不同剂量螺内酯对高血压模型大鼠心肌保护作用分析

于海英　王涛

[摘要] 目的 探讨不同剂量螺内酯对高血压模型大鼠的心肌保护作用。 方法 选择40只雄性SD大鼠，随机分为对照组、模型组、小剂量组和大剂量组各10只，模型组、小剂量组和大剂量组采用左旋精氨酸甲酯灌胃制作高血压模型，之后仍保持正常饮食，小剂量组给予20 mg/kg螺内酯灌胃，大剂量组给予40 mg/kg螺内酯灌胃，8周后处死，对各组大鼠的心肌病理学图像进行观察分析。 结果 心肌细胞横截面积、小动脉管壁/管腔面积比、心肌内小血管周围纤维化指数均为模型组>小剂量组>大剂量组>对照组，各组间对比差异均具有统计学意义（P<0.05），心肌组织胶原含量模型组、小剂量组和大剂量组均显著高于对照组（P<0.05），模型组显著高于小剂量组和大剂量组（P<0.05），但小剂量组和大剂量组之间对比无显著差异（P>0.05）。 结论 螺内酯能够有效保护高血压模型大鼠的心肌细胞，大剂量应用效果更好，但对心肌胶原含量的影响不大。

[关键词] 高血压；心肌细胞；剂量；螺内酯

[中图分类号] R544.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）24-0030-03

[Abstract] Objective To explore the effect of different doses of spironolactone on the myocardial protection in hypertension model rats. Methods A total of 40 male SD rats were randomly divided into control group， model group， low dose group and high dose group， with 10 rats in each group. In the model group， low dose group and high dose group， gavage of L-arginine methyl ester was used to prepare the hypertension model， and then the rats were maintained the normal diet. The low dose group was given 20 mg/kg of spironolactone gavage， and the high dose group was given 40 mg/kg spironolactone gavage. The rats were executed after 8 weeks. The myocardial pathological images of each group of rats were observed and analyzed. Results The cross-sectional area of myocardial cells， the ratio of small arterial wall/lumen area， and the intramyocardial microvascular fibrosis index all ranked as follows： model group > low dose group > high dose group > control group. The differences between groups were statistically significant（P<0.05）. The content of collagen in cardiac muscle tissue in the model group， low dose group and high dose group was all significantly higher than that in the control group（P<0.05）， and the model group was significantly higher than that in the low dose group and high dose group， but there was no significant difference between the low dose group and the high dose group（P>0.05）. Conclusion Spironolactone can effectively protect the cardiomyocytes of hypertension model rats. The high dose has a better application effect， but has little effect on the content of myocardial collagen.

[Key words] Hypertension； Myocardial cells； Dosage； Spironolactone

高血压是中老年患者最常见的疾病之一，从高血压进展为高血压性心脏病及心力衰竭的过程也是心肌细胞受损和心室重构的过程，在这个过程中肾素-血管紧张素-醛固酮系统被过度激活[1-2]。有研究显示醛固酮作为一种内源性的有害物质，会对心肌细胞造成损害，在心肌细胞纤维化过程中有着重要的作用，同时也是影响心脏功能的重要因素[3]。螺内酯是临床常用的一类醛固酮拮抗剂，具有改善心肌功能的作用[4]。本文就不同剂量螺内酯对高血压模型大鼠的心肌保护作用进行了研究分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究材料

选择40只雄性SD大鼠，均由锦州医科大学实验动物中心提供，体重（114.5±5.9）g，适应性喂养一周后随机分为對照组、模型组、小剂量组和大剂量组各10只。左旋精氨酸甲酯由美国sigma公司生产，批号：064K1211；螺内酯由江苏正大丰海制药有限公司生产，批号：20140509。endprint

1.2 方法

1.2.1 模型制備 对照组正常喂养，不做任何处理。模型组、小剂量组和大剂量组则采用左旋精氨酸甲酯50 mg/（kg·d）灌胃，制作高血压模型，模型建立后模型组正常喂养，小剂量组给予20 mg/（kg·d）螺内酯灌胃，大剂量组给予40 mg/（kg·d）螺内酯灌胃。均连续干预8周。

1.2.2 心肌组织病理检验 各组均在8周后处死大鼠，取心脏行病理学检验，采用10%中性福尔马林固定，以左心室心尖部-二尖瓣轴为长轴，垂直于心脏长轴在左心室游离壁位置做横切，取中间1/3做脱水、固定，连续切片至少10片，厚度5 μm，选取最完整的2片进行HE和VG染色。之后采用北辰集团公司的BHEC-100病理图像测量系统对标本进行测定，记录心肌细胞横截面积、小动脉管壁/管腔面积比、心肌内小血管周围纤维化指数、心肌组织胶原含量等参数。HE染色切片置于200倍光镜下观察心肌细胞，随机选取10个视野，选择边缘清晰、完整的心肌细胞测量横截面积，计算平均横截面积。VG染色切片在100倍光镜下观察小动脉管壁及管腔形态，随机选择5～6支横切面小动脉图，测量小动脉管壁面积和管腔面积，计算比值。在测定小动脉管壁、管腔面积基础上，测量周围胶原面积，计算周围胶原面积与小动脉管腔面积比，即为周围纤维化指数。VG染色切片在200倍光镜下利用灰度调节结合16色扫描进行胶原成分区分，计算胶原面积与总体视野面积的比值，即为心肌组织胶原含量。

1.3 统计学方法

将数据录入SPSS 20.0软件包进行处理，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验或方差分析，计数资料用%表示，组间比较采用χ2检验，检验水平α=0.05，即P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

心肌细胞横截面积、小动脉管壁/管腔面积比、心肌内小血管周围纤维化指数均为模型组>小剂量组>大剂量组>对照组，各组间对比差异均具有统计学意义（P<0.05）。心肌组织胶原含量模型组、小剂量组和大剂量组均显著高于对照组（P<0.05），模型组显著高于小剂量组和大剂量组（P<0.05），但小剂量组和大剂量组之间对比无显著差异（P>0.05）。见表1。

3 讨论

随着高血压的发展，心肌细胞的形态和功能均出现改变，最终引发心力衰竭[5]。相关研究表明[6]，左旋精氨酸甲酯能够造成大鼠心肌细胞肥大，并形成高血压，本次研究即建立在这个基础上制作大鼠高血压模型，从模型组和对照组的数据对比来看，模型组大鼠表现出明显的心肌细胞肥大，这与既往研究相一致[7-8]。左旋精氨酸甲酯诱导的高血压模型大鼠会出现肾素-血管紧张素-醛固酮系统过度激活的现象，进而造成心肌损害[9]。

从本次病理分析结果来看，左旋精氨酸甲酯会导致大鼠的心肌小动脉壁增厚，小动脉管壁/管腔面积比增高，这种形态变化是导致非动脉粥样硬化性心肌血管狭窄的基础。大鼠的心肌细胞肥大导致血管舒缩功能障碍，且心肌胶原含量增加，心肌细胞表现出明显的纤维化进展，血流通过能力和储备能力均明显降低，一氧化氮合成受阻，出现内皮依赖性血管舒张受损，血流阻力增加，这又会导致心室重构的加剧[10-11]。这种弥漫性缺血与动脉粥样硬化病变有所不同，是心脏小动脉结构改变的主要病理基础。有文献研究显示[12，13]，螺内酯能够有效控制高血压患者的心室重构进程，改善患者的心肌肥大现象。Pittb等[8]的研究认为螺内酯能够通过改善心肌炎症反应来抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统的过度激活，但并未进一步对螺内酯的心肌保护作用进行研究。

从本次研究情况来看，左旋精氨酸甲酯制作的高血压大鼠模型具有心肌纤维化的特点。在应用螺内酯后大鼠的心肌肥大和纤维化情况得到改善，小剂量组和大剂量组大鼠的心肌细胞横截面积、小动脉管壁/管腔面积比、心肌内小血管周围纤维化指数及心肌组织胶原含量较模型组均显著降低，这说明无论何种剂量的螺内酯都能够有效阻止高血压模型大鼠的心室重构。这与Tsutamoto T等[14]的研究结论一致。Savoyec等[15]的研究认为螺内酯对心肌细胞的改善与一氧化氮合成酶的分泌有关，并在研究中通过长期应用一氧化氮合成酶抑制剂制作心肌纤维化大鼠模型，结果显示螺内酯能够有效改善大鼠的心肌功能。本文并未涉及螺内酯的心肌改善机制，但进一步对螺内酯的心肌纤维化进程和心室重构抑制作用进行了补充，体现了螺内酯可有效防止心肌肥大的作用。

综上所述，螺内酯能够有效保护高血压模型大鼠的心肌细胞，大剂量应用效果更好，但对心肌胶原含量的影响不大。

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（收稿日期：2017-06-12）endprint