不同厂家柏子养心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量考察

吴军红，赵群涛，李启彬

(1．河南省驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店 463000； 2．河南省信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000)

不同厂家柏子养心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量考察

吴军红1，赵群涛2，李启彬1

(1．河南省驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店 463000； 2．河南省信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000)

目的建立同时测定柏子养心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Agilent Eclipse SBC18柱（250 mm ×4．6 mm，5 m），流动相为乙腈（A） －0．1% 磷酸溶液（B），梯度洗脱，流速 1．0 mL ／min，检测波长 290 nm，柱温 30 ℃。结果阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛进样量分别在 0．093 8 ～1．876 0 g(r＝0．999 9)，0．059 9 ～1．198 0 g(r＝0．999 9)，0．127 ～2．540 g(r＝0．999 9)范围内与峰面积线性关系良好；平均回收率分别为 98．65% ，98．67% ，99．02% ，RSD 分别为 0．88% ，1．12% ，1．04% （n ＝ 6）。结论该方法简单、准确、重复性好，可用于柏子养心丸的质量控制，测定结果反映出不同厂家生产的柏子养心丸质量有差异。

柏子养心丸；阿魏酸；肉桂酸；桂皮醛；含量测定

柏子养心丸为常用中药丸剂[1]，由柏子仁、党参、炙黄芪、川芎、肉桂、当归、酸枣仁、醋五味子等中药组方，用于心气虚寒、心悸易惊、失眠多梦、健忘等，具有补气、养血、安神的功效。方中川芎、肉桂具有活血、行气、补火助阳、引火归元，祛风、散寒、止痛，活血通经的功效，用于阳痿宫冷、腰膝冷痛、肾虚作喘、虚阳上浮、眩晕目赤、心腹冷痛、胸痹心痛，可改善心肌缺血[2－6]，作为主要药味及调和诸药，纠正各药偏性，其主要活性成分为阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛。目前，川芎和肉桂野生资源枯竭，多为人工栽培，不同产地药材含量差异较大，不同生产厂家采用不同产地的药材会影响柏子养心丸质量。原标准中无含量测定项，且未见同时测定柏子养心丸中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛的文献报道。为保证药品质量及患者的用药安全，有必要对市场上不同厂家柏子养心丸进行考察，为临床用药提供科学依据。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；超声波清洗器（功率为250 W，频率为33 kHz，昆山市超声仪器公司）；BP211D型电子天平（十万分之一，德国赛多利斯公司）。

1．2 试药

阿魏酸对照品（批号为 110773－201313，含量为99．6% ），肉桂酸对照品（批号为 110786 －200503），桂皮醛对照品（批号为 110710－201016，含量为 98．6%）均由中国食品药品检定研究院提供；柏子养心丸为市售品；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：AgilentEclipseSB－C18柱（250mm×4．6mm，5 μm）；流动相：乙腈（A） － 0．1% 磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～10 min，10% ～20%A；10～20 min，20% ～30%A；20～30 min，30% ～36%A；30～35 min，36% ～32%A）；检测波长：290 nm；流速：1．0 mL ／min；柱温：30 ℃。

2．2 溶液制备

对照品溶液：称取阿魏酸对照品18．76 mg、肉桂酸对照品 11．98 mg、桂皮醛对照品 25．40 mg，精密称定，同置200 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每 1 mL中含阿魏酸 0．093 8 mg、肉桂酸0．059 9 mg、桂皮醛 0．127 0 mg 的对照品溶液。

供试品溶液：取本品水蜜丸适量，粉碎，取约5．0 g，或取质量差异项下大蜜丸或小蜜丸5．0 g，剪碎，精密称定，加等量硅藻土，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，超声处理（功率为 250 W，频率为 33 kHz）30 min，放冷至室温，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液：除去处方中的川芎、肉桂，将其余药味按柏子养心丸制备工艺制备的阴性样品5．0 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按拟订色谱条件，自动进样10 μL，记录色谱图。结果阴性对照品溶液对测定无干扰，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取对照品溶液 1．0，2．0，5．0，10．0，20．0 μL，按拟订色谱条件自动进样，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标、进样量(X，μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程。结果见表1。

精密度试验：精密吸取上述对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录峰面积。结果阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛峰面积的 RSD 分别为 0．20%，0．21%，0．15%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取样品（批号为16093021）6份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果每片样品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量的平均值分别为 0．090，0．031，0．289mg／g，RSD 分别为 1．01%，0．95%，1．03%（n ＝6），表明方法重复性良好。

表1 线性关系考察结果

表2 加样回收试验结果（n＝6）

稳定性试验：取同一供试品（批号为16093021）溶液，按拟订色谱条件，分别于 0，1，3，6，9，12，18 h 时进样测定。结果供试品溶液中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量的 RSD 分别为 0．96%，1．22%，1．42%（n ＝6），表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛对照品适量，制成含阿魏酸 0．091 6 g／L、肉桂酸 0．031 0 g／L、桂皮醛0．225 0 g／L的混合对照品溶液。取样品（批号为16093021），依法制备供试品溶液，平行取样6份，各约5．0 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，再精密加入上述混合对照品溶液5 mL，按拟订色谱条件进样测定。结果见表2。

2．4 样品含量测定

取20批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件，对20批样品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛的含量进行测定。结果见表3。

3 讨论

3．1 检测波长选择

通过对阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛对照品溶液进行紫外扫描，发现其最大吸收波长分别为319，286，290 nm。故将阿魏酸、肉桂酸在290 nm处作为检测波长[7]；而桂皮醛在290 nm波长处检测灵敏度也较高，重复性、峰形和分离度也较好。因此选择290 nm作为测定3个活性成分的检测波长。

3．2 流动相选择

曾考察了乙腈－0．1%磷酸溶液[8]、乙腈 －0．2%磷酸溶液[9]、乙腈 －0．1%甲酸[10]、甲醇 －水 4种不同流动相系统，等度洗脱，样品目标峰与杂质峰有部分重叠，导致仪器重复性较差，因此选择梯度洗脱。分别比较了乙腈－0．1%磷酸溶液、乙腈 －0．2%磷酸溶液、乙腈 －0．1%甲酸 3个系统，发现乙腈（A）－0．1%磷酸溶液（B），按梯度洗脱（0～10 min，10% ～20%A；10～20 min，20% ～30%A；20～30 min，30% ～36%A；30～35 min，36% ～32%A）出峰时间较为合适，分离度好，理论板数高，阴性无干扰，故以此为流动相洗脱条件。

3．3 提取方法和溶剂选择

桂皮醛在甲醇中不稳定，在乙腈中较稳定[11]。提取过程中发现，乙腈提取阿魏酸含量较低；但甲醇和乙腈提取肉桂酸、桂皮醛差异不大，为了全面考虑，选择甲醇作为提取溶剂，并尽量缩短测样时间。曾比较超声提取和加热回流、索氏提取3种提取方式，结果表明，超声提取率高于加热回流和索氏提取，因此采用超声提取作为提取方法。

表3 20批样品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量测定结果（n＝6）

3．4 不同厂家产品分析

近年来，关于测定柏子养心丸中川芎有效成分含量较少，藁本内酯作为川芎中含量较高的成分，缺乏稳定性，对照品难以保存[12]。本研究中测定稳定的对照品阿魏酸用以比较制剂中川芎质量差异。目前，对柏子养心丸中肉桂的控制主要是测定肉桂酸和桂皮醛，梯度洗脱，同时测定其含量。结果表明，不同厂家柏子养心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛的含量差异较大，说明市售柏子养心丸存在质量差异。同时，反映出不同厂家所用的中药材质量有差异，药材在制备过程中干燥、粉碎、消毒等操作环节及内部质量控制方面存在一定差异，故有必要对其进行质量控制。

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[6]张翠英，章 洪，戚琼华．川芎的有效成分及药理研究进展[J]．辽宁中医杂志，2014，41(10):2264 －2266．

[7]黄 菲，杨 光．HPLC测定心痛宁喷雾剂中阿魏酸、肉桂酸的含量[J]．中国实验方剂学杂志，2015，21(2):74－76．

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Content Investigation of Ferulic Acid,Cinnamic Acid and Cinnamic Aldehyde in Baizi Yangxin Pills from Different Manufacturers

Wu Junhong1,Zhao Quntao2,Li Qibin1
(1．Zhumadian Institute for Food and Drug Control,Zhumadian,Henan,China 463000; 2．Xinyang Institute for Food and Drug Control,Xinyang Henan,China 464000)

Objective To establish an HPLC method for the simultancous determination of the contents of ferulic acid,cinnamic acid and cinnamic aldehyde in Baizi Yangxin Pills．Methods The chromatographic column was the Agilent Eclipse SB － C18column(250 mm×4．6 mm,5 μm)．The mobile phase consisted acetonitrile(solvent A) － 0．1% phosphoric acid(solvent B)with gradient elution,the flow rate was 1．0 mL ／min,the detection wavelength was 290 nm,the temperature of column was 30 ℃．Results Ferulic acid,cinnamic acid and cinnamic aldehyde showed good linear in the range of 0．093 8 － 1．876 0 μg(r＝ 0．999 9),0．059 9 －1．198 0 μg(r＝ 0．999 9),0．127 －2．540 μg(r＝0．999 9),respectively．The average recoveries were 98．65%,98．67%,99．02%,RSDs were 0．88%,1．12%,1．04%(n ＝ 6),respectively．Conclusion The method is simple,accurate,reproducible,which can be used for the quality control of Baizi Yangxin Pills．The results of content determination showed that the quality of Baizi Yangxin Pills varied from different manufactures．

Baizi Yangxin Pills;ferulic acid;cinnamic acid;cinnamic aldehyde;content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)19－0030－04

10．3969 ／j．issn．1006 － 4931．2017．19．008

吴军红，男，大学本科，主管药师，主要从事中药检验及质量标准研究和制订工作，（电子信箱）48042557＠qq．com。

2017－07－16)