海洋菌株ZDC-03对番茄根结线虫杀线活性及防效的初步研究

雍道敬，祝帅，朱凤蒙

（青岛中达农业科技有限公司，山东青岛266316）

海洋菌株ZDC-03对番茄根结线虫杀线活性及防效的初步研究

雍道敬，祝帅，朱凤蒙

（青岛中达农业科技有限公司，山东青岛266316）

本研究通过液体浸渍法和盆栽试验，分别测定了海洋菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫的室内杀线活性和盆栽防治效果。室内试验结果表明，菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫二龄幼虫具有较高的杀线活性，3d和5d的校正死亡率分别为81.4%和82.1%。盆栽试验结果显示，菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫有较好的防治效果，且在试验期间防效随着番茄幼苗移栽时间的延长而升高。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03发酵液的防效为66.58%～72.78%，而1.8%阿维菌素乳油处理的防效为67.79%。

海洋菌株ZDC-03；番茄根结线虫；杀线活性；盆栽试验

根结线虫是危害番茄的主要病害之一，随着保护地日光温室数量的增加，加之复种及重茬现象严重，导致根结线虫危害日趋严重，一般可造成减产10%～20%，严重时可达30%～40%，甚至绝产，造成了巨大的经济损失[1-3]。目前，根结线虫的防治主要以轮作、化学防治等方法为主。其中轮作防病因一些特殊经济作物或特定地区无法达到合理轮作的要求，具有较大的局限性[4,5]。化学防治具有立竿见影的预期效果，所以被大家广泛应用。但化学药剂的长期使用，易造成农药残留、病虫抗药性增强等副作用，正逐步被限制使用。生物防治具有对人畜安全，不污染环境，不易产生抗药性等特点越来越被大家重视。

海洋微生物具有遗传和代谢的特殊性，能够产生新型生物活性物质，具有重要的开发价值，因此利用海洋微生物寻找新的生防资源成为了目前研究的热点。MengQ H等[6]发现了一株显著杀松材线虫的海洋真菌（Acremoni umsp.）。于洁等[7]筛选出一株对松材线虫具有较强杀线活性的海洋细菌G-23，用其发酵上清液处理松材线虫24h后，线虫的校正死亡率可达82%。黄敏等[8]研究认为海洋枝顶孢霉BH0531对黄瓜根结线虫活性较高，并且可以促进细菌和放线菌生长，降低土壤真菌化程度，改善土壤微生态环境。本研究从山东省青岛市红岛沿海滩涂的泥土中分离筛选出一株海洋细菌ZDC-03，经鉴定该菌株为甲基营养型芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus），笔者对该菌株的室内杀线活性及盆栽防效进行了研究测定。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试菌株：甲基营养型芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）ZDC-03保存于技术中心生物实验室。

供试培养基：2216E培养基（酵母提取物1g，蛋白胨5g，琼脂粉20g，过滤后的海水1000mL，pH调至7.4～7.5），用于海洋细菌菌株的活化与保存。LB液体培养基（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2），用于菌株ZDC-03的发酵培养。

供试线虫：供试线虫由番茄保护地的番茄病根上获取。取番茄病根，用蒸馏水清洗表面土壤后，用解剖针挑取根结内部卵块，放入装有无菌水的培养皿中，28℃静置孵化24h；收集孵化的根结线虫二龄幼虫（J2），于三角瓶中轻轻混匀，获得线虫悬液（约100条/mL），4℃保存备用。

药剂：1.8%阿维菌素乳油，陕西美邦农药有限公司，市场购买。

供试作物：番茄，品种为“大明星”。

供试土壤：供试沙壤土经100℃高温灭菌30min，经检查无线虫存活后，向其中加入线虫悬液，使土壤中根结线虫浓度为5条/10g。加入线虫悬液后的土壤称为带线土，每个花盆装带线土2kg。

1.2 方法

1.2.1 菌株ZDC-03的液体发酵

取实验室保存的菌株ZDC-03，在2216E培养基上进行活化培养3d后，接种于LB液体培养基中，于30℃、180r/min振荡培养72h，得到菌株ZDC-03种子液。按2%的初始接种量接种于98mL新鲜LB液体培养基中，按上述条件继续培养72h，即为菌株ZDC-03发酵液。

1.2.2 菌株ZDC-03室内杀番茄根结线虫活性测定

以采集的番茄根结线虫为供试线虫，采用24孔板液体浸渍法[9]进行杀线虫活性室内测定。在24孔板中分别加入100μL线虫悬液，100μL发酵液和300μL无菌水，用移液器轻轻吹打均匀，试验设置3个重复，以空白发酵培养基代替发酵液作对照。于28℃放置1d、3d、5d后在倒置显微镜下观察，虫体僵直或卷曲的即视为死亡，计算线虫校正死亡率。

1.2.3 菌株ZDC-03对番茄根结线虫防效的盆栽试验

将番茄种子用1%NaClO表面消毒10min后，用无菌水冲洗3遍，于培养皿中催芽后播种。待番茄幼苗达到5叶龄时，将长势一致的苗子移栽到装有带线土的花盆中，每盆3株。试验共有4处理，①加入50mL甲基营养型芽孢杆菌ZDC-03发酵液；②加入100mL甲基营养型芽孢杆菌ZDC-03发酵液；③加入50mL 1.8%阿维菌素乳油2000倍液；④加入50mL清水作为对照。每个处理3盆番茄幼苗，试验重复3次。

1.3 调查及计算方法

试验第30d和第45d检查结果。检查时将番茄苗与土全部取出，用流水缓缓冲洗根部，直至将泥土全部冲掉，每株番茄幼苗根部分东、西、南、北、中五个方位随机采样，每个方位选取2个完整根，共计10个。统计番茄根部根瘤发生的严重程度，进行病情分级，计算防治效果。

番茄根结线虫病情分级标准见表1。

表1 番茄根结线虫病情分级标准

按下列公式计算病情指数和防治效果：

1.4 数据分析

采用SPSS17.0进行数据统计，用Duncan氏新复极差法进行差异显著性分析（P＜0.05）。

2 结果与分析

2.1 菌株ZDC-03室内杀线活性测定

以无菌水作为对照（CK），对菌株ZDC-03发酵液进行了杀线虫活性的测定，结果见表2。菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫二龄幼虫的杀线活性随着时间的增加而升高，3d和5d的校正死亡率分别为81.4%和82.1%，两者之间不存在显著性差异，但均显著高于1d的校正死亡率。

表2 菌株ZDC-03对番茄根结线虫二龄幼虫的杀线活性

2.2 菌株ZDC-03对番茄根结线虫防效的盆栽试验

菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫有一定的防治效果，见表3。番茄幼苗移栽30d后，菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫的防效为63.53%～69.52%，且施用菌株ZDC-03发酵液100mL处理的防效与1.8%阿维菌素乳油处理的防效不存在显著性差异。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03发酵液50mL、100mL的处理防效比30d时均有升高，而1.8%阿维菌素乳油的处理防效下降至67.79%，显著低于施用菌株ZDC-03发酵液100mL的处理。

表3 菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫的盆栽试验

3 讨论

海洋来源的菌株ZDC-03是一株以番茄根结线虫为靶标筛选出的生防菌，具有较高的杀线活性。室内活性测定结果表明，菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫二龄幼虫3d和5d后的校正死亡率分别为81.4%和82.1%，并有持续升高的趋势，表明该发酵液的杀线活性具有时间延续性，且能维持在较高水平。盆栽试验结果显示菌株ZDC-03发酵液对番茄根结线虫有一定的防治效果，且防效随着番茄幼苗移栽时间的延长而升高。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03发酵液的防效为66.58%～72.78%，1.8%阿维菌素乳油的处理与施用ZDC-03发酵液50mL的处理防效相当，且显著低于施用菌株ZDC-03发酵液100mL的处理。

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Preliminary Study on the Nematicidal Activity and Control Efficiency of Marine Strain ZDC-03 on Tomato Root-knot Nematodes

YONG Dao-jing,ZHU Shuai,ZHU Feng-meng
(Qingdao Zhongda Agritech Co.,Ltd.,Qingdao 266316,China)

In this study,the nematicidal activity and control efficiency of fermented liquid of marine strain ZDC-03 on tomato root-knot nematodes were respectively determined by immersion test and pot experiment.The results showed that fermented liquid of marine strain ZDC-03 had high nematicidal activity on tomato root-knot nematodes,corrected mortality rates of 3d and 5d were 81.4%and 82.1%.Strain ZDC-03 had better control effect on tomato root-knot nematode,and the control effect increased with the transplanting time of tomato seedlings during the test.After the transplanting of tomato seedlings for 45 days,the control effect of the strain ZDC-03 was 66.58%～72.78%,while the 1.8%avermectin EC treatment was 67.79%.

Marine strain ZDC-03;tomato root-knot nematodes;nematicidal activity;pot experiment;

S436.412

A

1008-1038(2017)09-0016-03

10.19590/j.cnki.1008-1038.2017.09.005

2017-06-20

雍道敬（1987—），女，助理工程师，主要从事农业病虫害生物防治工作