青海省海北州藏羊群中牛病毒性腹泻病毒和羊边界病毒的流行病学调查

陈云政, 保广财, 张生祥, 韩 梅

(1.青海省门源县农牧和科技局, 青海门源 810300; 2.青海省门源县东川镇克图畜牧兽医站,青海门源 810300)

青海省海北州藏羊群中牛病毒性腹泻病毒和羊边界病毒的流行病学调查

陈云政1, 保广财1, 张生祥2, 韩 梅1

(1.青海省门源县农牧和科技局, 青海门源 810300; 2.青海省门源县东川镇克图畜牧兽医站,青海门源 810300)

为掌握青海省海北州藏羊群中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)的感染情况，采用RT-PCR方法分别对青海省海北州的161份健康藏羊血清样品和34份腹泻藏羊组织样品进行了BVDV和BDV的抗原核酸检测。结果显示：195份样品中BVDV和BDV总阳性率分别为29.74%和14.36%；161份健康藏羊血清样品中BVDV和BDV平均阳性率分别为26.71%和11.80%，BVDV/BDV混合感染率为4.35%；34份腹泻藏羊组织样品中BVDV和BDV平均阳性率分别为44.12%和26.47%，BVDV/BDV混合感染率为17.65%。本研究表明青海省海北州健康藏羊群和腹泻藏羊群中均存在BVDV、BDV的单独感染以及混合感染，且感染情况在个别养殖场(户)较为严重。

藏羊；牛病毒性腹泻病毒；羊边界病毒；流行病学调查

Abstract: To master the situation of bovine viral diarrhea virus and sheep border virus infection in Tibetan sheep in Haibei area of Qinghai province, this research uses the RT-PCR method to detect 161 healthy Tibetan sheep serum samples and 34 diarrhea Tibetan sheep tissue samples for antigen nucleic acid detection of BVDV and BDV in Haibei area of Qinghai province. The results showed that 195 copies of BVDV and BDV in the sample of total positive rates were 29.74% and 14.36%; 161 healthy Tibetan sheep serum samples BVDV and BDV average positive rates were 26.71% and 11.80%, BVDV/BDV mixed infection rate was 4.35%; 34 diarrhea Tibet sheep BVDV and BDV tissue samples average positive rate was 44.12% and 26.47%, BVDV/BDV mixed infection rate was 17.65%. This study shows that BVDV and BDV infection alone or mixed infection in health area and Tibetan diarrhea sheep in Haibei area of Qinghai province is in existence, and infection in individual farms (households) is more serious, the study provides guidance for comprehensive prevention and control measures in Qinghai Tibetan sheep, which enrich the epidemiologic information of BVDV and BDV in China sheep.

Keywords: Tibetan sheep;bovine viral diarrhea virus;sheep border virus;epidemiological survey

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)和羊边界病毒(Border disease virus，BDV)同属于黄病毒科(Flaviridae)瘟病毒属(Pestivirus)，分别是牛病毒性腹泻病(Bovine viral diarrhea，BVD)和羊边界病(Border disease，BD)的致病原[1]。BVDV除感染牛外，还可感染羊、猪以及野生动物，羊感染BVDV后可引起腹泻、母畜流产、死胎和畸胎等[2-3]。BDV主要感染绵羊和山羊，偶有牛、猪和野生反刍动物的感染，羊感染BDV后可引起母羊不孕、流产、产死胎和畸形胎等繁殖障碍和羔羊畸形发育、顽固性腹泻等[4-5]。BVDV和BDV感染均可造成持续性感染和免疫抑制，持续性感染使病畜常年带毒、排毒，成为畜群中的传染源，并可降低机体的免疫力，导致其他病原体的混合和继发感染。藏羊为我国青藏高原所特有畜种，是我国三大原始绵羊品种之一[6]。为调查研究藏羊群中BVDV与BDV的感染现状，丰富我国羊群中BVDV与BDV感染的流行病学资料，为藏羊群中BVDV和BDV综合防控措施的制定提供指导依据，有效保护青海藏羊及藏羊养殖业的健康发展，本研究首次对采集自青海省海北州健康藏羊和腹泻藏羊共计195份样品进行了BVDV和BDV的流行病学调查。

1 材料与方法

1.1 样品来源 2014年10月至2016年6月，采自青海省海北州6个规模养殖场和8个散养户的健康藏羊血清样品161份，腹泻藏羊组织样品34份，检测样品共计195份。

1.2 主要试剂 一步法RT-PCR扩增试剂盒、DL-2000 DNA Marker均购自宝生物工程(大连)有限公司；病毒基因组RNA提取试剂盒购自北京百泰克生物科技有限公司。

1.3 引物设计与合成 参照参考文献[7-8]中的方法，分别设计BVDV和BDV的特异性检测引物(表1)，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表1 引物序列表Tab 1 Primer sequences

1.4 病毒基因组RNA的提取 按病毒基因组RNA提取试剂盒说明书分别提取195份检测样品的病毒基因组RNA。

1.5 RT-PCR扩增与检测 参照一步法RT-PCR扩增试剂盒使用说明书，以提取的病毒RNA为模板，参考文献[7-8]中的方法进行BVDV和BDV的RT-PCR扩增反应(表2)，RT-PCR扩增结束后，取扩增产物经15 g/L琼脂糖凝胶电泳进行检测。

表2 RT-PCR扩增参数Tab 2 RT-PCR amplification parameters

2 结果与分析

2.1 全部样品检测结果 分别采用RT-PCR方法对2014～2016年采自青海省海北州的195份样品进行了BVDV和BDV的检测，共检出BVDV阳性样品58份(部分样品的电泳图见图1)，总阳性率为29.74%；共检出BDV阳性样品28份(部分样品的电泳图见图2)，总阳性率为14.36%。

M为DL-2 000 Marker; 1.2.4.7.8为阳性样品PCR产物;3.5.6.9.10为阴性样品PCR产物M. DL-2 000 Marker; 1.2.4.7.8 Positive sample PCR product;3.5.6.9.10 Negative sample PCR product图1 部分样品BVDV RT-PCR检测结果Fig 1 BVDV RT-PCR results of some samples

M为DL-2 000 Marker; 2.4.6.7为阳性样品PCR产物;1.3.5.8为阴性样品PCR产物M. DL-2 000 Marker; 2.4.6.7 Positive sample PCR product;1.3.5.8 Negative sample PCR product图2 部分样品BDV RT-PCR检测结果Fig 2 BDV RT-PCR results of some samples

2.2 健康样品检测结果 采用RT-PCR方法分别对161份健康藏羊血清样品进行了BVDV和BDV抗原核酸的检测，结果如表3所示，BVDV阳性率在0～66.67%之间，平均阳性率为26.71%；BDV阳性率在0～44.44%之间，平均阳性率为11.80%；其中BVDV/BDV混合感染样品数为7份，混合感染率为4.35%。该结果表明青海省不同地区的健康藏羊群已经存在BVDV、BDV感染，且感染在个别养殖场或散养户较为严重，同时存在BVDV与BDV的混合感染。

2.3 腹泻样品检测结果 如表4所示，采用RT-PCR方法检测腹泻的藏羊组织样品34份，BVDV阳性率在0～66.67%之间，平均阳性率为44.12%；BDV阳性率在0～66.67%之间，平均阳性率为26.47%。其中BVDV/BDV混合感染样品数为6份，混合感染率为17.65%。该结果表明青海省不同地区的腹泻藏羊群存在BVDV、BDV的单独感染以及混合感染，且感染情况在个别养殖场或散养户较为严重，但并非所有出现腹泻症状的场(户)都能检出BVDV或BDV，说明青海省部分地区引起藏羊腹泻的致病原除BVDV和BDV外，还有其他致病原。

表3 健康藏羊血清样品检测结果Tab 3 Results of serum samples from healthy Tibetan Sheep

表4 腹泻样品检测结果Tab 4 Results of diarrhea samples

3 讨论与小结

近几年来，随着我国养羊业的快速发展，羊流通量较大，各种疾病的发生率也逐渐增多，BVDV和BDV的感染情况较为严重，郭芙莉等[9]采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)对随机采自新疆伊犁、塔城等地区的49份羊血清样品进行BVDV抗体检测，BVDV抗体阳性血清样品45份，阳性率达91.8%，BVDV在该地区羊群中较为流行，感染率比较高。李文良等[8]采用RT-PCR方法对江苏部分地区16个养殖场的106份样品进行了BDV的检测，16个场中检出BDV阳性场10个，场阳性率为62.5%，106份样品共检出阳性样品29份，阳性率为27.4%。本次应用RT-PCR方法对青海省海北州的6个规模养殖场和8个散养大户的161份健康藏羊血清样品和34份腹泻藏羊组织样品进行了BVDV和BDV的抗原核酸检测，161份健康藏羊血清样品中BVDV平均阳性率为26.71%，BDV平均阳性率为11.80%，34份腹泻藏羊组织样品中BVDV平均阳性率为44.12%，BDV平均阳性率为26.47%。以上流行病学调查资料共同显示我国羊群中存在BVDV和BDV的感染，且感染情况在部分地区较为严重。同时本研究发现青海藏羊群中存在BVDV/BDV的混合感染，健康藏羊群和腹泻藏羊群中BVDV/BDV的混合感染率分别为4.35%和17.65%，应加强重视。目前国内尚无安全有效的羊用BVDV和BDV商品化疫苗，及时诊断和淘汰带毒病畜成为羊源BVDV和BDV的主要防治方法，故应加强羊群中BVDV和BDV的流行病学调查和监测，及时发现和剔除阳性感染羊，逐步实现羊群中BVDV和BDV的净化，保障养羊业健康发展。本研究为青海藏羊的综合防控措施提供了指导依据，丰富了我国羊群中BVDV和BDV的流行病学资料。

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(编辑：侯向辉)

EpidemiologicalInvestigationofBovineViralDiarrheaVirusandSheepBoundaryVirusinTibetanSheepinHaibeiArea,QinghaiProvince

CHEN Yun-zheng1，BAO Guang-cai1，ZHANG Sheng-xiang2，HAN Mei1

(1.MenyuanCountyofQinghaiProvinceAgricultureandAnimalHusbandryScienceandTechnologyBureau，Menyuan，Qinghai810300，China； 2.MenyuanCountyofQinghaiProvinceTownofDongchuanAnimalHusbandryandVeterinaryStationofTimbuktu，Menyuan，Qinghai810300，China)

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.9.02

2017-03-10

A

1002-1280 (2017) 09-0007-05

S852.65

绒毛用羊产业技术体系(CARS-40-34)

陈云政，兽医师，从事畜牧兽医研究。E-mail：3132809011@qq.com