基于五味子酯甲含量分析南五味子药材商品规格等级

王振恒+晋玲+马毅+崔治家+李倩+黄得栋

[摘要] 收集不同产地南五味子药材进行等级划分，采用药典方法进行水分、总灰分的测定，采用UPLC测定五味子酯甲含量进测定，确定南五味子商品等级划分和五味子酯甲之间的关系。结果表明不同产地的南五味子药材水分、总灰分及五味子酯甲含量均合格。不同等级间的南五味子药材五味子酯甲的含量无显著差异，但是二等品含量最高，三等品、一等品含量低，等级与五味子酯甲的含量不成正相关关系。该研究结果对于南五味药材的生产经营和质量评价具有一定指导意义。

[关键词] 南五味子； 商品规格等级； 五味子酯甲； 超高效液相色谱法

[Abstract] Schisandrae Sphenantherae Fructus， from different producing areas， were collected and divided into three grades. The moisture content and total ash were determined on the basis of the pharmacopoeia method， and schisantherin was determined by UPLC. The study is aimed to find the commercial specifications and grades of Schisandrae Sphenantherae Fructus based on schisantherin content. The results showed that the content of water， total ash and schisantherin of Schisandrae Sphenantherae Fructus from different producing areas qualified. There was no significant difference between different grades of schisandrin content， but the second-class were the highest， first-class and third-class were lower. It means that schisandrin content is not positive correlation to commercial grade. The study will be helpful to the production， management and clinical practice of Schisandrae Sphenantherae Fructus.

[Key words] Schisandrae Sphenantherae Fructus； commercial grade； schisantherin； UPLC

南五味子來源于木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实^[1]。始载于《神农本草经》，列为上品，具有收敛固涩、补肾宁心等功效^[2]。南五味子广泛分布在我国陕西、河南、湖南、安徽等地^[3]。研究资料表明南五味子中含有大量的木脂素类^[4-6]成分，其有效成分具保肝、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等作用^[7-8]，临床应用十分广泛。

目前，南五味子的市场需求量较大，但在产地、采收时间、储藏运输等条件影响下，药材的大小、形状、色泽均有明显差异，这些差异与药材质量的关系有待实验证实。现在沿用的五味子商品规格五味子分了2个等级，南五味子并没有分级标准^[9]。为了适应市场经济的发展，本实验参照本课题组南五味子商品规格等级划标准，对收集到的药材进行等级划分。并以五味子酯甲为重要衡量指标对其质量和等级之间的关系进行考察，为药材市场交易和临床应用提供依据。本实验收集了4个不同产地的南五味子药材，并划分成3个等级，对其进行质量评价，从而探索产地和等级与南五味子药材质量的关系。

1 材料

1.1 样品

从药材市场、药材产地共购买南五味子药材4份，经甘肃中医药大学晋玲教授鉴定，均为南五味子正品，见表1。南五味分级时，药材共同点为干货。呈不规则球形或扁球形颗粒。干瘪皱缩，果肉常紧贴种子上。内含肾形种子12粒，表面棕黄色，有光泽，种皮薄而脆。果肉气微，味酸。无枝梗、杂质、虫蛀、霉变。一等品直径5.05 mm以上，表面棕红色至暗棕色；二等品直径4.25～5.05 mm，表面棕红色至暗棕色；三等品直径52～4.25 mm，表面暗棕色或棕褐色。

1.2 仪器

Thermo Fisher ultimate 3000 RSLC超高效液相色谱仪（包括XRS自动进样器、RS柱温箱、DAD二极阵列检测器、Chromeleon 7.2色谱工作站，XRS高压四元梯度泵）（美国赛默飞世尔科技公司），Al104 1/1万电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），OHAUS corporation DV SERIES 1/10万电子分析天平（奥豪斯仪器有限公司），DHG-9123A电热鼓风恒温干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司），KQ-250TDB型高频数控超声波清洗器（昆仑山超声仪器有限公司），800 型离心沉淀机（上海手术器十厂），DGG-9620A 电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科普仪器有限公司），MYB型电子调温电热套（天津市中环实验电炉有限公司），FW200型高速万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司），TM0612型马福炉（上海亚荣生化仪器厂）。endprint

1.3 试剂

甲苯（分析纯，天津大茂化学试剂厂），甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司），超纯水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；对照品五味子酯甲（批号 B21328，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 水分测定

取南五味子粉末15 g，精密称定，置500 mL短颈圆底烧瓶中；加甲苯约200 mL，再加入数片干燥、洁净的无釉小瓷片；连接仪器，自冷凝管顶端加入甲苯至充满水分测定管的狭细部分。将500 mL短颈圆底烧瓶置电热套中缓缓加热，待甲苯沸腾时，调节温度，使每秒馏出2滴。待水分完全馏出（即测定管刻度部分的水量不再增加时），先用甲苯冲洗冷凝管内部，再用纯净的甲苯将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5 min，冷却至室温，静置使水与甲苯完全分离。检读水量，计算供试品的含水量，见表2。

实验结果表明，4个产地（每个产地3个等级）的南五味子样品水分均符合2015年版《中国药典》规定（不得过12%）。4个产地药材水分差异较小，等级间水分差异也较小，其中除30号湖南省外（二等品含水量最高），均是一等品含水量最高。

2.2 總灰分测定

将南五味子供试品粉碎，过2号筛，混合均匀后，取供试品2.5 g，精密称定。置炽灼至恒重的坩埚中，称定质量（精确至0.01 g）。缓缓炽热，避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣质量，计算供试品中总灰分的含量，见表3。

实验结果表明，4个产地（各3个等级）的南五味子药材总灰分均符合2015年版《中国药典》规定（不得过6%）。产地和等级间药材总灰分差异较小，其中等级间以三等品总灰分较高。

2.3 指标性成分测定

2.3.1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；以甲醇（B）-水（A）为流动相梯度洗脱；流速0.3 mL·min-1 ；检测波长254 nm；柱温 35 ℃；进样量3.0 μL；梯度比例见表4。样品及对照品色谱图见图1，2。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取五味子酯甲对照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，配成145.6，87.36，58.24，29.12，14.56，2.912 mg·L-1的标准溶液。于4 ℃下保存，备用。

2.3.3 供试品溶液的制备 取南五味子药材粉末（过60目筛）0.5 g，精密称定，分别置于50 mL 具塞三角锥形瓶中，精密加入50 mL甲醇，称重，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，至室温，再称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 精密吸取质量浓度为2.912，14.56，29.12，58.24，87.36，145.6 mg·L-1的五味子酯甲对照品溶液各3 μL，注入超高效液相色谱仪（UPLC），以对照品质量浓度X为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，得线性方程，结果为Y=9.456 1X-0.176 43（R2=0.999 18）。结果表明，五味子酯甲的质量浓度在0.42～0.84 g·L-1，具有良好的线性关系。

2.4.2 精密度试验 将质量浓度为87.36 mg·L-1 的五味子酯甲对照品溶液连续进样6 次，进样量为3 μL，测定峰面积，计算RSD，结果显示五味子酯甲峰面积的RSD 0.42%，保留时间的RSD 0.17%。表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 将湖南产南五味子一等品样品溶液，在同一洗脱梯度的条件下，并按2.3.1项下色谱条件测定，分别在制备后0，2，4，6，8 h 进样，记录色谱图、保留时间和峰面积。计算RSD，结果显示，峰面积的RSD 1.8%，保留时间的RSD为0.9%。表明样品溶液在8 h内稳性定良好。

2.4.4 重复性试验 精密称取湖南产南五味子一等品5 份，按照2.3.3项下方法制备供试品溶液，并按照2.3.1项下色谱条件进行测定，记录峰面积和保留时间，计算RSD。结果显示五味子酯甲峰面积的RSD 1.8%，保留时间的RSD为0.33%。表明此试验方法重复性良好。

2.5 五味子酯甲含量测定

按照2.3.2项下对4个产地（各3个等级）南五味子药材商品制备供试品，按照2.3.1项下色谱条件进行含量测定，见表5。

4个产地的南五味子药材五味子酯甲的含量均符合2015年版《中国药典》规定（不得少于0.20%）。产地对南五味子药材中五味子酯甲含量影响较大，等级对五味子酯甲含量的影响较小，其中二等品含量较高，一等品含量较低，等级跟五味子酯甲的含量不成正相关关系。以产地考察，湖南南五味子质量明显优于山西、陕西、河南产药材。由于样本量有限，有待进一步考察，见表6，7。

3 讨论

本实验结果表明，4个省的南五味子样品中的水分、总灰分以及五味子酯甲含量均符合药典规定，药材总体质量良好。其中一等品的南五味子含水量较高。不论是五味子，还是南五味子均以肉厚、油润质量为好，从大的方面讲，五味子质量好于南五味子，从南五味子本身来讲，一等品含水量较高可能与其果肉相对厚度有关；三等品总灰分含量较高可能是因为其本身有很多破损的果实存在，导致泥土沙粒嵌在其中。南五味子药材中五味子酯甲和等级的相关性较小，等级间含量没有显著性差异。植物基原单一，而且南五味子作为果实类药材由于没有次生生长，果实中种子1～2枚较少，在较短生长季节中，最终果实中五味子酯甲含量没有产生显著差异。

从2010年版药典开始，南五味子和五味子分开作为两种药材，有利于解决市场的混乱，使其来源单一化。南五味子和五味子药材药用功效相同，但是市场价格五味子价格明显高于南五味子^[10]，与传统质量评价有关，在商品外形也有体现。南五味子等级划分之后，根据市场规律，价格和等级一般是一致的。但是从内部质量控制的角度来看，色泽最好个头最大者五味子酯甲含量并不一定最高，二等品的质量最好，其原因可能与五味子酯甲存在于药材不同部位的多少有关。崔九成等^[11-13]的研究结论也支持了本推断：南五味子药材中，种子和果肉中化学成分存在一定差异，且种子特别是种仁中木脂素含量较高。一等品中果肉占比较大，五味子酯甲含量整体上低于二等品。endprint

南五味子和五味子商品购买时可根据药材木脂素成分的含量高低选择品种。南五味子和五味子在药店都有销售，而制药厂多用的是五味子，监督管理部门和购买者应防止零售店以南五味子充五味子的行为发生。购买大量南五味子商品以二等品最为经济实惠。

按照药典方法评价药材质量可以快速、方便、有效的保证药材质量。但只是用单一成分来评价药材质量仍显得不太合理，要以多种有效成分为指标，并且结合外观性状和生物效价检测来综合评价药材质量的优劣才会显得更加科学合理。

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[责任编辑 吕冬梅]endprint