痛风灵胶囊质量标准研究

陈武军

（福建省漳州市中医院，福建 漳州 363000）

痛风灵胶囊质量标准研究

陈武军

（福建省漳州市中医院，福建 漳州 363000）

目的建立痛风灵胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）法对痛风灵胶囊方中的肿节风、红花、两面针进行定性鉴别，对其中红花的主要成分羟基红花黄色素A用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定。结果肿节风、红花、两面针的TLC鉴别效果良好，专属性强，分离度高，且阴性对照无干扰；羟基红花黄色素A进样量在0.307 2～1.536 0 g范围内与峰面积值线性关系良好，平均回收率为98.16%，RSD＝0.90%（n＝9）。结论该方法能快速、准确地对痛风灵胶囊进行定性、定量检测，可作为痛风灵胶囊的质量控制方法。

痛风灵胶囊；肿节风；红花；两面针；羟基红花黄色素A；质量标准

痛风灵胶囊是由肿节风、两面针、红花等7味中药组方的医院制剂，具有活血化瘀、凉血解毒之功效，对痛风性关节炎有良好的疗效[1]。为了较好地控制该制剂的质量，本研究中采用薄层色谱（TLC）法对痛风灵胶囊中的肿节风、红花、两面针进行定性鉴别，对痛风灵胶囊中红花的主要成分羟基红花黄色素A采用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定[2]，以建立简便快捷、准确、专属性强、重复性好的质量控制方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

薄层自动成像系统（Camag TLC Visualizer，Chromatography Planar公司）；KQ－250B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；BS110S型万分之一天平（赛多利斯公司）；Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；AE－240型十万分之一电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）[3]。

1.2 试药

羟基红花黄色素A对照品（批号为111637－201207，供测定含量用)，异嗪皮啶对照品（批号为110837－200304），红花对照药材（批号为 120907－201111），两面针对照药材（批号为 121014－201003），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯。痛风灵胶囊样品（批号分别为 20161101，20161102，20170101，规格为每粒 0.45 g），阴性对照样品，均由本院制剂中心提供。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 肿节风

取痛风灵胶囊内容物2 g，加30 mL水，微热使其溶解，滤过，每次取续滤液30 mL，用乙酸乙酯振摇萃取2次，合并2次萃取液，加热蒸干，残渣加1 mL甲醇搅拌溶解，作为供试品溶液[4]。同法制备缺肿节风的阴性对照品溶液。另取异嗪皮啶对照品0.5 mg，加1 mL甲醇制成对照品溶液。按2015年版《中国药典（四部）》通则0502薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（9 ∶4 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置 365 nm 波长紫外光灯下检视。供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点[5]，阴性对照品溶液色谱在此处则无相应斑点出现，阴性对照无干扰。结果见图1A。

2.1.2 红花

取痛风灵胶囊内容物4 g，加80%丙酮溶液20 mL，加塞盖紧，用超声波处理30 min，静置，吸取上清液，作为供试品溶液[6]。同法制备缺红花的阴性对照品溶液。再取红花对照药材 0.5 g，加80%丙酮溶液 5 mL，加塞盖紧，用超声波处理30 min，静置，吸取上清液，作为对照药材溶液。按2015年版《中国药典（四部）》通则0502薄层色谱法试验，吸取上述痛风灵胶囊供试品溶液、缺红花的阴性对照品溶液、红花对照药材溶液各4 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇（7 ∶2 ∶3 ∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品溶液色谱中，与红花对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点[7]，阴性对照品溶液色谱在此处无相应斑点出现，阴性对照无干扰。结果见图1B。

2.1.3 两面针

取痛风灵胶囊内容物2 g，加2 mL浓氨试液和30 mL氯仿，加热回流30 min，放至室温，滤过，取续滤液加热蒸干，残渣加1 mL乙醇搅拌溶解，作为供试品溶液。同法制备缺两面针的阴性对照品溶液。另取两面针对照药材1 g，加40 mL乙醇，超声处理60 min，滤过，取续滤液加热蒸干，残渣加1 mL乙醇搅拌溶解，作为对照药材溶液[6]。按2015年版《中国药典（四部）》通则0502薄层色谱法试验，吸取上述痛风灵胶囊供试品溶液、缺两面针的阴性对照品溶液、两面针对照药材溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－浓氨试液（30 ∶1 ∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10% 硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰，置365 nm紫外光灯下检视[8]。供试品溶液色谱中，与两面针对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。结果见图1C。

2.2 羟基红花黄色素A含量测定(HPLC法)

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Lichrospher－ C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm，江苏汉邦科技有限公司）；流动相：甲醇－乙腈－0.7% 磷酸溶液（26 ∶2 ∶72）；检测波长：403 nm；流速：1 mL ／min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

对照品溶液：取对照品羟基红花黄色素A适量，精密称定质量，用25%甲醇制成每1 mL含0.153 6 mg的溶液，即得[9]。

供试品溶液：称取装量差异下的痛风灵胶囊内容物约2g，精密称定，置50mL带塞容量瓶中，精密加入25%甲醇至50mL，加塞盖紧，精密称定质量，超声处理40min，在室温下放冷，再精密称定质量，用25%甲醇补足减失的质量，振摇混合均匀，离心，取上清液，即得[10]。

阴性对照品溶液：取按痛风灵胶囊处方（缺红花）和工艺制备阴性对照样品约2 g，精密称定质量，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验：分别精密吸取上述羟基红花黄色素A对照品溶液、痛风灵胶囊供试品溶液及缺红花的阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定。结果表明，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应保留时间处有相同的色谱峰，阴性对照品溶液色谱在此处则无吸收峰出现，说明阴性对照无干扰[11－12]。详见图 2。

图1 痛风灵胶囊薄层色谱图

线性关系考察：分别精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液（0.153 6 g ／L）2，4，6，8，10 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定，以峰面积积分值(Y)为纵坐标、羟基红花黄色素A进样量（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝2 954.6 X＋0.76，R2＝1.000 0（n＝5）。结果表明，羟基红花黄色素A进样量在0.3072～1.536 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好[13]。详见图3。

图2 羟基红花黄色素A含量测定高效液相色谱图

图3 羟基红花黄色素A标准曲线

精密度试验：精密吸取对照品溶液（0.153 6 g／L）5 μL，按拟订色谱条件连续进样6次，测定。结果羟基红花黄色素A峰面积的 RSD为0.26%(n＝6)，表明仪器精密度良好。详见表1。

表1 精密度试验结果(n＝6)

重复性试验：取同一批（批号为20170101）样品6份，每份约2 g，精密称定质量，置50 mL带塞容量瓶中，依法制备供试品溶液50 mL，按拟订色谱条件，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，并计算含量。结果痛风灵胶囊中羟基红花黄色素A的平均含量为0.865 3 μg，RSD 为 0.19%(n ＝ 6)，表明该方法的重复性良好。详见表2。

表2 重复性试验结果

稳定性试验：取同一批（批号为20170101）痛风灵胶囊内容物约2 g，精密称定质量，置50 mL带塞容量瓶中，依法制备供试品溶液50 mL，按拟订色谱条件，精密吸取 10 μL 注入液相色谱仪，于 0，2，4，8，12，24 h 时进样，测定峰面积。结果羟基红花黄色素A含量的 RSD为0.11%(n ＝ 6)，表明供试品溶液在 24 h 内稳定[14]。详见表3。

表3 稳定性试验结果(n＝6)

加样回收试验：取已知含量（批号为20170101，羟基红花黄色素A含量为2.163 mg／g）的痛风灵胶囊样品约1 g，平行取9份，精密称定质量，置50 mL带塞容量瓶中，分别精密加入适量的对照品羟基红花黄色素A，依法制备供试品溶液50 mL，按拟订色谱条件，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，计算回收率。结果见表4。

表4 羟基红花黄色素A加样回收试验结果(n＝9)

2.2.4 样品测定及含量限度确定

取3个批次的样品各约2 g，精密称定质量，置50 mL带塞容量瓶中，依法制备供试品溶液50 mL，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定羟基红花黄色素A的含量。结果见表5。我院制剂痛风灵胶囊是由肿节风、红花、两面针等7味中药经现代工艺加工而制成，因样品批次较少，根据上述3批次测定结果，在最低含量的基础上再下浮30%，暂定每1 g痛风灵胶囊中含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于1.4 mg。

表5 3批样品含量测定结果（mg／g，n＝3）

3 讨论

我院中药制剂痛风灵胶囊原有省局的质量标准比较低，且只有显微鉴别和1个薄层定性鉴别。为了提高内控标准，使本制剂质量能达到安全、有效、可控的目的，本试验中采用薄层色谱法对肿节风、红花、两面针进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对红花的羟基红花黄色素A进行定量测定。因为红花的有效成分羟基红花黄色素A成分明确，标准品容易获得；且红花属于芳香挥发性中药，容易在药材前处理、粉碎、半成品干燥时使有效成分损失，故需要对红花进行定量测定。

痛风灵胶囊中两面针的定性鉴别，加入氨水预饱和可提高比移(Rf)值。由于硅胶G板呈酸性，生物碱做薄层鉴别时易与酸反应生成盐，难以展开。加入氨水预饱和，相似相溶，展开效果较好，或以一定浓度的NaOH溶液喷硅胶G板使其呈碱性。

参考 2015年版《中国药典(一部)》中肿节风的含量测定方法，以异嗪皮啶为对照品进行试验，结果显示阴性干扰太大，故该试验结果不可用。

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Quality Standard of Tongfengling Capsules

Chen Wujun
（Zhangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhangzhou，Fujian，China 363000）

Objective To establish the quality standard of Tongfengling Capsules.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification of Herba sarcandrae，Carthamus tinctorius and Radix zanthoxyli in Tongfengling Capsules and HPLC method was adopted for the content determination of hydroxysafflor yellow A in Tongfengling Capsules.Results The result of TCL for the identification of Herba sarcandrae， Carthamus tinctorius and Radix zanthoxyli was good with an obvious specificity and good separation，and there was no negative interference.Hydroxysafflor yellow A showed good linear relation in the range of 0.307 2 － 1.536 0 μg，the average recovery was 98.16% and RSD was 0.90% （n ＝ 9）.Conclusion The method is rapid and accurate for the qualitative and quantitative detection of Tongfengling Capsules，which can be used for the quality control of Tongfengling Capsules.

Tongfengling Capsules； Herba sarcandrae； Carthamus tinctorius； Radix zanthoxyli；hydroxysafflor yellow A；quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)20－0021－04

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.006

陈武军（1978－），男，大学本科，主管中药师，研究方向为中药制剂生产、工艺与质量标准，（电话）0596－2898923（电子信箱）39975503＠ qq.com。

2017－07－16)