太子参茎叶多糖对小鼠免疫器官指数和血清免疫球蛋白、补体含量的影响

檀新珠, 吴晓晴, 吕明其, 王冠淞, 李 健, 秦 韬, 黄一帆, 马玉芳(.中西兽医结合与动物保健福建省高等学校重点实验室，福建 福州35000；.福建省兽医中药与动物保健重点实验室(福建农林大学)，福建 福州 35000)

太子参茎叶多糖对小鼠免疫器官指数和血清免疫球蛋白、补体含量的影响

檀新珠1, 吴晓晴1, 吕明其1, 王冠淞1, 李 健2, 秦 韬2, 黄一帆2, 马玉芳1
(1.中西兽医结合与动物保健福建省高等学校重点实验室，福建 福州350002；2.福建省兽医中药与动物保健重点实验室(福建农林大学)，福建 福州 350002)

将60只小鼠随机分为空白对照组，太子参茎叶多糖(RPSLP)低、中、高剂量组，每组15只.空白对照组小鼠灌服0.2 mL·d-1蒸馏水，低、中、高剂量组小鼠分别灌服50、100和200 mg·kg-1·d-1RPSLP，14 d后检测各组小鼠的免疫器官指数和血清免疫球蛋白、补体含量,研究RPSLP对小鼠免疫功能的影响.结果表明：与空白对照组相比，高剂量组小鼠的脾脏指数显著提高(P<0.05)，胸腺指数显著降低(P<0.05)；低、中剂量组小鼠的IgA含量显著提高(P<0.05)，低剂量组小鼠的IgM含量显著提高(P<0.05)，高剂量组小鼠的IgM含量显著降低(P<0.05)；中、高剂量组小鼠的C3含量显著提高(P<0.05)；各剂量组小鼠的IgG和C4含量无显著差异(P>0.05).由此可见，一定剂量的RPSLP可以促进小鼠免疫器官的发育，增强免疫力.

太子参茎叶多糖; 小鼠; 免疫器官指数; 免疫球蛋白; 补体

Abstract: Sixty mice were randomized into 4 groups, normal control, low-, intermediate- and high-dose ofRadixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides (PRSLP) groups, consisting of 15 mice each. Mice from PRSLP groups were administered by gavage with RPSLP at doses of 50, 100 and 200 mg·kg-1·d-1for 14 d, which was replaced with 0.2 mL distilled water for the normal control. Then immune organ index was assayed and contents of immunoglobulin and complement in serum of mice were detected. The results showed that compared with the normal control group, the spleen index of high-dose group was significantly increased (P<0.05), and the thymus index was significantly decreased (P<0.05). IgA level in low- and intermediate-dose groups were significantly increased (P<0.05). IgM content in low-dose group was significantly increased (P<0.05), but it was significantly decreased in high-dose group (P<0.05). C3levels in intermediate- and high-dose groups increased significantly (P<0.05). Contents of IgG and C4were not significantly different among all groups (P>0.05). It is concluded that RPSLP promotes the development of immune organ and enhances immunity in mice at certain dose.

Keywords:Radixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides; mice; immune organ index; immunoglobulin; complement

多糖是天然的大分子活性物质，广泛存在于高等植物、动物和微生物细胞膜上，截止至今，从天然产物中提取出来的多糖已有上百种，多糖的抗肿瘤活性自20世纪30年代被发现后，植物多糖，尤其是中药多糖成了科研工作者的研究热点[1].研究发现,中药多糖有增强免疫力[2-3]、抗肿瘤[4]、抗氧化应激[5]和抗疲劳[6]等多种药理活性.太子参[Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm]为临床常用的补益中药，具有益气健脾和生津润肺之功效，其最主要的活性成分是高分子多糖[7].大量研究表明,太子参多糖有降糖[8]、抗氧化应激[9]和增强免疫[10]等功能，太子参茎叶的化学成分与太子参类似，其多糖含量可达5%～10%[7]，但其在生产中却被废弃.本实验室前期研究表明，太子参茎叶多糖(Radixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides, RPSLP)可以显著提高断奶仔猪血清的免疫球蛋白和补体含量，增加回肠分泌型免疫球蛋白A的含量[11-12]，而关于RPSLP的其他研究鲜见报道.本试验选取小鼠为动物模型，灌胃RPSLP后，通过检测小鼠的免疫器官指数和血清免疫球蛋白、补体含量的变化，探讨RPSLP对小鼠免疫功能的影响，也为RPSLP的临床推广应用提供参考依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 60只6～8周龄的雄性昆明小鼠，体重(20±2) g，购自福建医科大学实验动物中心，许可证号：SYXK(闽)2014-0003.

1.1.2 试验药物 RPSLP由福建省柘荣县太子参生产商惠赠.茎叶经粉碎后，用蒸馏水浸提，醇沉冷冻干燥后得粗多糖，其最优提取率为3.60%，比林志娟等[13]提取的太子参多糖得率高.粗多糖经Sevage法去除蛋白纯化后，多糖含量达70%.

1.1.3 仪器与试剂 仪器有AL104电子天平(梅特勒—托利多仪器上海有限公司)、Mlli-Q超纯水系统(济南赛畅科学仪器有限公司)、SK-1快速混匀器(金坛市科析仪器有限公司)、HH-2数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)和RT-9900半自动生化分析仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司).

免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)试剂盒和补体(C3、C4)试剂盒由浙江伊利康生物技术有限公司生产.

1.2 试验动物的分组与处理

小鼠适应性饲养1周后，随机分为空白对照组，RPSLP低、中、高剂量组，每组15只.各组小鼠均自由采食、饮水.

空白对照组小鼠灌胃0.2 mL·d-1蒸馏水；低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg·kg-1·d-1RPSLP，连续14 d.

1.3 指标测定

1.3.1 体重的测定 试验开始前与结束后对小鼠进行空腹称重，并计算试验期间的增重.增重(g)=末重(g)-初重(g).

1.3.2 免疫器官指数的测定 小鼠末次给药后24 h称重，采用颈椎脱臼法处死小鼠，取其胸腺和脾脏，分别称重，计算脾脏指数和胸腺指数.脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重量(mg)/小鼠体重(g).

1.3.3 血清免疫球蛋白和补体含量的测定 小鼠末次给药后24 h摘眼球采血，全血于3000 r·min-1离心10 min，收集血清，分装于Eppendorf管中，用于免疫球蛋白和补体的检测.血清免疫球蛋白和补体的含量采用免疫比浑浊法检测，用RT-9900半自动生化分析仪测定，具体操作步骤见试剂盒说明书.

1.4 数据处理

试验数据以“平均值±标准差 ”表示，用SPSS软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较.

2 结果与分析

2.1 RPSLP对小鼠体重的影响

RPSLP对小鼠体重的影响见表1.由表1可知：试验开始时，各组小鼠间的初重差异不显著(P>0.05)；试验结束时，与空白对照组相比，各剂量组小鼠的体重均有提高，但差异不显著(P>0.05)，各剂量组间的差异也不显著(P>0.05)；试验结束前后，与空白对照组相比，各剂量组小鼠的增重均有提高，但只有中剂量组的增重显著提高(P<0.05).

2.2 RPSLP对小鼠免疫器官指数的影响

RPSLP对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响见表2.由表2可知：与空白对照组相比，高剂量组小鼠的脾脏指数显著提高(P<0.05)，低剂量组小鼠的胸腺指数有提高，但差异不显著(P>0.05)；各剂量组间相比，高剂量组小鼠的脾脏指数显著高于低、中剂量组(P<0.05)，而胸腺指数显著降低(P<0.05).

表1 RPSLP对小鼠体重的影响1)Table 1 Effect of RPSLR on the weight of mice

1)与空白对照组比较，同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

表2 RPSLP对小鼠免疫器官指数的影响1)Table 2 Effect of RPSLP on the spleen index and thymus index of mice

1)与空白对照组比较，同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.3 RPSLP对小鼠免疫球蛋白和补体含量的影响

RPSLP对小鼠免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量的影响见表3.由表3可知：与空白对照组相比，低、中剂量组小鼠的IgA含量显著提高(P<0.05)，中剂量组小鼠的IgG含量有提高，但差异不显著(P>0.05)，低剂量组小鼠的IgM含量显著提高(P<0.05)，高剂量组小鼠的IgM含量显著降低(P<0.05)；各剂量组间相比，低剂量组小鼠的IgA和IgM含量均最高，且提高显著(P<0.05)，高剂量组小鼠的IgA和IgM含量最低，差异显著(P<0.05).

表3 RPSLP对小鼠免疫球蛋白含量的影响1)Table 3 Effect of RPSLP on the content of immunoglobulin in mice

1)与空白对照组比较，同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

RPSLP对小鼠补体C3和C4含量的影响见表4.由表4可知：与空白对照组相比，中、高剂量组小鼠的C3含量显著提高(P<0.05)，低、高剂量组小鼠的C4含量有提高，但差异不显著(P>0.05)；各剂量组间相比，中、高剂量组小鼠的C3含量显著高于低剂量组(P<0.05)，而C4含量的差异不显著(P>0.05).

表4 RPSLP对小鼠补体含量的影响1)Table 4 Effect of RPSLP on the content of complement in mice

1)与空白对照组比较，同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

3 讨论

中药多糖能有效刺激胃肠道，促进消化腺酶的分泌及日粮营养物质的消化吸收利用，增加机体体重，有利于机体的健康生长.关于多糖对机体体重影响的研究很多，但研究结果各不相同.钟建春等[14]给小鼠灌胃人工冬虫夏草多糖的结果表明，与对照组相比，低、中、高剂量多糖提取物对小鼠终期的增质量有降低趋势，但差异不显著(P>0.05)；而许丹妮[15]研究表明，不同剂量金线莲多糖均能促进健康小鼠体重的增长.本试验给小鼠灌胃不同剂量RPSLP的结果表明，试验结束前后，与空白对照组相比，中剂量组小鼠的增重显著提高(P<0.05)，这一结果与本实验室前期研究发现的“RPSLP可以提高断奶仔猪的日增重”[12]相似.但本试验小鼠的增重与RPSLP的剂量并不呈剂量依赖性，高剂量组的增重反而低于中剂量组.原因可能是高剂量RPSLP结合了大量的水，导致小鼠消化道的食糜黏度增加，降低了日粮营养物质与酶的相互作用，使营养成分的吸收率下降，导致小鼠的增重不明显.表明一定剂量的RPSLP可以促进小鼠机体的生长.

免疫器官是免疫应答的主要场所，免疫器官指数反映了免疫器官的发育和免疫功能.本试验结果显示，与空白对照组相比，高剂量组小鼠的脾脏指数显著提高(P<0.05)，这一结果与蔡晶等[16]的研究结果一致，表明RPSLP具有与太子参多糖相似的功效.研究表明，多糖能增加健康小鼠免疫器官的重量并提高巨噬细胞的吞噬指数[17].本试验结果表明，与空白对照组相比，低剂量组小鼠的胸腺指数有提高，但差异不显著(P>0.05).Cho et al[18]研究也表明，饲喂正常小鼠马格利多糖(韩国传统米酒)，与对照组相比，多糖组小鼠胸腺指数的提高不显著(P>0.05).

免疫球蛋白是由浆细胞分泌的一类蛋白质，是非特异性免疫的固有免疫分子，主要参与体液免疫.研究表明，多糖能够促进血清免疫球蛋白的生成，提高机体免疫力[19-20].张成孜[21]研究表明，滁菊多糖能显著提高老龄小鼠血清IgG和IgM的水平，增强免疫功能，对小鼠起保健作用.华岩等[22]对负重力竭游泳的小鼠进行研究，发现牡蛎多糖能够极显著提高血清IgG、IgA和IgM的含量.本试验结果也显示：与空白对照组相比，低、中剂量组小鼠的IgA含量显著提高(P<0.05)；中剂量组小鼠的IgG含量有提高，但差异不显著(P>0.05)；低剂量组小鼠的IgM含量显著提高(P<0.05).表明一定剂量的RPSLP可以显著提高小鼠血清免疫球蛋白的水平，提高体液免疫功能.

补体也是非特异性免疫的固有免疫分子，其中的C3和C4是补体系统中的两种主要成分，经活化后发挥作用.许丹妮等[23]研究金线莲多糖的免疫调节活性，发现不同剂量多糖组健康小鼠血清的C3和C4水平有不同程度的提高.本试验结果表明，与空白对照组相比，中、高剂量组小鼠的C3含量显著提高(P<0.05)，这一结果与“大蒜素和枸杞多糖可以提高草鱼血清C3水平”的结果[24]相一致.林希[25]研究表明，紫菜粗多糖不能显著提高斜带石斑鱼血清的C4含量.本试验结果也表明，低、高剂量组小鼠的C4含量有提高，但无统计学意义(P>0.05).可见，一定剂量的RPSLP可以激活部分补体分子，机体非特异性免疫功能是否有提高尚待进一步研究.

本试验结果表明，一定剂量的RPSLP对小鼠有促生长作用，能够显著提高小鼠的免疫器官指数，促进血清免疫球蛋白和补体的分泌，但小鼠各指标的变化与RPSLP的剂量并不呈剂量依赖性.传统中兽医学研究认为，中草药具有双向调节作用.钱华[26]研究表明，饲喂昆明小鼠不同剂量的香菇多糖，与对照组相比，高剂量多糖可破坏脾脏巨噬细胞，使细胞膜模糊不清，有出血现象，而低、中剂量组则无明显变化.本试验结果还表明，高剂量组小鼠的胸腺指数和IgM含量均显著低于空白对照组(P<0.05)，与钱华[26]的研究结果相似，但对于RPSLP产生负作用的具体原因及是否有抑制作用，还需进一步研究确定.

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(责任编辑:施晓棠)

EffectofRadixpseudostellariaestemandleafpolysaccharidesonimmuneorganindexandimmunoglobulin,complementinserumofmice

TAN Xinzhu1, WU Xiaoqing1, LÜ Mingqi1, WANG Guansong1, LI Jian2, QIN Tao2, HUANG Yifan2, MA Yufang1
(1.University Key Laboratory for Integrated Chinese Traditional and Western Veterinary Medicine and Animal Healthcare in Fujian Province, Fuzhou, Fujian 350002, China；2.Fujian Key Laboratory of Traditional Chinese Veterinary Medicine and Animal Health (Fujian Agriculture and Forestry University), Fuzhou, Fujian 350002, China)

S852.2

A

1671-5470(2017)05-0590-05

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2017.05.018

2017-03-21

2017-05-16

福建农林大学科研发展基金资助项目(KF2015092).

檀新珠(1990-)，女，硕士研究生.研究方向：中西医兽医结合.Email:18905026614@163.com.通讯作者马玉芳(1970-)，女，教授，硕士生导师.研究方向：临床兽医学.Email:myfau850@sohu.com.