藏药印度獐芽菜石油醚部位化学成分及体外活性研究

尤蓉蓉+陈雪晴+何丹丹+黄长高+金阳+钱士辉+鞠建明+范君婷

[摘要] 采用各种柱色谱以及重结晶等方法对印度獐芽菜石油醚萃取部位进行化学成分研究。通过理化性质和波谱数据分析鉴定了15个化合物，包括8个酮，2个三萜，1个裂环烯醚萜，1个香豆素和3个其他类化合物，分别为1，8-二羟基-3，5-二甲氧基酮（1）、1-羥基-3，7，8-三甲氧基酮（2）、1，8-二羟基-3，5，7-三甲氧基酮（3）、1-羟基-3，5，7，8-四甲氧基酮（4）、1，5，8-三羟基-3-甲氧基酮（5）、1-羟基-3，7-二甲氧基酮（6）、1，8-二羟基-3，7-二甲氧基酮（7）、1-羟基-3，5-二甲氧基酮（8）、古柯二醇（9）、齐墩果酸（10）、（±）-龙胆内酯（11）、东莨菪内酯（12）、芥子醛（13）、丁香醛（14）、β-谷甾醇（15）。其中化合物3，4，9，11～14为首次从该植物中分离得到，化合物9和12为首次从獐芽菜属中发现。对5个量大酮1，2，5，7，8进行体外活性测试，结果显示其在最高浓度50 μmol·L-1对胰腺癌细胞SW1990和BxPC-3的增殖和过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉融合细胞EA.hy926氧化应激损伤均无明显作用。

[关键词] 印度獐芽菜； 酮； 石油醚部位； 化学成分； 胰腺癌细胞； 氧化应激损伤

[Abstract] The present work is to study the chemical constituents from petroleum ether fraction of Tibetan medicine Swertia chirayita by column chromatography and recrystallization. The structures were identified by physical and chemical properties and spectral data as swerchirin （1）， decussatin （2）， 1，8-dihydroxy-3，5，7-trimethoxyxanthone （3）， 1-hydroxy-3，5，7，8-tetramethoxyxanthone （4）， bellidifolin （5）， 1-hydroxy-3， 7-dimethoxyxanthone （6）， methylswertianin （7）， 1-hydroxy-3，5-dimethoxyxanthone （8）， erythrodiol （9）， oleanolic acid （10）， gnetiolactone （11）， scopoletin （12）， sinapaldehyde （13）， syringaldehyde （14）， and β-sitosterol （15）. Compounds 3， 4， 9， 11-14 were isolated from S. chirayita for the first time. Compounds 9 and 12 were firstly isolated from the genus Swertia. The cytotoxic activities of compounds 1， 2， 5， 7 and 8 against human pancreatic cancer cell lines SW1990 and BxPC-3，and the protective effects of these compounds against hydrogen peroxide （H2O2）-induced oxidative stress in human endothelium-derived EA.hy926 were investigated in vitro. The results showed no obvious effect at the high concentration of 50 μmol·L-1

[Key words] Swertia chirayita； xanthone； petroleum ether fraction； chemical constituents； pancreatic cancer cells； oxidative stress damage

印度獐牙菜Swertia chirayita （Roxb. ex Fleming） H. Karst.，藏语名“甲蒂”，为龙胆科植物印度獐牙菜的干燥全草，主要分布在克什米尔至不丹的喜马拉雅温带地区，主产于印度、尼泊尔和不丹，是藏医药治疗肝胆疾病的首选药物，在印度传统医药中也广泛应用^[1]。藏药经典著作《月王药诊》、《四部医典》、《晶珠本草》及《蓝琉璃·论说续》等均收载其清肝利胆、退诸热的功效，临床上用于治疗肝炎，肝硬化，胆囊炎，胆结石等疾病^[2]。目前印度獐牙菜化学成分研究很少，主要报道了酮、环烯醚萜及少量三萜、甾醇等^[3-5]。现代药理作用研究表明其具有抗肝炎、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血糖等作用^[6-8]。为了进一步阐明其药效物质基础，本研究应用现代分离分析技术，对其85%乙醇提取物的石油醚萃取部位进行化学成分分离，得到并鉴定15个化合物，包括8个酮，表明酮类是石油醚部位的主要成分。另外，7个化合物从该种首次分离，2个化合物从獐芽菜属首次分离。本研究还对其中5个主要酮进行体外肿瘤细胞毒和抗氧化应激损伤的活性筛选，结果发现无明显作用。

1 材料

Agilent Technologies 6410 Triple quad LC/MS液质联用仪（美国Agilent公司）；BRUKER AVANCE Ⅲ-600型核磁共振仪（德国Bruker 公司）；SGW-1型自动旋光仪（上海仪电物理光学仪器有限公司）；LNC自动纯化系统（美国LNC）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia公司）；MCI填充材料（Wharton Scientific，南京元宝峰医药科技有限公司）；薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；柱色谱硅胶（青岛美高集团有限公司）；旋转蒸发仪RE-52A （上海亚荣生化仪器厂）；DMEM（美国Hyclone公司）；MTT（美国Thermo公司）；胎牛血清（以色列Biological industries公司）；Multiskan FC全自动酶标仪（美国Thermo公司）；细胞株SW1990细胞、BxPC-3细胞和EA.hy926细胞购自中科院上海细胞生物学研究所。常规试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

印度獐芽菜购自西藏多雄拉藏药有限公司（批号201411011），经江苏省中医药研究院钱士辉研究员鉴定为龙胆科植物印度獐牙菜S. chirayita的干燥全草。药材标本存放于江苏省中医药研究院标本室。

2 提取与分离

印度獐芽菜的干燥全草30 kg，粉粹后用10倍量的85%乙醇回流提取2次，每次3 h，提取液经减压回收乙醇，浓缩得浸膏约3 kg。将浸膏混悬于水中，分别用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂浓缩得到石油醚部位52 g、醋酸乙酯部位432 g、正丁醇部位1 094 g。其中石油醚部位浸膏（52 g），经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脱，得到18个组分（Fr.1～Fr.18）。Fr.10（7.4 g）经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶1）梯度洗脱，得到13个组分（Fr.10.1～Fr.10.13）。Fr.10.10（1.0 g）经甲醇重结晶后，得到化合物1（610 mg），母液减压浓缩（0.3 g）经硅胶柱色谱，石油醚-二氯甲烷（3∶1）等度洗脱，得到化合物7（50 mg）和8（80 mg）。Fr.10.11（0.35 g），经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（15∶1～0∶1）梯度洗脱，得到化合物15（35 mg）。Fr.10.13（20 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱，得到化合物6（8 mg）。Fr.12（2.3 g）经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（60∶1～10∶1）梯度洗脱，得到14个组分（Fr.12.1～Fr.12.14）。Fr.12.9（1.2 g）经MCI树脂柱色谱，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脱，得到15个组分（Fr.12.9.1～Fr.12.9.15）。Fr.12.9.4（0.4 g）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-醋酸乙酯（6∶1～0∶1）梯度洗脱，得到化合物2（25 mg）和9（5 mg）。Fr.13（0.3 g）经MCI树脂柱色谱，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脱，得到4个组分（Fr.13.1～Fr.13.4）。Fr.13.2（50 mg）为甲醇-水（60∶40）流分，经硅胶柱色谱，石油醚-二氯甲烷（3∶1～1∶1）梯度洗脱，得到化合物3（8 mg）和4（10 mg）。Fr.13.3（0.1 g）为甲醇-水（80∶20）流分的白色絮状物，过滤干燥得到化合物10（20 mg）。Fr.15（2.8 g）经MCI树脂柱色谱，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脱后，得到6个组分（Fr.15.1～Fr.15.6）。Fr.15.4（0.7 g）经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脱，得到化合物5（120 mg）。Fr.16（1.1 g）经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（50∶1～1∶1）梯度洗脱，得到3个组分（Fr.16.1～Fr.16.3）。Fr.16.2（0.2 g）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱，得到化合物14（10 mg）。Fr.16.3（0.1 g）经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（5∶1～1∶1）洗脱，得到化合物13（5 mg）。Fr.17（0.5 g）经MCI树脂柱色谱，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脱后，得到9个组份（Fr.17.1～Fr.17.9）。Fr.17.1（150 mg）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（0∶1～1∶1）洗脱，得到3个组份（Fr.17.1.1～Fr.17.1.3）。Fr.17.1.2（56 mg）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（5∶1）等度洗脱，得到化合物11（7 mg）。Fr.17.7（35 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱，得到化合物12（10 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 287 [M-H]-。1H-NMR （CDCl3，600 MHz） δ： 11.92 （1H，s，1-OH），11.33 （1H，s，8-OH），7.16 （1H，d，J=8.9 Hz，H-6），6.65 （1H，d，J=8.9 Hz，H-7），6.48 （1H，d，J=2.0 Hz，H-4），6.28 （1H，d，J=2.0 Hz，H-2），3.89 （3H，s，5-OCH3），3.82 （3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR （CDCl3，150 MHz） δ： 161.8 （C-1），96.9 （C-2），166.4 （C-3），92.1 （C-4），156.7 （C-4a），144.3 （C-4b），138.8 （C-5），119.2 （C-6），108.3 （C-7），153.0 （C-8），107.1 （C-8a），101.8 （C-8b），183.5 （C-9），55.0（3-OCH3），56.3（5-OCH3）。以上數据与文献报道^[9-10]对比，鉴定为1，8-二羟基-3，5-二甲氧基酮。

化合物2 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 303 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.19（1H，s，1-OH），7.26（1H，d，J=9.2 Hz，H-6），7.09（1H，d，J=9.2 Hz，H-5），6.26（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.23（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，8-OCH3），3.86（3H，s，7-OCH3），3.80（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 164.0（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.2（C-4），157.3（C-4a），151.1（C-4b），113.0（C-5），120.5（C-6），149.4（C-7），149.0（C-8），115.9（C-8a），104.2（C-8b），181.4（C-9），56.0（3-OCH3），57.3（7-OCH3），62.0（8-OCH3）。以上数据与文献报道^[9]对比，鉴定为1-羟基-3，7，8-三甲氧基酮。

化合物3 黄色粉末。ESI-MS m/z 319 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 11.97（1H，s，1-OH），11.57（1H，s，8-OH），7.03（1H，s，H-6），6.50（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.33（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.97（3H，s，-OCH3），3.95（3H，s，-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.8（C-1），97.7（C-2），167.5（C-3），92.9（C-4），157.9（C-4a），139.3（C-4b），139.1（C-5），108.0（C-6），142.0（C-7），143.4（C-8），108.2（C-8a），102.5（C-8b），184.9（C-9），57.5（-OCH3），56.0（-OCH3），57.8（-OCH3）。以上数据与文献报道^[11-12]对比，鉴定为1，8-二羟基-3，5，7-三甲氧基酮。

化合物4 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 333 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.20（1H，s，1-OH），6.98（1H，s，H-6），6.47（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.32（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），4.01（3H，s，8-OCH3），3.95（3H，s，5-OCH3），3.93（3H，s，7-OCH3），3.87（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.6（C-1），97.4（C-2），166.4（C-3），92.1（C-4），156.9（C-4a），141.5（C-4b），148.7（C-5），105.2（C-6），141.1（C-7），144.5（C-8），116.1（C-8a），104.2（C-8b），181.1（C-9），55.8（3-OCH3），56.9（5-OCH3），57.7（7-OCH3），61.9（8-OCH3）。以上数据与文献报道^[13]对比，鉴定为1-羟基-3，5，7，8-四甲氧基酮。

化合物5 黄色粉末。ESI-MS m/z 273 [M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz） δ： 11.88（1H，s，1-OH），11.05（1H，s，8-OH），9.68（1H，s，5-OH），7.24（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），6.62（1H，d，J=8.8 Hz，H-7），6.58（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.88（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz） δ： 161.9（C-1），97.5（C-2），167.1（C-3），93.0（C-4），157.4（C-4a），143.4（C-4b），137.3（C-5），123.8（C-6），109.5（C-7），151.8（C-8），107.5（C-8a），102.1（C-8b），184.1（C-9），56.2（3-OCH3）。以上数据与文献报道^[14]对比，鉴定为1，5，8-三羟基-3-甲氧基酮。

化合物6 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.88（1H，s，1-OH），7.61（1H，d，J=3.0 Hz，H-8），7.37（1H，d，J=9.1 Hz，H-5），7.31（1H，dd，J=9.1，3.0 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.36（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.91（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.4（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.5（C-4），157.8（C-4a），156.0（C-4b），119.0（C-5），124.9（C-6），150.8（C-7），105.2（C-8），120.9（C-8a），103.7（C-8b），180.6（C-9），55.8（3-OCH3），55.9（7-OCH3）。以上数据与文献报道^[15]对比，鉴定为1-羟基-3，7-二甲氧基酮。

化合物7 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 289[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.09（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.25（1H，d，J=9.0 Hz，H-6），6.83（1H，d，J=9.0 Hz，H-5），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.31（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.9（C-1），97.2（C-2），167.4（C-3），92.9（C-4），158.1（C-4a），149.6（C-4b），105.6（C-5），120.3（C-6），142.9（C-7），150.1（C-8），107.7（C-8a），102.3（C-8b），185.0（C-9），55.9（3-OCH3），57.0（7-OCH3）。以上數据与文献报道^[9，16]对比，鉴定为1，8-二羟基-3，7-二甲氧基酮。

化合物8 黄色针晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.82（1H，s，1-OH），7.80（1H，br d，J=7.9 Hz，H-8），7.29（1H，t，J=7.9 Hz，H-7），7.22（1H，br d，J=7.9 Hz，H-6），6.55（1H，d，J=1.8 Hz，H-4），6.35（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），4.02（3H，s，3-OCH3），3.88（3H，s，5-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ：163.3（C-1），97.5（C-2），166.7（C-3），92.8（C-4），157.5（C-4a），146.2（C-4b），148.2（C-5），115.6（C-6），123.6（C-7），116.7（C-8），121.5（C-8a），103.9（C-8b），180.8（C-9），55.3（3-OCH3），56.4（5-OCH3）。以上数据与文献报道^[17]对比，鉴定为1-羟基-3，5-二甲氧基酮。

化合物9 白色粉末。ESI-MS m/z 443 [M+H]+，487.4 [M+COO]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.19（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），3.55（1H，d，J=11.0 Hz，H-28a），3.21（1H，d，J=11.0 Hz，H-28b），3.21（1H，m，H-3），1.16（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-24），0.94（3H，s，H-26），0.93（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-30），0.87（3H，s，H-29），0.79（3H，s，H-23）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），38.8（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），32.5（C-7），39.8（C-8），47.6（C-9），36.9（C-10），23.5（C-11），122.4（C-12），144.2（C-13），41.7（C-14），25.5（C-15），22.0（C-16），36.9（C-17），42.3（C-18），46.4（C-19），30.9（C-20），34.1（C-21），31.0（C-22），28.1（C-23），15.6（C-24），15.5（C-25），16.7（C-26），25.9（C-27），69.7（C-28），33.2（C-29），23.6（C-30）。以上数据与文献报道^[18]对比，鉴定为古柯二醇。

化合物10 白色粉末。ESI-MS m/z 455 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.21（1H，t，J=3.1 Hz，H-12），3.15（1H，dd，J=11.3，4.1 Hz，H-3），2.75（1H，dd，J=13.6，3.6 Hz，H-18），1.06（3H，s，H-27），0.91（3H，s，H-23），0.86（3H，s，H-30），0.84（3H，s，H-25），0.83（3H，s，H-29），0.70（3H，s，H-24），0.68（3H，s，H-26）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.3（C-2），79.2（C-3），38.9（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.6（C-7），39.4（C-8），47.8（C-9），37.3（C-10），23.1（C-11），122.8（C-12），143.8（C-13），41.8（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.7（C-17），41.1（C-18），46.1（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.8（C-22），28.3（C-23），15.8（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），26.1（C-27），183.8（C-28），33.3（C-29），23.8（C-30）。以上数据与文献报道^[19]对比，鉴定为齐墩果酸。

化合物11 无色方晶（氯仿），[α]27D 0.0（c 0.1，CHCl3）。ESI-MS m/z 211 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.25（1H，br d，J=16.4 Hz，H-3a），5.02（1H，dt，J=16.4，3.0，H-3b），4.53（1H，m，H-7a），4.48（1H，m，H-7b），3.57（1H，s，9-OH），2.83（1H，m，H-6a），2.66（1H，m，H-6b），1.87（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8a），1.73（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8b），1.01（3H，t，J=7.5 Hz，H-10）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 172.8（C-1），66.9（C-3），119.9（C-4），153.7（C-5），22.8（C-6），66.8（C-7），31.0（C-8），72.4（C-9），7.9（C-10），161.8（C-11）。以上数据与文献报道^[20]对比，鉴定为（R）-（-）-龙胆内酯和（S）-（+）-龙胆内酯的混晶[（±）-龙胆内酯]。

化合物12 白色粉末。ESI-MS m/z 191 [M-H]-。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 7.85（1H，d，J=9.4 Hz，H-4），7.11（1H，s，H-5），6.76（1H，s，H-8），6.20（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.90（3H，s，6-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ： 164.1（C-2），112.6（C-3），146.1（C-4），112.6（C-4a），109.9（C-5），147.1（C-6），152.9（C-7），103.9（C-8），151.4（C-8a），56.8（6-OCH3）。以上数据与文献报道^[21]對比，鉴定为东莨菪内酯。

化合物13 白色无定型粉末。ESI-MS m/z 207 [M-H]-。1H-NMR （C5D5N，600 MHz） δ： 9.87（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），7.54（1H，d，J=15.7 Hz，H-7），7.14（2H，s，H-2，H-6），6.97（1H，dd，J=15.7，7.8 Hz，H-8），3.87（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（C5D5N，150 MHz） δ： 125.5（C-1），107.7（C-2，6），149.8（C-3，5），142.0（C-4），154.7（C-7），127.0（C-8），194.0（C-9），56.9（3-OCH3，5-OCH3）。以上数据与文献报道^[22]对比，鉴定为芥子醛。

化合物14 白色粉末。ESI-MS m/z 181 [M-H]-，183 [M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 9.74（1H，s，H-7），7.22（2H，s，H-2，6），3.91（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ：129.2（C-1），108.2（C-2，6），149.6（C-3，5），143.7（C-4），56.8（3-OCH3，5-OCH3），192.9（C-7）。以上数据与文献报道^[23]对比，鉴定为丁香醛。

化合物15 白色粉末，易溶于氯仿，难溶于甲醇，熔点mp136～138 ℃，TLC鉴定，在3种溶剂系统下与β-谷甾醇对照品在相同Rf处呈现相同的斑点，10%硫酸乙醇溶液显紫红色斑点，混合熔点不下降，鉴定为β-谷甾醇。

4 体外抗肿瘤活性

MTT法考察化合物1，2，5，7，8对胰腺癌细胞SW1990和BxPC-3的增殖的影响。取对数生长期的胰腺癌SW1990或BxPC-3细胞按照每孔约5×103个接种于96孔培养板中，每孔100 μL，置于37 ℃，5% CO2培养箱培养24 h。待细胞贴壁后弃去旧培养基，设置3组：①溶剂对照组：加入含有0.1% DMSO的DMEM培养基；②阳性对照组：阿霉素；③给药组：加入含有终浓度为1，5，10，25，50 μmol·L-1的各化合物的培养基，每组6个复孔。置于37 ℃，5% CO2培养箱培养48 h后，每孔加入20 μL终浓度为5 g·L-1的MTT溶液，置于培养箱孵育4 h，小心吸出孔内的上清液，每孔加入150 μL DMSO，水平摇床轻度振荡10～15 min，待孔内蓝紫色甲臜结晶完全溶解后，用酶标仪以570 nm波长为检测波长，测定各孔吸光度（A），重复实验3次，按公式计算细胞增殖抑制率：抑制率（IR）=（对照组A-给药组A）/对照组A×100%。结果显示化合物1，2，5，7，8对胰腺癌细胞SW1990和BxPC-3在所测试的终浓度范围内均无抑制作用（IR<50%）。

5 细胞氧化应激损伤

MTT法考察化合物1，2，5，7，8对H2O2诱导的EA.hy926细胞氧化应激损伤的影响。按照文献[24]建立H2O2诱导的EA.hy926细胞过氧化损伤模型，设置对照组和H2O2组筛选出最佳造模浓度为300 μmol·L-1和造模时间为24 h（细胞存活率为54.1%）。取对数生长期的EA.hy926细胞按照每孔约1×104个接种于96孔培养板中，每孔100 μL，培养24 h，设置3个组：①溶剂对照组：含0.1% DMSO的DMEM培养基；②H2O2模型组：含300 μmol·L-1 H2O2的培养基；③给药组：含300 μmol·L-1H2O2和不同浓度的化合物（1，5，10，25，50 μmol·L-1）的培养基。按照4项所述MTT法，测定各孔吸光度（A），按公式细胞存活率=（实验组A /对照组A）×100%，计算EA.hy926细胞存活率。结果显示化合物1，2，5，7，8对H2O2诱导的EA.hy926细胞氧化应激损伤无明显影响。

6 讨论

本研究对藏药印度獐芽菜85%乙醇提取物的石油醚萃取部位进行分离纯化，得到15个化合物，其中8个为酮类化合物，表明酮类化合物是石油醚部位的主要化学成分，可能是其具有保肝，降血糖等药理活性的物质基础^{[4-5，25-26]}。本研究中对5个量大酮进行体外抗肿瘤和抗氧化应激损伤活性筛选，发现其在最高浓度为50 μmol·L-1时均无明显作用。因此，有关酮类化合物的其他药理活性有待进一步研究。

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[责任编辑 丁广治]