参附注射液在家兔单肺通气中的肺保护作用

薛剑锋 陈东昊 陈春婷

（1.牡丹江医学院红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011；2.黑龙江省牡丹江市肿瘤医院，黑龙江牡丹江 157000）

参附注射液在家兔单肺通气中的肺保护作用

薛剑锋1陈东昊1陈春婷2

（1.牡丹江医学院红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011；2.黑龙江省牡丹江市肿瘤医院，黑龙江牡丹江 157000）

目的 观察参附注射液对兔单肺通气中的肺保护作用。方法 家兔36只，随机分成双肺通气组（Z组）、单肺通气组（D组）和单肺通气用药组（S组）各12只。测量肺通气前、中、后肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量，单肺通气后检测两组脏器组织超氧化物歧化酶（SOD）、肺含水率、肺组织湿/干质量比（W/D）、对组织切片进行肺损伤评分。结果 与Z组相比，D组、S组的TNF-α含量、W/D值升高（P＜0.05），肺组织中SOD值降低（P＜0.05）。与Z组相比，D组肺脏肺间质水肿，肺泡壁炎性细胞浸润。S组组织切片肺泡壁扩大，没有明显的炎性细胞浸润。结论 参附注射液在家兔单肺通气中有降低肺组织损伤的作用。

参附注射液 家兔 单肺通气 肺保护

临床胸外科手术过程中，为给术者提供更好的手术野，单肺通气技术的应用已经非常广泛，随着双腔支气管导管技术不断改进，单肺通气的安全性及成功率有显著提高。但是，单肺通气多数采取侧卧位，使通气/血流比例失调，非通气侧肺内产生分流，极易发生低氧血症，据报道发生率为9%～27%［1］，易引起肺损伤等并发症。据报道，随着单肺通气时间的延长，损伤的程度逐渐加重，且非通气侧比通气侧严重［2］。本研究通过探索参附注射液对家兔单肺通气中肺组织的保护作用。以期为临床治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 动物 已成年的健康雄性大白兔36只，体质量（2.0～2.5）kg，由牡丹江医学院实验动物中心提供。随后将动物采用随机数字表法随机分成3组，双肺通气组（Z组）、单肺通气组（D组）和单肺通气用药组（S组）各12只。

1.2 试剂与药物 兔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）测定试剂盒，超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，参附注射液（999药业有限公司）。

1.3 造模与给药 制作双腔支气管导管.按照临床使用的双腔气管导管原理进行制造，将一根内径为1.6 cm的塑料管和一根外径2.0 cm的塑料管紧密固定在一起，长约20 cm左右。管路连接的地方用胶进行密封，防止漏气。最外层用隐形胶带加以固定。双腔管左侧管腔比右侧的管腔长出约0.9 cm左右，高温定型成略向左侧翘起，这样进入左侧支气管的几率大；离左侧支气管头部约5.5 mm的地方用布条包绕，用隐形胶带固定布条，制作成长约2.9 mm、横径约3.1 mm的膨大区域，防止机械通气时漏气。塑料导管均做成向右侧开口的斜口，斜口的长径2.4～2.6 mm。双腔气管导管与麻醉机接头为T形管，采用水下吹气的方法检测各接头处的气密性，并检测整个管道的内容积为 1．7 mL［2］。 36只大白兔行肌肉注射异丙酚2 mg/kg，用1.33%的利多卡因进行局部麻醉，游离出右侧的股静脉和股动脉。股静脉用于输液，0.9%氯化钠注射液按 8 mL/（kg·h）的速度输注以补充血容量，股动脉用于采血以及测量血压，钝性分离主支气管，同时静脉注射维库溴铵1 mg/kg，进行气管插管并行机械通气，呼吸频率40次/min，潮气量8 mL/kg。持续泵注丙泊酚和瑞芬太尼来维持麻醉深度。术中维持心率血压的平稳。

1.4 指标检测 1）TNF-α：TNF-α 含量于插管前、插管后1 h、插管后2 h分别经动脉取血1 mL，通过离心制取血浆，零下70℃以上留存，根据TNF-α放射免疫分析测定试剂盒描述方式测定TNF-α含量。2）肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）含量：用已经制备好的家兔肺脏匀浆，根据试剂盒的相关要求和方法测定肺脏SOD的含量。3）肺组织含水率按照公式：肺组织含水率肺组织的湿质量与干质量的差，与肺组织湿质量的比值。分别取下左、右两侧肺叶，直接称重，然后再称经过处理的肺组织干质量，计算家兔肺组织湿／干质量比（W／D）。4）形态学观察：研究实验结束后，取小块家兔肺脏组织，在光镜下观察肺组织形态血方面的变化。再取一块家兔肺组织，浸泡于甲醛溶液中24～48 h，制作石蜡切片，应用HE染色后，用光学显微镜观察家兔肺组织病理形态，根据镜下形态进行评分。评分内容包括肺泡内充血情况、肺泡水肿、肺组织中性粒细胞浸润及肺组织间质水肿等，依据观察的严重程度评分（非常轻微、无病变计0分；轻度病变计1分；组织中度病变计2分；重度病变计3分；非常重度病变计4分），同时计算各项指标的总得分为肺损伤评分［3-4］。

1.5 统计学处理 应用SPSS22.0统计软件。包括资料录入、数据整理，数据统计分析处理，计量资料以（s）表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组血浆TNF-α及SOD检测结果 见表1。与单肺通气前相比，3组在单肺通气后TNF-α的值均逐渐增加，单肺通气后2 h升高最明显（P＜0.05）。与Z组相比，D组、S组的TNF-α含量在单肺通气后1 h和2 h显著增高（P＜0.05），但是在单肺通气后 2 h，S组增高的幅度显著低于D组（P＜0.05）。

表1 各组血浆中TNF-α变化及SOD值比较s）

表1 各组血浆中TNF-α变化及SOD值比较s）

组 别 单肺通气前 单肺通气后1 h 单肺通气后2 h SOD值Z组D组73.47±3.12 84.62±5.79 90.72±8.02 8.82±0.12 73.72±3.59 161.29±6.96 471.00±23.15 4.01±0.11 S组73.91±3.82 151.80±8.14 343.86±10.34 6.97±0.16

2.2 各组肺组织损伤评分结果 见表2。Z组左右侧肺损伤评分没有睡眠差异，其余两组左侧评分比右侧高，D组左侧肺损伤评分最高，差异有统计学意义（P＜0.05）。肺组织W/D比值比较发现，Z组左右侧比较没有统计学意义（P＞0.05），D组，S组左右侧比较，W/D值左侧高于右侧。各组间左侧比较D组升高最多。

表2 各组肺部W/D比及损伤评分比较s）

表2 各组肺部W/D比及损伤评分比较s）

组 别 时 间 W/D比 损伤评分Z组 左肺 3.82±0.06 2.16±0.04右肺 3.83±0.07 2.16±0.06 D 组 左肺 5.05±0.22 7.43±0.14右肺 4.59±0.15 4.06±0.15 S组 左肺 4.86±0.14 5.32±0.14右肺 3.99±0.13 2.36±0.06

3 讨 论

单肺通气就是两侧肺单独通气，患侧肺萎陷停止通气，在胸科手术中得到广泛应用，为手术提供良好视野，为手术提供了极大的便利。长时间的接受单侧肺通气可导致急性肺脏损伤，肺脏损伤的程度与单肺通气的时间相关，并且非通气侧肺脏损伤的程度要比通气侧肺脏损伤的严重［2，5］。参附注射液系从古方《校注妇人良方·卷九》“参附汤”化裁而来。参附注射液以现代化的先进技术提取附子和人参中的有效成分，包括红参皂苷、多根乌头碱等生物活性成分，对于因多种疾病而致气阴两虚的患者有大补元气、温阳、回逆救脱、益气摄血的功效［6］。

有研究报道［7-8］，参附注射液对于肺脏损伤有很好的保护作用。据艾宇航等［9］研究报道，根据他们对肺脏组织中NF-κB及血液早期细胞因子TNF-α的观察，发现参附注射液能够使肺损伤时活化的NF-κB含量明显降低，且能有效的降低血液中TNF-α含量，证明参附注射液具有保护肺脏的作用。NF-κB信号转导通路与细胞凋亡及炎症反应有密切关系，参附注射液能够增加心肌组织中NF-κB抑制蛋白IκB-α的水平，阻断NF-κB调控的炎症反应，减轻组织损伤［10］。

本研究中，3组血浆中TNF-α含量在研究中都有增加，S组与D组在单肺通气1 h后TNF-α的含量增加很多，与Z组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。单肺通气后 2 h，D组 TNF-α升高的幅度很大，S组TNF-α的升高幅度有所下降。根据作用和产生的时间不同，细胞因子可以分为两类：促炎细胞因子或早期细胞因子，TNF-α、IL-1等。抗炎细胞因子或远期细胞因子，IL-10、IL-4等。TNF-α是促炎细胞因子，也可以叫早期细胞因子，它可以诱导抗炎细胞因子的产生，使促炎因子和抗炎因子同时升高，表明机体此时的损伤程度比较重。TNF-α在3组中都有所升高，并且在2 h后升高的最明显，应用参附注射液的S组中，血浆TNF-α的升高程度明显减轻，说明参附注射液在一定程度上抑制TNF-α的升高，抑制机体过度炎症反应。这可能是由于参附注射液降低血浆中TNF-α，IL-1β水平，并下调TNF-α、IL-1β的mRNA表达，参附注射液通过抑制细胞因子产生，从而达到减轻炎症反应对单肺通气时肺脏的损伤，从而改善肺脏功能。

SOD是一种活性物质，它能够清除新陈代谢的有害物质，清除氧自由基保护细胞免受损害。应用氧自由基清除剂可以减少多器官损伤的发生率，这可为减轻组织损伤提供方法［11-12］。测量SOD的含量能够间接的反映出组织对抗炎抗氧化反应的状态。与Z组相比，D组的SOD含量较低，说明D组SOD消耗较大，同其他两组炎症反应严重。根据文献报道［13-14］，参附注射液能够增强SOD的活性、并抑制内皮素合成与释放、增加一氧化氮合成与释放及其代谢产物的水平，调节一氧化氮和内皮素之间的平衡，从而改善内皮细胞功能，调节家兔心肌缺血/再灌注时自由基介导的内皮功能紊乱，减轻心肌细胞损伤。参附注射液可提高超氧化物歧化酶的活性，并减少细胞内游离钙离子浓度，防止钙超载，清除氧自由基，抑制脂质过氧化物产生，改善微循环，保护内皮细胞不受损伤［15-16］。本研究中，S组应用参附注射液，SOD活力增强，能够有效的清除氧自由基，减少受损细胞的数目达到保护肺脏的目的。

参附注射液在家兔单肺通气中，通过降低TNF-α在血液中的含量，增强SOD的活性，起到降低肺组织损伤的作用。

［1］Slinger P，Triolet W，Wilson J．Improving oxygenation during one-lungventilation［J］．Anesthesiology，1988，68（2）：291-295．

［2］游志坚，姚尚龙，梁华根.不同时间单肺通气后兔两侧肺损伤程度比较［J］.中国急救医学，2007，27（2）：133-135.

［3］Sinclair SE，Ktegenow DA，Lamm WJ，et al．Hyperoapnic acidosis is protective in an in vivo model of ventilator-induced lung injury［J］．Am J Respir Crit Care Med，2002，166（3）：403-408．

［4］张波，刘又宁．气管内吹气对机械通气相关性急性肺损伤保护作用的实验研究［J］．中国危重病急救医学，2000，12（1）：42-l7．

［5］王利华，黄利群，吕红博，等．参附注射液的药理作用与临床应用［J］．华北国防医药，2010，22（6）：535-536．

［6］许济群．方剂学［M］．5 版．上海：上海科学技术出版社，1985：6．

［7］罗魂，万兰青．马超英，等．参附注射液对兔内毒素休克肺损伤的保护作用［J］．中国危重病急救医学，1995，7（2）：68．

［8］邵丰，郑世营，赵军，等．参附注射液对免离体肺缺血／再灌注保护作用的实验研究［J］．中国急救医学，2006，26（3）：195-197．

［9］艾宇航，彭鎏，张丽娜．参附注射液对内毒素所致肺损伤的保护作用［J］．中国急救医学，2006，26（4）：285-286．

［10］薛建军，呼荟茹，齐兵献，等．参附注射液对心肌缺血再灌注老年大鼠NF-KB及IKB-α表达的影响［J］．西部中医药，2013，26（2）：18-21．

［11］Fan J，Kapus A，Li YH，et al.Priming for enhanced dveolar fibrin deposition after hemorrhagic shock：role of tumor netrosis factory［J］.Am J Respir Cell Mol Biol，2000，22（5）：412.

［12］Mota Filipe H，Mcbonald MC，Cuzzocrea S．A membrane-permeable radical scavenger reduces the organ injuly in hemorrhagic shock［J］．Shock，1999，12（3）：225．

［13］金旭鹏，郭敬姝．参附注射液对充血性心衰患者内皮功能的影响［J］．中国中医急症，2007，16（4）：424-425．

［14］崔巍，郭莲怡．参附注射液对兔心肌缺血再灌注损伤中内皮功能的影响 （英文）［J］．中国现代医学杂志，2007，17（21）：2561-2564．

［15］刘欣，杨引，刘新．参附注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌能量代谢的影响［J］．中国中医急症，2009，18（7）：1117-1118．

［16］Cao J，Zheng CD，Zheng GX，et al．Protective effect of Shenfu injection on myocardial mitochondfia injured by ischemiareperfusion in rabbits［J］．Chin Med J（Eng1），2005，118（6）：505-507．

R285.5

A

1004-745X（2017）09-1593-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.09.027

2017-05-03）