通过亲水相互作用色谱串联质谱法快速测定葡萄中的乙烯利

胡三明

摘 要：乙烯利分析通常需要间接和费力的方法，包括气相色谱串联质谱（GC-MS / MS）测定前的衍生化步骤。在本文中，所描述的方法是快速的，并且基于简单的程序而没有任何清理。加入乙烯利D4作为替代物后，进行甲醇萃取。通过电喷雾负模式与MS / MS耦合的高效液相色谱（LC）进行测定。在亲水相互作用液相色谱（HILIC）柱上实现色谱分离。该方法显着地将分析时间缩短到大约10分钟，样品提取和10分钟的测定。用定量极限的葡萄样品，50μgkg-1和200μgkg-1评估分析性能。获得的结果符合SANCO / 12571/2013标准，回收率约96%，典型的同位素稀释法（提取效率≈60%）。日内重复性和日常重现性条件下的相对标准偏差分别低于5%和11%。此外，所述方法是环境友好的并且允许显着降低溶剂和试剂消耗。

关键词：亲水相互作用；色谱串联质谱法；乙烯利

1 引言

乙烯利（2-氯乙基膦酸）是合成植物生长调节剂。这类生理和生物物质产生与内生对应物类似的作用。乙烯利用于改善机械收获的水果脱落，秸秆起酥化和加强，增加抗倒伏性，促进或抑制开花，促进成熟和着色，提高糖含量。这种系统性农药转运到植物组织中并分解成乙烯。乙烯是活性剂，与植物生长和发育过程中的各种天然生理过程有关。在比利时，乙烯利的销售量达到每年25吨以上（“联邦公共卫生食品链安全与环境2014”）。2012年，比利时食品机构为此植物生长调节剂专门研究了123种水果。在47个样品（联邦食品安全署2013年）中检测到了乙烯利残留。报告了几种主要用于葡萄的通知，用于食品和饲料快速预警系统的乙烯利（欧洲委员会2014年RASFF）。

2 材料和方法

2.1 化学试剂

乙烯利购自Sigma-Aldrich（Seelze，Germany），认证纯度为99.3%。氘代乙烯利（乙烯利D4）获自Dr. Ehrenstorfer GmbH（Augsburg，Germany），认证纯度为98%。 通过净化系统（Millipore Milli-Q Water System，Bedford，USA）获得蒸馏水（<8MΩcm电阻率）。 甲醇和乙腈均为Biosolve的HPLC级（Valkenswaard，荷兰）。 氢氧化铵25%和认证纯度为98-100%的甲酸购自默克（德国达姆施塔特）。 在1mg ml-1的甲醇中制备乙烯利储备溶液。 在甲醇中以10μg/ ml的浓度制备内标储备溶液，乙烯利D4。通过用甲醇稀释储备溶液制备稀释标准品。 校正溶液由稀释标准品和乙烯利D4制备。所有溶液储存在-18℃。

2.2 高效液相色谱耦合质谱法

使用与Waters（Milford，USA）的Xevo TQ-MS耦合的Acquity UPLC。该仪器由MassLynx?软件4.1版本控制，由列管理器，10μl循环的样品管理器和二元溶剂管理器组成。在距离Merck（Darmstadt，Germany）3.5μm，2.1×100mm的zic-HILIC色谱柱上实现LC分离，该柱与5μm，2.1×20mm的zic-HILIC预柱耦合，使用流速为0.3 ml min-1，有效运行时间为10 min。流动相A含有通过加入氢氧化铵使100%H 2 O达到pH9.3。流动相B含有95%ACN和5%流动相A.流动相B的百分比如下改变：0分钟，100%； 7.5分钟，43%； 8分钟，43%； 8.5分钟，100%； 10分钟，100%。注射体积为3μl，部分循环模式，针头填满。注射一套后，用混合水/ ACN（10/90）在60分钟内冲洗柱。质谱仪在Es-中进行。与Es +相比，我们的系统显示出更好的灵敏度。乙烯利和乙烯利D4的调谐参数和MRM转换详见表1.氩气用作0.35 ml / min-1的碰撞气体。定量离子的停留时间设定为300 ms，定性离子的停留时间设定为200 ms，内标离子的停留时间为100 ms。这些高停留时间值通过降低噪声来提高灵敏度。

3 结果与分析

用酸化的甲醇直接注入提取的样品，无需任何纯化，导致色谱图与许多基质干扰接近乙烯利峰。为了最小化这些干扰，测试了三种不同的纯化方法：一夜间冷冻，SPEC18或PSA。不幸的是，这三次测试清除并没有消除色谱干扰。在使用C18或PSA SPE柱的情况下，甚至观察到一些恢复的损失。这就是为什么在提取步骤之后没有添加清除。然而，更多的努力专门用于色谱分离。根据以前的研究，HILIC柱的特征在于亲水性程度，亲水疏水取代基的选择性，分子形状的选择性，酸碱性质的评价使用一些衍生物的固定相。

4 结语

已经开发了用于量化葡萄中的乙烯利的分析方法。这种方法似乎是快速和容易地应用，因为不需要费力的清理或衍生化步骤。一批10个样品的过程包括空白程序和质量控制，从提取到注射不到1小时。该批次的LC-MS / MS测定时间少于3小时。同位素稀释技术的使用不仅补偿了遇到的分析物损失，而且还防止了基质效应。色谱法基于亲水相互作用。对7列进行的测试证实，在相似的HILIC化学上获得了不平等的结果。在选定的zic-HILIC色谱柱上，pH条件的优化改善了峰值形状，干扰中的分辨率和在负电喷雾电离模式下工作的质谱仪上的乙烯利响应。该验证通过了SANCO / 12571/2013標准，其恢复率约为96%，RSD远远低于日内重复性和日重复性的可接受的20%。所提出的方法也是环保的，显着降低溶剂消耗并防止任何使用二氯甲烷。

参考文献：

[1]叶德练，王玉斌，周琳，李建民，段留生，张明才，李召虎. 乙烯利和氮肥对夏玉米氮素吸收與利用及产量的调控效应[J]. 作物学报，2015（11）：1701-1710.