高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中连翘苷含量

朱影影

(淮南职业技术学院医学院， 安徽 淮南 232001)

高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中连翘苷含量

朱影影

(淮南职业技术学院医学院， 安徽 淮南 232001)

目的： 探索小儿感冒颗粒的其中一个成分连翘苷的含量测定的方法；方法：采用高效液相色谱法， KromasilC18柱(规格：250×4.6 mm，5 μm)，检测波长为202 nm，流动相与乙腈-水的比例为23∶77,流速控制在1.0 ml/min，柱温设定为30 ℃，进样量为10 μl；结果:连翘苷在0.02 104 μg-1.3 466 μg/ml范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.0 %，RSD为1.1 %；结论:该测定方法操作简便、结果准确、重现性好，可用于控制质量。

高效液相色谱法； 小儿感冒颗粒； 连翘苷； 含量测定

小儿感冒颗粒临床上用于小儿风热感冒，症见发热重、头胀痛、咳嗽痰黏、咽喉肿痛；流感见上述证候者，是常用的中药复方制剂，由连翘、大青叶、板蓝根、广藿香、菊花地黄、薄荷、地骨皮、白薇、石膏等10味药物组成。其中连翘具有清热解毒，消肿散结，疏散风热的作用，其主要成分有连翘苷等。目前2015年版《中国药典》小儿感冒颗粒的质量标准中，尚没有对连翘中有效成分的含量进行控制。本文采用高效液相色谱法对该制剂中含有的连翘苷的含量进行测定，从而为进一步完善该药品的质量标准提供一定参考。

1 实验仪器、试药

1.1实验仪器

Empower色谱工作站，型号为Waters2695高效液相色谱仪和Waters2996PDA检测器；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率：350W，频率：40kHz)；型号为FA1104电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；型号为SartoriusBP211D的十万分之一电子天平(北京赛多利斯公司)；型号为SartoriusBS210S的万分之一电子天平(北京赛多利斯公司)；PS-20T超声波清洗机(深圳雷德邦)。

1.2试药

2 方法、实验结果

2.1色谱条件

选用KromasilC18色谱柱 (规格：250×4.6 mm，5 μm)；流动相与乙腈-水的比例为23∶77；设定检测波长为：202 nm，设定流速为：1.0 ml/min，柱温控制：30 ℃，按连翘苷峰计算理论塔板数应大于或等于3000，进样量：10 μl。在上述条件下，连翘苷峰与杂质峰的分离度是符合要求的。

2.2对照品制备

称量连翘苷的对照品10.52 mg，将其置入100 ml的容量瓶中，加入50 %的甲醇溶解，稀释至刻度后，用移液管精密量取5 ml，置25 ml量瓶中，再加入50 %甲醇溶液稀释至刻度，充分摇匀，即得。

2.3供试品制备

取本品，研钵研细，取粉末约10 g，精密称定后，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇溶液50 mL后密塞，称其重量，在超声条件下提取30 min，自然冷却，再称量其重量，然后用甲醇补充减失的重量，充分摇匀，过滤，用移液管精密量取续滤液10 mL，加热蒸至近干时，加中性氧化铝0.8 g拌匀，加在中性氧化铝柱(100～200目，内径1.5 cm，6 g)上，用100 mL 70 %乙醇溶液进行洗脱，把洗脱液收集后，浓缩至干，所得残渣用50 %甲醇溶液溶解，转移至5 mL容量瓶中，再加50 %甲醇溶液稀释至刻度，充分摇匀，用孔径为0.45 μm微孔滤膜进行过滤，取其续滤液即为供试品。另取不含连翘药材成分的样品，按供试品溶液同样的制备方法制成阴性对照品。

2.4阴性干扰

从表1可以看出，由不同位置的实测粒子速度给出的fmax随波传播距离的增加而逐渐降低，这反映了波传播过程中高频成分的耗散。κ和λ在不同频段内的拟合值不同，这表明α(ω)和k(ω)在不同频段内变化的快慢不同，反映了球形应力波在花岗岩中传播的复杂性。

分别取对照品、阴性对照品、供试品三种溶液各10μL，按照上述的色谱条件进样,如图1所示，结果显示阴性对照无干扰。

连翘苷对照品

供试品

阴性对照

2.5线性关系的考察

精密吸取连翘苷对照品溶液(21.04 μg/ml)1、2、4、8、16、32、64μl依次注入液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，记录成分连翘苷的峰面积，以测得连翘苷的峰面积A与连翘苷的浓度C作回归曲线，得到线性回归方程为：A=12 236C-5.969 8；r=0.999 9。通过结果显示：连翘苷浓度在0.021 04～1.346 6μg/ml之间与峰面积呈良好线性关系。

2.6稳定性考察

取已配制的供试品，在室温条件下，对放置不同时间(0、2、4、8、12、24h)的状态测定，最终测得峰面积的RSD为1.2 %。通过试验，表明连翘苷在供试品溶液中24小时内是基本稳定的。

2.7精密度考察

取已配制的对照品，重复进样5次，分别记录其峰面积，结果显示连翘苷的峰面积RSD为0.7 %(n=5)，表明此种方法的进样精密度良好。

2.8重现性考察

取样品6份，按含量测定项下的方法测定连翘苷的含量，其含量的RSD为0.7 %。结果表明：本方法重现性良好。

2.9加样回收率试验

回收率试验 取本品(已测定连翘苷含量为 0. 040 5 mg/g)3 g，共 6 份，精密称定，分别精密加入连翘苷对照品溶液(21.04 μg/ml) 5 mL，按含量测定项下的方法进行测定，结果平均回收率99.0 %，RSD=1.1 %，结果表明本法准确度良好，计算结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.10样品测定

取3批样品(批号分别为1411008,1502012,1502014)，按照上述制备对照品的方法制备供试品溶液，采用上述色谱条件测定峰面积，按照外标法计算其含量，测得连翘苷的含量分别为0.039 8 mg/g、0.040 5 mg/g、0.0403 mg/g。

3.讨论

3.1波长选择

有文献在202 nm、230 nm、277 nm波长处进行测定，进行实验摸索，结果显示在202 nm波长处有较好的图谱，故选202 nm为检测波长。

3.2流动相选择

参考相关文献，对不同流动相进行试验比较，结果以乙腈-水(23∶77)为流动相效果能使连翘苷得到较好的分离。

[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京:化学工业出版社，2010:500-501．

[2] 田雅琴．HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸及连翘苷含量[J]．中成药，2009，31(12):484-485．

[3] 小儿感冒颗粒的质量标准研究[J].世界中医药,2015(3):427-430.

[4] 范磊.小儿感冒颗粒的质量控制方法研究[J].中国医药指南，2013，11(35)：355-366.

[5] 郑小平，杨望.反相高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中连翘苷含量[J].中国药业，2011,20(7)：26-27.

[6] 田雅琴.HPLC测定小儿感冒颗粒中绿原酸及连翘苷含量[J].中成药，2009，31(12)：1965-1967.

2017-06-25

淮南职业技术学院自然科学基金项目“小儿感冒颗粒的质量控制研究”(项目编号：HKJ13-6 )

朱影影(1983-)，安徽淮北人，讲师，研究方向为药物分析。

R286

B

1671-4733(2017)05-0014-02