加味聚精食疗方结合电针督脉对少弱精子症大鼠附睾GPx和MDA的影响

陈鹏典 黎杰运 杨卓欣 陈德宁 黄杏贤 尹绍锴 林婉珊 宁艳 刘芳

·实验研究·

加味聚精食疗方结合电针督脉对少弱精子症大鼠附睾GPx和MDA的影响

陈鹏典 黎杰运 杨卓欣 陈德宁 黄杏贤 尹绍锴 林婉珊 宁艳 刘芳

目的探讨加味聚精食疗方结合电针督脉对少弱精子症大鼠附睾谷胱甘肽过氧化酶(GPx)和丙二醛(MDA)的影响。方法80只健康SD雄性大鼠, 随机分为G1组(正常组)、G2组(模型组)、G3组(加味聚精食疗方组)和G4组(加味聚精食疗方联合电针督脉组), 每组20只。除G1组常规饮食外, 其他组均采用雷公藤多甙片悬混液连续给予大鼠灌胃26 d造成少弱精子症模型。G3组采用加味聚精食疗方灌胃, G4组采用加味聚精食疗方灌胃联合电针督脉。观察四组GPx活性降低及MDA水平。结果与G1组比较, G2组、G3组、G4组附睾GPx活性降低, MDA水平升高, 差异均具有统计学意义(P＜0.01) ；与G2组比较, G3组与G4组附睾GPx活性升高, MDA水平降低, 差异均具有统计学意义(P＜0.01)。G4组附睾GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3组(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3组(18.16±1.57)nmol/mg, 差异均具有统计学意义 (P＜0.01)。结论少弱精子症大鼠附睾GPx活性降低, MDA 水平升高。加味聚精食疗方联合电针督脉可一定程度提高其附睾GPx 活性, 降低MDA水平,从而改善附睾微环境和调控效应, 加快精子成熟, 提高生育力。

少弱精子症；加味聚精食疗方；督脉

不育症是男科常见疾病, 也是影响男女双方身心健康世界性难题。据世界卫生组织(WHO)调查表明, 从20世纪中期开始男性精子质量逐年呈下降趋势。近年来的诸多研究表明, 中医药可通过调节细胞凋亡和途径、促进精子能量代谢以及清除氧自由基等途径改善精子质量［1］。也有研究认为,附睾精子氧化/抗氧化系统在生精细胞凋亡中起着重要的影响。本实验通过测定出少弱精子症大鼠附睾中GPx活性和MDA水平, 以附睾氧化/抗氧化系统作为切入点, 探讨加味聚精食疗方联合电针督脉对少弱精子症的作用机制, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物健康SPF级SD大鼠 80只, 体重约200 g, 饮用自来水, 以标准饲料喂养。将其随机分为G1组(正常组)、G2组(模型组)、G3组(加味聚精食疗方组)和G4组(加味聚精食疗方联合电针督脉组), 每组20只。

1.2 模型制备雷公藤多甙片加双蒸水配成5 mg/ml的悬混液。除G1组常规饮食外, 其他组均以悬混液20 mg/kg连续给予大鼠灌胃26 d制备少弱精子症模型。G3组给予加味聚精食疗方(深圳市中医院制剂室制备)6.3 g/kg连续灌胃干预26 d, 1次/d。G4组给予加味聚精食疗方6.3 g/kg连续灌胃联合督脉电针干预26 d, 1次/d。穴位选取督脉穴位命门、腰阳关以及十七椎。采用电针仪疏密波刺激(疏波30 Hz, 密波100 Hz), 强度6～15 V, 以身体相应部位出现轻微颤动为准, 持续20 min。

1.3 指标测定受试大鼠在干预治疗26 d后, 以5%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉, 剖开腹腔, 在无菌条件下快速取出大鼠双侧附睾组织, 加入冷生理盐水, 采用眼科剪小心剪碎后放于组织匀浆器里, 待冰上匀浆15 min后, 3500 rpm/min离心15 min。取上清液制成10%的附睾匀浆液, 分光光度计比色法测算GPx和 MDA水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

与G1组比较, G2组、G3组、G4组附睾GPx活性降低,MDA水平升高, 差异均具有统计学意义 (P＜0.01) ；与G2组比较,G3组与G4组附睾GPx活性升高, MDA水平降低, 差异均具有统计学意义 (P＜0.01)。G4组附睾GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3组(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3组(18.16±1.57)nmol/mg, 差异均具有统计学意义 (P＜0.01)。见表1。

表1 四组大鼠附睾中GPx活性和MDA水平比较

表1 四组大鼠附睾中GPx活性和MDA水平比较

注：与G1组比较,aP＜0.01；与G2组比较,bP＜0.01；与G3组比较,cP＜0.01

组别 只数 GPx(U/mg)MDA(nmol/mg)G1组 20 103.66±8.67 10.90±1.47 G2组 20 64.00±3.63a23.18±3.13aG3组 20 70.92±3.35ab18.16±1.57abG4组 20 80.79±5.72abc14.46±2.36abc

3 讨论

传统中医认为, 脾为先天之本, 而肾为后天之本。脾气健旺是气血化生之根源, 而肾之阴精是化生精液的物质基础。因此, 对于稍弱精子症的治疗, 多从脾肾论治。前期研究［2-4］表明, 加味聚精食疗方可上调少弱精子症大鼠睾丸间质细胞表皮生长因子 (EGF)及其受体(EGFR)的表达水平, 改善大鼠曲细精管组织结构的受损状态, 从而提升其附睾精子密度、a级精子和精子总活率。本方主要由鱼鳔、龟板胶、人参、枸杞和瘦猪肉组成, 选药精炼, 组方严谨, 脾肾同治, 药食联合, 口感颇佳［5］。督脉为“阳脉之海”, 主统督阳气, 起于胞中, 下出会阴, 乃生命之所系, 一身元气之所在［6］。“其络循阴器, 合篡间, 绕篡后, ……其男子循茎, 下至篡, 与女子等”,故督脉的络脉循行阴茎。从西医生理学以及解剖学角度上看,男性的低级性兴奋和射精中枢均位于骶椎, 乃督脉循行, 故男性阴茎的勃起、射精反射均与督脉的功能有关。通过针刺督脉经穴如命门、腰阳关、十七椎等鼓动阳气, 其阴茎勃起坚挺持久, 前列腺收缩有力, 性高潮时射精有劲, 快感显著,提高其射精量。

少弱精子症的病因和发病机制十分复杂, 近年来, 越来越多的研究表明, 氧自由基(ROS)与精子高活跃性运动获能和顶体反应等生理功能以及精子活力下降和DNA氧化应激等病理机制密切相关。ROS产生过多是造成男性少弱精子症的重要病因之一。正常状态下, 精浆中存在的对抗活性氧的酶如GPx可清除ROS, 但脂质过氧化物生成的物质如MDA等具有细胞毒性, 可妨碍线粒体功能和诸多酶活性［7］。生理状态下, 机体氧化/抗氧化系统基本处于平衡状态, 但在少弱精子症状态下, 活性氧的调控机制打破, 精子膜活性氧受体上调, 再加上细胞炎性因子的刺激, 导致活性氧生成异常增加。同时酶清除系统效率无相应的增多甚至下降, 导致活性氧损害精子功能, 引起少弱精［8-10］。

本研究结果显示, 与G1组比较, G2组、G3组、G4组附睾GPx活性降低, MDA水平升高, 差异均具有统计学意义(P＜0.01)；与G2组比较, G3组与G4组附睾GPx活性升高,MDA水平降低, 差异均具有统计学意义 (P＜0.01)。G4组附睾GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3组(70.92±3.35)U/mg,MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3组(18.16±1.57)nmol/mg,差异均具有统计学意义 (P＜0.01)。

综上所述, 加味聚精食疗方联合电针督脉可一定程度提高其附睾GPx 活性, 降低MDA水平, 从而改善附睾微环境和调控效应, 加快精子成熟, 提高少弱精子症大鼠的生育力。

［1］ 陈鹏典, 黎杰运, 杨卓欣, 等.中医药对生精细胞凋亡干预机制研究进展.辽宁中医药大学学报, 2017, 19(3):110-113.

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［3］ 陈慰填, 陈德宁, 覃湛, 等.加味聚精食疗汤对少精、弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究.辽宁中医药大学学报,2009, 11(9):178-180.

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［5］ 陈德宁, 覃湛, 马庆辉, 等.加味聚精食疗方对少精子症患者精子质量的影响.南京中医药大学学报, 2007, 23(3):184-185.

［6］ 陈鹏典, 杨卓欣, 黎杰运, 等.任督脉与孕育的相关性探析.中国民族民间医药, 2016, 25(13):49-53.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.18.109

2017-07-24］

深圳市科技计划基础研究项目(项目编号：JCYJ20150402090413003)

518028 深圳市妇幼保健院(陈鹏典 宁艳 刘芳)；北京大学深圳医院(黎杰运)；广州中医药大学附属深圳市中医院(杨卓欣 陈德宁 黄杏贤 尹绍锴 林婉珊)

黎杰运