高效液相色谱法测定黄连上清胶囊中连翘苷含量

周忆新，钟水生

（江苏省苏州市药品检验检测研究中心，江苏 苏州 215000）

高效液相色谱法测定黄连上清胶囊中连翘苷含量

周忆新，钟水生

（江苏省苏州市药品检验检测研究中心，江苏 苏州 215000）

目的建立测定黄连上清胶囊中连翘苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Boston C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈 －水 －冰醋酸（25∶75∶1），流速为 1.0 mL／min，检测波长为270 nm。结果连翘苷进样量在 0.723 0～7.230 g范围内与峰面积线性关系良好（r＝0.999 9），平均回收率为99.34%，RSD为1.16%（n＝6）。结论该方法简便、快速、重复性好，可用作黄连上清胶囊的质量控制。

高效液相色谱法；黄连上清胶囊；连翘苷；质量控制

黄连上清胶囊为复方中成药，其配方起源于黄连上清丸[1]，由大黄、连翘、菊花等17味中药组方，功效为清热泻火、散风止痛[2]。据报道，黄连上清软胶囊可以治疗牙周炎、玫瑰糠疹，且毒副作用小、疗效好[3－5]。连翘是其主要成分之一，连翘苷是连翘的有效成分[6]。本研究中通过高效液相色谱法测定连翘苷含量，进一步对黄连上清胶囊进行质量控制。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

e2695型高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；XS105DU型Mettler Toledo电子天平（梅特勒托利多仪器公司）。

1.2 试药

连翘苷对照品（中国食品药品检定研究院，含量为96.8%，批号为 201112）；黄连上清胶囊（市售，批号分别为 20150104，20150402，20151002）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Boston C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 －水 －冰醋酸（25∶75∶1）；检测波长：270 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL ／min；进样量：10 μL。在此色谱条件下，理论板数按连翘苷峰计算可达10 000以上。

2.2 溶液制备

对照品溶液：称取连翘苷对照品 7.23 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，得每1 mL含0.144 6 mg的溶液，即得。

供试品溶液：在室温条件下，取本品20粒（约8 g），置研钵中研细，精密称取样品，精密称定，置具塞锥形瓶中，再精密量取甲醇50 mL，置锥形瓶中，称定质量，浸渍过夜，每隔5～10 min超声处理样品，共60 min，称定质量，用甲醇补足减失的质量，溶液过滤，精密吸取续滤液5 mL，置沸腾水浴锅上，蒸发至近干时，加0.5 g氧化铝搅拌均匀，转移至中性氧化铝柱（100～120目，1 g，内径1 cm），70%乙醇100 mL洗脱，收集续滤液，至水浴蒸干，加50%甲醇溶解，再转移至5 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：取按样品制备工艺制备的缺连翘阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，进样测定。结果阴性对照品溶液在对照品溶液及供试品溶液色谱相应位置处无连翘苷峰出现，表明阴性对照无干扰，专属性良好。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取2.2项下对照品溶液5，10，20，30，50 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定峰面积。以对照品溶液的峰面积(Y)为纵坐标、进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y＝920 76 X－630 16，r＝0.999 9（n＝5）。结果表明，连翘苷进样量在0.723 0 ～ 7.230 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样5次。结果连翘苷峰面积的 RSD为0.27%（n＝5），表明仪器精密度良好。

图1 黄连上清胶囊高效液相色谱图

稳定性试验：取同一供试品溶液，于12 h内每隔2 h进样1次，共检测6次。结果连翘苷含量的 RSD为0.38%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：取同一批(批号为2150104)样品5份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果连翘苷平均含量为 69.92 μg／g，RSD ＝1.07% （n ＝ 5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取6份已知含量的样品（批号为 20150104）约 4 g，分别加入连翘苷对照品溶液1.5，2.0，2.5 mL，依法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取黄连上清胶囊3批，依法检测。结果批号为20150104，20150402，20151002的3批样品中连翘苷含量分别为 69.68，72.31，70.75 μg ／g。

3 讨论

黄连上清胶囊成分多达17种，提取分离较困难。本试验中参考相关文献及资料，尝试了 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），Galaksil EF － C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），Boston C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），Intersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）等品牌的色谱柱，发现Boston C18柱分离效果最好，稳定性强，基线和柱效明显优于另外几根柱子，符合连翘苷的含量测定要求。

黄连上清胶囊组分比较多，试验中曾尝试中药常用提取方法，如超声处理、加热回流等方法，但效果不太好，故采用孟建生等[7]选取的提取方法。基于此，可以思考能否对黄连上清胶囊的含量测定采用一测多评的方法，同时测定黄芩苷、连翘苷、栀子苷的含量，以黄芩苷为内参物[8]。许多试验结果可与本试验比较，以相互印证结果，这是本试验带给黄连上清胶囊有效成分测定的最大启发，也是下一步深入研究的方向。

[1]田 军，蒋珠芬，孙 备，等.黄连上清胶囊的临床研究[J].中药药理与临床，1999，15（3）：41 － 42.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1475－1476.

[3]田 军，蒋珠芬，杨士友.黄连上清胶囊药理作用的研究[J].中药药理与临床，1998，14（2）：9 － 11.

[4]赵春晖，张 黎，江崇英，等.黄连上清软胶囊治疗上焦风热证（牙周炎）的临床分析[J].齐齐哈尔医学院学报，2007，28（6）：648 － 650.

[5]郑优成.黄连上清胶囊治疗玫瑰糠疹的疗效观察[J].安徽医药，2010，14（4）：455 － 456.

[6]李 双，王东强，李志军.连翘主要有效成分的提取与药理作用[J].黑龙江中医药，2011，40（2）：46 － 47.

[7]孟建生，何 波，蒋建春.高效液相色谱法测定黄连上清片中栀子苷的含量[J].中国药业，2013，22（21）：30 － 31.

[8]张振巍，张娜娜，白丹丹.一测多评法测定清热解毒口服液中 4 种成分的含量 [J].中国药房，2013，24（28）：2676－2678.

Content Determination of Phillyrin in Huanglianshangqing Capsule by HPLC

Zhou Yixin，Zhong Shuisheng
（Suzhou Institute for Drug Control，Suzhou，Jiangsu，China 215000）

Objective To establish an HPLC method for content determination of phillyrin in Huanglianshangqing Capsule.Methods The Boston C18column （250 mm ×4.6 mm，5 μm） was adopted with the mobile phase of acetonitrile－ water－glacial acetic acid（25 ∶75 ∶1）， the flow rate was 1.0 mL ／min，the detection wavelength was 270 nm.Results Phillyrin showed the linear relationship within the range of 0.7230 －7.230 μg（r＝ 0.999 9），and the average recovery was 99.34% ， RSD ＝1.16% （n ＝ 6）.Conclusion The method is simple，rapid and accurate，which can be used for the quality control of Huanglianshangqing Capsule.

HPLC；Huanglianshangqing Capsule；phillyrin；quality control

R284.1

A

1006－4931(2017)20－0044－02

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.012

2017－07－10)