仙方活命饮抗炎作用的实验研究※

周 明 邹 文 范少勇 候慧铭

（南昌市洪都中医院骨十科，江西 南昌 330006）

仙方活命饮抗炎作用的实验研究※

周 明 邹 文 范少勇 候慧铭

（南昌市洪都中医院骨十科，江西 南昌 330006）

目的 通过小鼠耳肿胀实验对仙方活命饮的抗炎作用进行探索，为外科感染的预防及治疗提出抗炎的新理念、新方法。方法 取30只小鼠随机均分为3组空白组（生理盐水）、实验组（仙方活命饮），阳性对照组（双黄连口服液）：采用二甲苯致小鼠耳肿胀的模型并观察仙方活命饮的作用。结果 小鼠耳肿胀度测定结果实验组与空白组比较有显著差异（P<0.05）。阳性对照组与空白组比较有显著差异（P<0.05）。而实验组与阳性对照组比较无显著差异（P>0.05）。结论 仙方活命饮对小鼠耳炎性水肿有显著的抑制作用。仙方活命饮具有抗菌消炎作用，能为清热解毒法的临床应用提供理论基础，并有望开创抗菌消炎药物的新时代。

清热解毒；抗生素；仙方活命饮；实验

抗菌药物自出现以来，为治疗感染性疾病提供了良好条件，并很大程度上帮助外科医生避免围手术期感染这个棘手问题的发生，成为外科手术中不可缺少的药品。而其中抗生素是围手术期抗菌药物的首选[1]，对许多严重的细菌性感染具有显著的效果，挽救了无数人的生命。但随着抗生素被广泛和大量的使用，其毒副作用也凸现出来。长时间使用抗生素，可致人体菌群的紊乱，并且产生耐药性，加大了二重感染的几率，重者甚至可导致耳聋等症状的出现[2]。这些危害，给治疗带来了难以攻克的难题。中药通过中医“君、臣、佐、使”的配伍特点，发挥仙方活命饮的临床功效。这也是应对目前多存在滥用抗菌素所带来的耐药等问题的研究方向，并有巨大的临床意义[3]。对推动我国抗炎免疫药理的发展及寻求更高效、低毒抗炎免疫药物起着重要作用。作为清热解毒的代表方仙方活命饮的临床疗效需要实验室的验证，对进一步了解其药理机制有着十分重要的意义。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 雄性C57BL/6小鼠，清洁级，体重：20~25 g（由南昌大学动科部提供）。在洁净、温度适中（饲养温度控制在22~25℃）、空气流通、相对湿度保持在50%~60%、无喧嚣吵杂的环境中饲养3 d。I在小鼠适应饲养环境后，将行动自如、无明显异常、状态良好的30只雄性C57BL/6小鼠选为实验小鼠。

1.1.2 主要药品及试剂 仙方活命饮（白芷6 g，贝母12 g，防风12 g，赤芍药12 g，当归尾12 g，甘草节12 g，皂角刺12 g，穿山甲12 g，天花粉12 g，乳香12 g，没药12 g，金银花18 g，陈皮18 g）由南昌市洪都中医院药房提供，批号：2016083012；双黄连口服液10支，由河南竹林众生制药股份有限公司生产，批准文号：（国药准字） Z10970127，包装规格10支×10 mL。

二甲苯（许可证号：XK13-201-00153）购自西陇化工股份有限公司；生理盐水购自四川科伦药业有限公司。

1.1.3 主要实验仪器及设备 AL104电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海） 有限公司），马头牌JYT-2架盘药物天平（上海医用激光仪器厂），YLS-Q4耳肿打孔器（淮北正华生物仪器设备有限公司），RE-52CS化验室旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），手术剪、镊子、灌胃针头、10 mL移液管、烧杯、玻璃棒、量筒、1 mL注射器、12号针头。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 取30只雄性C57BL/6小鼠随机均分3组：仙方活命饮组（实验组）、双黄连口服液组（阳性对照组）、生理盐水组 (空白对照组）。

1.2.2 仙方活命饮炮制 仙方活命饮由白芷6 g，贝母12 g，防风12 g，赤芍药12 g，当归尾12 g，甘草节12 g，皂角刺12 g，穿山甲12 g，天花粉12 g，乳香12 g，没药12 g，金银花18 g，陈皮18 g组成。利用南昌市洪都中医院门诊部药房炮制方法：煎煮前用蒸饱水浸泡1 h。第1次加入中药质量6倍的水（约900 mL），先武火煮至沸腾，再用文火煎30 min。收集水煎液用纱布过滤药液。再加入4倍量水（约600 mL)，浸泡30 min，先武火煮沸后转为文火煮30 min。收集水煎液用纱布过滤药液。合并2次水煎液。用旋转蒸发器将药液浓缩成20 mL（即每毫升药液含原生药1 g）。0.1 MPa，120℃条件下灭菌15 min，装瓶置4℃冰箱保存备用。

1.2.3 小鼠耳肿胀实验 1）抽取灌注液：用3支1 mL的注射器分别抽取灌胃液抽取实验组仙方活命饮液0.5 mL、实验组双黄连口服液0.5 mL、生理盐水0.5 mL。然后将注射器配灌胃的12号针头备用。

2）小鼠灌胃：将实验小鼠置于实验台上，左手的小指和环指夹住实验小鼠的尾巴，另外3只手指固定小鼠的颈部，令小数的头、颈和身体保持在一条直线上，并用力将小鼠身体拉直，力度适宜。右手持注射器，将灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，缓缓推入，进入食管后会有一种刺空感，进入食道后将药液推注进小鼠体内。灌胃完毕后要轻轻拨出胃管，并要尽量保持原灌胃姿势约30 s左右。

3）每次灌胃量为：0.5 mL/只，2次/d。连续5 d。

4）小鼠耳打孔：末次给药30 min后，每只小鼠约用0.04 mL的二甲苯均匀涂擦在左耳前后两面皮肤。1 h后颈椎脱臼处死3组小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，将A4纸垫于桌面，以直径8 mm打孔器于两耳相同部位冲出耳片。

5）称重：现将空白A4纸放于天平上，将A4纸的重量称出，记录重量；将肿胀的左耳耳片置于天平，将重量记录；将未涂二甲苯的右耳耳片置于天平，将重量记录。将两耳耳片记录的重量均减去A4纸的重量后，为最终左、右耳片的重量。

1.3 统计分析方法 精确到0.0001 g。耳肿胀度=左耳片重-右耳片重；抑制率=(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度×100%。运用SPSS 16.0 for Windows统计软件进行统计处理，均数±标准差 （x±s）表示参数，采用方差分析进行3组比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

表1 仙方活命饮对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

图1 实验各组对二甲苯所致小鼠肿胀度影响的比较

图2 3组对二甲苯所致小鼠肿胀度升高的抑制率比较

由以上3张图表可见生理盐水组的小鼠耳肿胀度为（8.27±0.84） mg；仙方活命饮组的小鼠耳肿胀度为（5.92±0.99） mg；双黄连口服液组的小鼠耳肿胀度为（5.83±1.33）mg。仙方活命饮组与生理盐水组比较有显著差异P=0.00（P<0.05）。双黄连口服液组与生理盐水组比较有显著差异P=0.00（P<0.05）。而仙方活命饮组与双黄连口服液组比较为无显著差异P=0.853（P>0.05）。从实验结果分析：（1）仙方活命饮组、双黄连口服液组与生理盐水组比较有统计学意义，仙方活命饮可降低小鼠耳肿胀。（2)仙方活命饮降低小鼠耳肿胀的作用与双黄连口服液相近。

3 讨论

目前学多研究者对仙方活命饮进行了系统性的研究，并取得一定的成果。研究显示仙方活命饮除了有直接抑菌作用外，对于痛风、慢性骨髓炎、痤疮等[61]多种疾病均有效，进一步说明了祖国医学里“异病同治”的科学性，因为中医讲究辨证论治，但功效如此强大的仙方活命饮现代医学机制尚不明确。本次实验采用经方仙方活命饮对于体内抗炎、体外抑菌研究，目的在于通过抗炎和抑菌效果的观察对于其机理做一个探索性研究，为围手术期感染的预防以及外科感染的治疗疗效进行验证，开创了抗炎的新理念、新方法。

临床上，对严重耐药菌的感染，西医临床缺乏有效手段，而清热解毒药与抗生素联合应用，既可利用抗生素的药理机制强效消灭细菌的功效，又可以使中医清热解毒药发挥将热毒外达于体外，加强自身免疫力的功效，做到菌毒并治，发挥祛邪不伤正的效果。有相关研究报道显示，中医清热解毒药不仅可以降低人体对药物的耐药性，还能加强抗生素的杀菌功效。尤其是组方或者经方，通过中医自身的配伍特点可大大提高药效，同时降低人体耐药性的产生，并对耐药菌的增敏有逆转作用。

通过小鼠耳肿胀实验，证明仙方活命饮对小鼠耳炎性水肿有显著的抑制作用，但本实验由于时间比较有限，样本数量限制，实验经验的缺乏，实验条件限制，以及尚无免疫调节机制的进一步研究。可能实验结果会有一些不可避免的误差，但如果该结论成立，我们就能够很好地解决细菌耐药问题，运用中医学的方法开辟抗炎新局面[4]。下一步研究工作就是在科学的方法指导下，建立合理的研究模型，进一步证明其作用机制。在抗生素滥用、“超级细菌”[5]产生的严峻形势下，开辟抗炎新模式、新方法，更好地继承和发扬中医学。

[1]李继勇，王满贞，陈义祥.围手术期抗菌药物合理应用探讨[J].2012，18（35）：133-135.

[2]孙涛.抗生素的使用与细菌耐药性[J].中国临床药理学杂志，2014，30(2):151-155.

[3]高雪，韩霞.仙方活命饮临床治验[J].中国中医药信息杂志，2010，17(1):79-79.

[4]叶桂彩.中医医院抗菌药物临床应用现状调查分析[J].当代医学:学术版，2008(1)：93-95.

[5]张巍，韩光宇.滥用抗生素催生“超级细菌”[J].中国医药指南，2012，10(11):376-377.

Experimental Study on Anti-inflammatory Effect of Xianfang Huoming Drink

ZHOU Ming,ZOU Wen,FAN Shaoyong,HOU Huiming
(Department of Orthopedics,Hongdu Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330006,China)

Objective Through the mouse ear swelling test,we made an exploratory research on Xianfang Huoming drink,and put forward new ideas for the prevention and treatment of anti inflammation,new method.Methods 30 mice were randomly divided into blank group (normal saline),experimental group (Xianfang Huoming drink)and positive control group (Shuanghuanglian oral liquid).We observed anti-inflammatory action of Xianfang Huoming drink through the model of xylene-induced ear edema in mice.Results There was significant difference between experimental group and blank control group on determination of edema of mouse ear(P<0.05).There was significant difference between the positive control group and the control group on determination of edema of mouse ear (P<0.05).There was no significant difference between the experimental group and the positive control group on determination of edema of mouse ear (P>0.05).Conclusion Xianfang Huoming drink could significantly inhibite inflammatory edema of mouse ear.The Xianfang Huoming drink had antibacterial anti-inflammatory effect.It could provide a theoretical basis for the clinical application of detoxification method,and is expected to be an usher in a new era of anti-bacterial anti-inflammatory drugs.

clearing heat-toxicity;antibiotic;Xianfang Huoming drink;experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.19.063

1672-2779（2017）-19-0143-03

江西省卫生计生委中医药科研课题【No.2016B103】

2017-08-24）