条件下，熊果酸与其他色谱峰分离良好，理论板数以熊果酸峰计算，应不低于3000。

1.2.2 对照品溶液的制备 取熊果酸对照品适量，精密称取熊果酸对照品5.0324 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（50.32 μg/mL）[4]。

1.2.3 供试品溶液制备 取本品适量，研细，取5 g，精密称定，置100 mL具塞三角锥形瓶中，加入50 mL甲醇，超声提取30 min，过滤。药渣加入50 mL甲醇超声处理30 min，过滤，合并滤液，滤液水浴蒸干，残渣用石油醚5 mL浸泡2次，每次2 min，仔细倾去石油醚，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL容量瓶中，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得[5]。

1.2.4 阴性对照试验 按处方取缺夏枯草的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与熊果酸相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰熊果酸的测定。

1.2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 μL进样，以峰面积 (Y)对进样量 (X)进行回归，熊果酸的回归方程为Y=886.9X-312.5，r=0.9997，表明进样量在0.252～1.258 μg呈良好的线性关系。

1.2.6 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样5次，测定熊果酸峰面积值，计算熊果酸RSD为1.19%(n=5)，表明仪器精密度良好。

1.2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定熊果酸峰面积，结果RSD为1.85%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

1.2.8 重复性实验 精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定熊果酸的含量，其RSD为1.94%，表明本方法重复性良好。

1.2.9 加样回收率实验 采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：170315） 研细，取约2.5 g，精密称定，精密加入熊果酸对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

1.2.10 样品测定 取3批样品，各取5 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10 μL进样。结果见表2。

表2 样品测定结果

2 讨论

本研究应用高效液相色谱法对夏枯草散结胶囊中熊果酸含量进行测定，通过线性、回收率、重复性、以及精密度实验等及其数据分析，可以得出该测定方法具有良好的线性及回收率高，本分析方法操作简便、快速、准确，可用于夏枯草散结胶囊质量控制。

本研究考察了甲醇、乙醇提取溶剂，结果甲醇为提取溶剂时，熊果酸的峰面积最大，本研究确定提取溶剂为甲醇。本研究还考察了30 mL，40 mL，50 mL，60 mL四个体积甲醇，结果表明提取溶剂体积为50 ml时，提取样品中熊果酸的效率最佳。另外，比较超声与回流2种提取方法，结果表明超声提取的效率要高于回流提取的提取率，故选择超声提取。还分别考察不同超声时间15 min，30 min，45 min和60 min，最终确定超声时间为30 min[6]。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：263.

[2]Kuttan G，Pratheeshkumar P，Manu KA，et al.Inhibition of tumor progression by naturally occurringterpenoids[J].Pharm Biol，2011，49(10):995-1007.

[3]邓子煜，徐先祥，张小鸿，等.夏枯草药理学研究进展[J].安徽医学，2012，33（7）：937-939.

[4]黄豪万，常明泉，李玲，等.颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定[J].实用药物与临床，2014，17（4）：469-471.

[5]郑单萍.高效液相色谱法测定夏枯草中熊果酸的含量[J].海峡药学，2012，24（9）：72-74.

[6]谢文剑，曹艺，柏玉冰，等.夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定[J].中国当代医药，2014，21(28):11-13.

Determination of Ursolic Acid in Prunella Sanjie Capsule by HPLC

TENG Jianliang

(Department of Pharmacy,Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Shanghai 201999,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of ursolic acid in prunella Sanjie capsule Methods The procedure of HPLC was performed on the chromatographic column of C 18(250 mm x 4.6mm,5 μm),and the mobile phase was methanol-water(85:12).The flow velocity was l mL／min and detection wave length was 210 nm.Results Ursolic acid showed good linear relationship in the range of 0.252～1.258μg,and the average recovery rate was 98.17%,RSD=1.36%.Conclusion The method has high sensitivity,good separation and good reproducibility,and can be used as the quality control method of the preparation.

Prunella Sanjie capsule;HPLC;ursolic acid;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.19.064

1672-2779（2017）-19-0145-02

2017-08-28）