探讨盆腔淋巴结HPV—DNA检出率与早期宫颈癌临床转移的关系

潘红

【摘要】 目的 探讨盆腔淋巴结人类乳头瘤病毒基因（HPV-DNA）检出率与早期宫颈癌临床转移的关系。方法 对62例宫颈癌患者原发部位肿瘤组织和盆腔淋巴结组织的HPV-DNA区基因序列进行测定， 同时分析其阳性率与早期宫颈癌转移之间的关系。结果 62例盆腔淋巴结当中的HPV-DNA检出率为51.6%（32/62）， 26例淋巴结转移的组织当中HPV-DNA检出率为84.6%（22/26）， 36例检查没有淋巴结转移的盆腔淋巴结HPV-DNA检出率为27.8%（10/36）， 有无淋巴结转移患者盆腔淋巴结HPV-DNA检出率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。另外， 阳性淋巴结当中的闭孔、髂外以及髂内的淋巴结占90%以上。结论 盆腔淋巴结的HPV-DNA检出阳性属于一个具有重要意义的淋巴结转移预测因子， 其中最为关键的前哨淋巴结包括有闭孔、髂外以及髂内的淋巴结。

【关键词】 盆腔淋巴结；HPV-DNA；早期宫颈癌；临床转移

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.017

根据研究表明[1]， 盆腔淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的主要原因之一， 是正确指导手术以后辅助治疗和判断预后的重要依据。HPV感染与宫颈癌的发病有密切关系。检测宫颈癌患者盆腔淋巴结当中的HPV-DNA是否能够帮助淋巴结早期隐匿转移还存在一定的争议， 为此进行相关研究报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2014年8月～2016年8月在本院进行手术治疗的宫颈癌患者62例， 年龄28～59岁， 平均年龄（44.6±3.1）岁。

1. 2 方法 ①石蜡包埋组织当中总DNA的提取刮取组织3～4片， 放置在1.5 ml Eppendorf管当中， 加入二甲苯1 ml脱蜡， 震荡摇晃均匀， 在37℃恒温水浴30 min， 以12000 r/min离心5 min， 将上层溶液去除， 可以反复1～2次。密切观察没有石蜡残留以后加入无水乙醇1 ml进行清洗， 涡旋摇晃均匀， 以12000 r/min离心5 min， 去除上清液， 反复1次， 干燥组织。按照说明书提取总DNA。②目的基因片段聚合酶链反应（GP-PCR）扩增提取的组织DNA作为模板， 采取GP5+、GP6+给予HPV-DNA L1区基因序列的PCR扩增。反应体系为20 μl。反应设阳性和阴性的空白对照， 阳性模板为Hela细胞株提取的DNA。③琼脂糖凝胶电泳选取5μl PCR扩增产物给予1.5%琼脂糖凝胶电泳， 其成像分析系统观察， 同时进行对照， 以140～150 bp部位发生明显条带作为阳性结果[2]。④PCR产物的纯化根据其说明书的方法进行操作， 纯化的DNA立即应用或者保存在零下20℃作为备用。⑤序列测定采取引物GP5+、GP6+将纯化的PCR产物在DNA序列自动分析仪上进行测序。

1. 3 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

62例盆腔淋巴结当中的HPV-DNA检出率为51.6%

（32/62）， 26例淋巴结转移的组织当中HPV-DNA检出率为84.6%（22/26）， 36例检查没有淋巴结转移的盆腔淋巴结HPV-DNA检出率为27.8%（10/36）， 有无淋巴结转移患者盆腔淋巴结HPV-DNA检出率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。另外， 阳性淋巴结当中的闭孔、髂外以及髂内的淋巴结占90%以上。

3 讨论

根据研究表明[3]， 宫颈癌早期患者的手术后生存率与淋巴结转移情况、肿瘤类型、体积、子宫旁边浸润程度、深度以及临床主治医师的操作水平等有密切关系， 当中淋巴结转移非常关键。对比5年的生存率， 盆腔淋巴结转移呈现阴性的患者能够达到85%以上， 然而如果区域出现淋巴结转移， 则会呈现下降趋势[4]。然而在实践中发现一些临床分期相对比较早和组织学没有淋巴结一个切面， 而无法发现的微小病灶[5]。目前， 对一系列实体瘤的研究当中微转移的检出率与患者预后有直接关系。宫颈癌在整个发展期间HPV-DNA整合进入到宿主细胞DNA， 进而能够充分发挥致癌的作用[6]。随着肿瘤的进一步扩散， 整合到宿主细胞当中的HPV-DNA片断在转移病灶中也可以检测出来。所以， 可以通过HPV-DNA对淋巴结微转移进行诊断， 可以为制定手术后的辅助治疗提供重要依据， 使预后得到明显改善。淋巴结中的HPV-DNA与转移分布情况也大致相同。淋巴结转移主要伴有HPV-DNA呈现阳性、阴道切缘浸润以及宫体侵犯， 因此， 可以表明其阳性与转移具有密切的关系[7]。根据研究表明[8]， 组织病理学没有癌转移的淋巴结当中检查出来HPV-DNA的存在显示没有可以发现的肿瘤扩散。然而组织病理学检查呈现阴性的淋巴结当中的HPV-DNA阳性检出率有密切关系如下[9]：组织病理学没有能够及时的发现微转移， 经过淋巴道通过扩散的游离HPV病毒颗粒以及免疫活性细胞吞噬消化的微转移灶。所以， 也有部分相关研究人员认为其无法当作有效判断复发的预测因子， 根据研究表明， 组织病理学检查呈现阴性的淋巴结HPV-DNA的检出率在10%以上[10]。对宫颈癌原发部位的肿瘤以及淋巴结的HPV-DNA检测全部呈现阳性的患者。常规清扫术经常给宫颈癌患者带来一系列并发症。现如今， 利用确定前哨淋巴结， 对其清扫范围给予一定的限制， 可降低手术所带来的创伤。根据研究表明， 前哨淋巴结大部分包括闭孔、髂外以及髂内。

综上所述， 盆腔淋巴结的HPV-DNA检出阳性属于一个具有重要意义的淋巴结转移预测因子， 其中最为关键的前哨淋巴结包括有闭孔、髂外以及髂内的淋巴结。

参考文献

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[9] 孙颖， 刘国炳， 余艳红. 盆腔淋巴结HPV-DNA检出率与早期宫颈癌临床转移的关系. 南方医科大学学报， 2008， 28（5）：796-798.

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[收稿日期：2017-06-02]endprint