白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体及抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体的检测

韩莹 李铁男 刘文力 金春琳 程欣 刘奕 贺莎 吴善东

110003沈阳市第七人民医院皮肤科（韩莹、李铁男、刘文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（刘奕、贺莎、吴善东）

白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体及抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体的检测

韩莹 李铁男 刘文力 金春琳 程欣 刘奕 贺莎 吴善东

110003沈阳市第七人民医院皮肤科（韩莹、李铁男、刘文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（刘奕、贺莎、吴善东）

目的探讨白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体（TRP⁃1 IgG）与白癜风的关系。方法用酶联免疫吸附测定检测260例白癜风患者和50例健康对照血清中TYR IgG和TRP⁃1 IgG的含量。结果白癜风组TYR IgG和（或）TRP⁃1 IgG阳性率57.31%（149/260），TYR IgG阳性率37.3%（97/260），TRP⁃1 IgG阳性率33.5%（87/260），均明显高于对照组（χ2=25.441、21.630，P＜0.01）。TYR IgG阳性与TRP⁃1 IgG阳性不相关（r=-0.032，P＞0.05）。白癜风组TYR IgG阳性率男女间差异无统计学意义（P＞0.05），但TRP⁃1 IgG阳性率女性高于男性（χ2=5.811，P＜0.05）。白癜风TYR IgG阳性率 ≤ 20岁（35.9%）与＞20岁（38.3%）比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而TRP⁃1 IgG阳性率 ≤ 20岁组明显高于＞20岁组（χ2=6.498，P＜0.05）。结论检测TYR IgG和TRP⁃1 IgG可为白癜风的诊断和治疗提供一定依据。

白癜风；一元酚单氧酶；女性；青少年；抗酪氨酸酶IgG抗体；抗酪氨酸酶相关蛋白⁃1 IgG抗体

白癜风是一种常见的皮肤病，其病因有自身免疫、神经内分泌、自身细胞毒、黑素细胞破坏、遗传、病毒及其他学说，但没有一种学说能完整解释其发病机制。有研究显示，白癜风患者体内存在高滴度抗酪氨酸酶抗体（anti⁃tyrosinase IgG antibody，TYR IgG）［1⁃4］和抗酪氨酸酶相关蛋白 1 IgG 抗体（anti⁃tyrosinase⁃related protein⁃1 IgG antibody，TRP ⁃1 IgG）［1，3，5］，揭示白癜风与这 2种抗体水平有关。本研究检测了260例白癜风患者血清的TYR IgG和TRP⁃1 IgG，探讨与白癜风的关系。

一、对象与方法

1.对象：2012年6月至2013年12月，在沈阳市第七人民医院皮肤科就诊的白癜风患者260例中男132例，女128例，平均26岁（7个月至73岁）；按年龄分为≤20岁组106例，平均12.8岁；＞20岁组154例，平均34.4岁。健康对照组50例为健康体检者，其中男26例，女24例；≤20岁14例，＞20岁36例，平均24岁（2～62岁）。本研究通过本院医学伦理委员会批准，受检者均签署知情同意书。

2.试剂和仪器：TYR IgG和TRP⁃1 IgG试剂盒由杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司提供。PW⁃960型全自动96孔洗板机为深圳市汇松科技发展有限公司产品，MK3型酶标分析仪为美国Thermo公司产品。

3.方法：取白癜风患者及健康对照组外周血3 ml，分离血清置-70℃冰箱保存。血清中TYR IgG和TRP⁃1 IgG检测用酶联免疫吸附测定（ELISA）法，严格按照试剂盒说明书操作。血清50倍稀释作为样品，设立校准品，按常规ELISA法操作显色后于450 nm波长下测定吸光度（A值），以校准品浓度为X轴，对应的A值为Y轴。根据校准曲线求得样品测定浓度，乘以稀释倍数即为待测血清的TYR IgG和TRP⁃1 IgG的浓度。所有标本均检测3孔，数值取3孔均值。

4.统计学处理：数据用SPSS 19.0软件进行处理。检测数据用±s表示，阳性率比较用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

白癜风组与健康对照组的性别和年龄构成比较，差异无统计学意义（χ2=0.254，2.882，均P＞ 0.05）。健康对照组TYR IgG检测值为（17.920±4.297）U/ml，TRP⁃1 IgG为（14.251 ±6.172）U/ml，白癜风组 TYR IgG 检测值为（29.468±14.532）U/ml，TRP⁃1 IgG 为（26.159 ± 17.417）U/ml。取健康对照组的x+3×s为阳性阈值，TYR IgG和TRP⁃1 IgG的阳性阈值分别为30.811和32.767 U/ml。据此阳性阈值，白癜风组TYR IgG阳性率为37.31%（97/260），TRP⁃1 IgG的阳性率为33.46%（87/260），健康对照组阳性率均为0，比较差异有统计学意义（χ2=25.441，21.630，均P＜ 0.01）。白癜风组TYR IgG和（或）TRP⁃1 IgG阳性149例，占57.31%（149/260）。白癜风组TYR IgG阳性率与TRP⁃1 IgG阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=0.841，P＞0.05）。TYR IgG和TRP⁃1 IgG结果均为阳性的患者仅为35例，比率为13.5%（35/260）。Spearman相关性分析表明：TRP⁃1 IgG与TYR IgG检测结果不相关（r=-0.032，P=0.612）。见表1。

三、讨论

研究认为，白癜风的诸多发病原因中自身免疫占有重要地位［2⁃4，6］，甚至认为白癜风是一种自身免疫性疾病［2］。白癜风发病与黑素生物合成密切相关，黑素是以酪氨酸为基础物质合成的生物聚合体［7］，是一种胶体性色素，与金属离子有高度亲和力［2，8］，合成和沉积于黑素细胞的亚细胞器特殊的溶酶体黑素体内［7］。黑素形成需要多步生化反应，3种黑素生成相关酶TYR、TRP⁃1和TRP⁃2分别参与催化黑素形成多个反应中的3、1、1个不同反应，并发挥各自的作用。这3种蛋白都包含一个跨膜区和富含组氨酸、半胱氨酸的序列，相互作用，共同形成200 000～700 000的多聚体复合物，共同组成酪氨酸酶基因蛋白家族［7］。

据报道，白癜风患者TYR IgG阳性率为10.9%（5/46）［4］，36%（7/18）［2］，61%（16/26）［9］；本文为 37.31%，显著高于健康对照组（P＜0.01）；白癜风患者TRP⁃1 IgG阳性率为5.7%（3/53）［3］和34%（13/38）［5］，本文为33.46%，显著高于健康对照组（χ2=21.630，P＜0.01），与上述报道基本一致。各研究中TYR IgG和TRP⁃1 IgG的阳性率差异较大，可能与不同检测方法或患者分组［1］、地域、种族差异等原因有关。本文TYR IgG和（或）TRP⁃1 IgG阳性率达57.31%（149/260），支持白癜风的自身免疫学说。本文TYR IgG和TRP⁃1 IgG均阳性仅占13.46%（35/260），且Spearman相关性分析表明二者阳性不相关（r=-0.032，P＞0.05），提示TYR IgG与TRP⁃1 IgG在白癜风发病的自身免疫机制各自发挥不同的作用。本文白癜风组TRP⁃1 IgG阳性率女性高于男性，≤20岁组高于＞20岁组，提示TRP⁃1 IgG可能是女性和青少年白癜风发病的一个因素，对TRP⁃1 IgG相关的女性和青少年白癜风探讨更有效的临床治疗可能有指导意义。本研究仅限于沈阳地区，标本数量有限，尚待对白癜风患者的TYR IgG与TRP⁃1 IgG检测与白癜风的分型、分期、病程，治疗结果进行比较，研究其相关性。

表1 白癜风患者性别和年龄段抗酪氨酸酶抗体（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体（TRP⁃1 IgG）阳性率比较［例（%）］

［1］Kemp EH,Gavalas NG,Gawkrodger DJ,et al.Autoantibody responses to melanocytes in the depigmenting skin disease vitiligo［J］.Autoimmun Rev,2007,6（3）:138⁃142.DOI:10.1016/j.autrev.2006.09.010.

［2］Baharav E,Merimski O,Shoenfeld Y,et al.Tyrosinase as an autoantigen in patients with vitiligo［J］.Clin Exp Immunol,1996,105（1）:84⁃88.DOI:10.1046/j.1365⁃2249.1996.d01⁃727.x.

［3］Kemp EH,Waterman EA,Gawkrodger DJ,et al.Autoantibodies to tyrosinase⁃related protein⁃1 detected in the sera of vitiligo patients using a quantitative radiobinding assay［J］.Br J Dermatol,1998,139（5）:798⁃805.DOI:10.1046/j.1365⁃2133.1998.02503.x.

［4］Kemp EH,Gawkrodger DJ,MacNeil S,et al.Detection of tyrosinase autoantibodies in patients with vitiligo using 35S⁃labeled recombinant human tyrosinase in a radioimmunoassay［J］.J Invest Dermatol,1997,109（1）:69 ⁃73.DOI:10.1111/1523 ⁃1747.ep12276556.

［5］李廷慧,高天文,李春英,等.TRP⁃1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究［J］.中国皮肤性病学杂志,2004,18（5）:263⁃266.DOI:10.3969/j.issn.1001⁃7089.2004.05.003.

［6］洪为松,尉晓冬,周渭珩,等.白癜风患者血清中抗酪氨酸酶抗体及可溶性细胞间黏附分子1的检测［J］.中华皮肤科杂志,2005,38（10）:612⁃614.DOI:10.3760/j.issn.0412⁃4030.2005.10.005.

［7］del Marmol V,Beermann F.Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation［J］.FEBS Lett,1996,381（3）:165⁃168.DOI:10.1016/0014⁃5793（96）00109⁃3.

［8］Yaghoobi R,Omidian M,Bagherani N.Vitiligo:a review of the published work［J］.J Dermatol,2011,38（5）:419 ⁃431.DOI:10.1111/j.1346⁃8138.2010.01139.x.

［9］Song YH,Connor E,Li YX,et al.The role of tyrosinase in autoimmune vitiligo［J］.Lancet,1994,344（8929）:1049 ⁃1052.DOI:10.1016/S0140⁃6736（94）91709⁃4.

2017中国中西医结合皮肤性病学术年会征文通知

经中国中西医结合学会批准，中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会定于2017年4月20-24日在珠海维景国际大酒店召开中国中西医结合皮肤性病学术年会。此次会议将发扬历次年会的优良传统，注重中西医结合治疗皮肤病的新方法及新的研究进展等方面的学术交流，内容密切联系临床，切合皮肤科医师的实际需求，会议将邀请知名专家做特邀演讲，阐述皮肤科相关领域的最新研究进展，创造形式多样、内容充实、紧张热烈、活跃互动的学术交流形式，达到全国皮肤科中医、西医、中西医结合医师共同展现才华、获取知识和信息、增进友谊的目的，欲参加会议者请仔细阅读通知并在规定的时间按要求投稿。

一、投稿要求：①投稿内容：皮肤科基础研究论文、皮肤科临床诊断和治疗等方面的论文、典型与疑难病例等；②投稿方式：中文全文和400字以内的中文摘要，请通过电子邮件投稿，Email：pfkxh@126.com。来稿请注明2017会议征文，截稿日期：2017年3月1日；③会议交流形式：特邀讲演、大会发言、分会发言、书面交流。

二、联系方式：上海市黄浦区成都北路500号峻岭广场19楼1908室，上海长征医院《中国真菌学杂志》编辑部，邮编200003，Email：pfkxh@126.com，联系人：施慧，021-81885497，手机13764560811。

Detection of anti⁃tyrosinase IgG antibody and anti⁃tyrosinase⁃related protein⁃1 IgG antibody in sera of patients with vitiligo

Han Ying,Li Tienan,Liu Wenli,Jin Chunlin,Cheng Xin,Liu Yi,He Sha,Wu Shandong
Department of Dermatology,Shenyang No.7 People′s Hospital,Shenyang 110003,China（Han Y,Li TN,Liu WL,Jin CL,Cheng X）;Hangzhou Zheda Dixun Biological Gene Engineering Co.,Ltd,Hangzhou 310052,China（Liu Y,He S,Wu SD）

Li Tienan,Email:qiyuanmys@163.com

ObjectiveTo investigate relationships between serum levels of anti⁃tyrosinase IgG antibody（TYR IgG）as well as anti⁃tyrosinase⁃related protein⁃1 IgG antibody（TRP⁃1 IgG）and vitiligo.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to detect serum levels of TYR IgG and TRP⁃1 IgG in 260 patients with vitiligo and 50 health controls.The threshold for defining a positive test result was set at 3 standard deviations above the mean serum level of TYR IgG or TRP⁃1 IgG in the healthy controls.ResultsThe positive rate of TYR IgG and/or TRP⁃1 IgG in the vitiligo group was 57.31%（149/260）.The positive rates of TYR IgG and TRP⁃1 IgG were both significantly higher in the vitiligo group than in the control group（TYR IgG:37.3%［97/260］vs.0,χ2=25.441,P＜ 0.01;TRP⁃1 IgG:33.5%［87/260］vs.0,χ2=21.630,P＜ 0.01）.The positive rate of TYR IgG was not associated with that of TRP⁃1 IgG in the vitiligo group（r=-0.032,P＞ 0.05）.Among patients with vitiligo,the positive rate of TRP⁃1 IgG was significantly higher in females than in males（χ2=5.811,P＜ 0.05）,as well as in patients aged ≤ 20 years than in those aged ＞ 20 years（χ2=6.498,P＜ 0.05）,while the positive rate of TYR IgG didn′t differ between females and males,or between patients aged≤ 20 years and those aged＞20 years（bothP＞0.05）.ConclusionDetection of TYR IgG and TRP⁃1 IgG may provide some evidence for the diagnosis and treatment of vitiligo.

Vitiligo;Monophenol monooxygenase;Femininity;Adolescent;Anti⁃tyrosinase IgG antibody;Anti⁃tyrosinase⁃related protein⁃1 IgG antibody

李铁男，Email：qiyuanmys@163.com

10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2017.01.013

沈阳市科技计划项目（F14⁃158⁃9⁃10）

Fund program:Shenyang Science and Technology Plan Project（F14⁃158⁃9⁃10）

2016⁃04⁃13）

（本文编辑：吴晓初）