气相色谱法同时测定中药口服液体制剂中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陈睿彦，李艳，陈明涓

(昭通市食品药品检验所，云南 昭通 657000)

·中药工业·

气相色谱法同时测定中药口服液体制剂中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陈睿彦，李艳，陈明涓

(昭通市食品药品检验所，云南 昭通 657000)

目的：建立同时测定中药口服液体制剂中丙酸、山梨酸、苯甲酸含量的分析方法。方法：采用气相色谱—火焰离子化检测器(FID)对3种化合物进行检测，经毛细管柱DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)分离后用标准曲线法进行定量分析。结果：丙酸、山梨酸及苯甲酸在25～400 μg·mL-1线性关系良好(相关系数均≥0.999)，检出限分别为0.6、0.5、1.3 μg·mL-1。实样测定时，加样回收率分别为97.95%～102.75%(RSD=1.71%)、96.28%～102.37%(RSD=1.85%)和97.65%～103.51%(RSD=1.98%)。结论：本方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于测定中药口服液体制剂中丙酸、山梨酸、苯甲酸的含量。

毛细管柱气相色谱；中药口服液体制剂；丙酸；山梨酸；苯甲酸

中药口服液体制剂因其含水量相对较高、所含营养物质丰富，故易被微生物污染[1-2]。为保证此类制剂安全有效，需向其添加适量的防腐剂以抑制微生物的生长繁殖，从而达到有效的防腐目的[3]。然而防腐剂选择不当或超剂量使用会对人们的身体健康造成损害[4]，为中药口服液体制剂开发其防腐剂的含量测定方法，对保障临床用药安全具有重要意义。丙酸、山梨酸及苯甲酸是中药口服液体制剂中3种常见的防腐剂，现有文献报道检测中药口服液体制剂中山梨酸、苯甲酸的含量[5-8]，但尚未见同时测定这3种防腐剂含量的文献报道。本文建立了盐酸酸化样品，乙醚提取，毛细管柱分离的样品测试方法，可同时测定丙酸、山梨酸及苯甲酸，为在中药口服液体制剂中控制这3种防腐剂含量提供依据。

1 仪器与试药

安捷伦7890A型气相色谱仪，配有自动进样器和火焰离子化检测器；Agilent OpenLAB CDS化学工作站；天平AB265-S(德国梅特勒公司)。

丙酸(AccuStandard，批号：20742，纯度：100%)；山梨酸(Dr.Ehrenstorfer，批号：20531，纯度：99.0%)；苯甲酸(Dr.Ehrenstorfer，批号：71105，纯度：99.5%)；乙醚(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20141215，分析纯)；盐酸(重庆川东化工集团有限公司化学试剂厂，批号：20090422，分析纯)；水为超纯水。

中药口服液体制剂为4个品种：益气养血口服液(批号：20741221)、双黄连口服液(批号：15083131)、健儿消食口服液(批号：14119004)、抗病毒口服液(批号：20140305)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为DB-WAX石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；载气为高纯氮气(纯度≥99.999%)；进样方式：不分流进样；进样体积1 μL；恒流模式：载气流速为2.0 mL·min-1；氢气流速：45 mL·min-1；空气流速：400 mL·min-1；进样口温度：200 ℃；检测器温度：250 ℃；柱温采用程序升温：初始温度40 ℃，以5 ℃·min-1升至130 ℃，再以10 ℃·min-1升至200 ℃，保持6 min；后运行：220 ℃，5 min。

2.2 溶液的配制

对照品储备液：精密称取丙酸、山梨酸、苯甲酸对照品各10 mg于10 mL量瓶中，加乙醚溶解并稀释至刻度，摇匀，得各组分质量浓度为1 mg·mL-1的对照品储备液。

供试品溶液：精密量取供试品2 mL，置于50 mL比色管中，加入6 mol·L-1盐酸0.5 mL，摇匀。再加入20 mL乙醚，振摇3 min后静置5 min，取上清液待测。对定量时超出标准曲线范围的供试品溶液用乙醚准确稀释后再测定。

2.3 专属性试验

在上述色谱条件下，丙酸、山梨酸与苯甲酸的色谱峰能完全分离，保留时间分别为15.0、24.6、28.3 min，见图1。

2.4 重复性试验

精密量取2.5中对照品溶液，按照2.1的色谱条件重复进样5次，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面积RSD分别为1.3%、1.3%和1.8%。

注：A.对照品溶液；B.供试品。图1 益气养血口服液GC图

2.5 精密度试验

取对照品储备液适量，加乙醚配制成低、中、高3个质量浓度(25、100、400 μg·mL-1)的溶液。考察方法的日内和日间精密度(RSD)。结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.6 稳定性试验

取2.5中对照品溶液，分别于0、6、12、24、48 h测定，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面积的RSD分别为1.3%、1.4%、2.0%。表明3种成分在48 h内均稳定。

2.7 线性关系考察

分别精密量取不同体积的丙酸、山梨酸与苯甲酸对照品储备液，加乙醚稀释成丙酸、山梨酸与苯甲酸含量分别为25、50、100、200、400 μg·mL-1的混合标准溶液。精密吸取1 μL注入气相色谱仪，以各组分的峰面积Y为纵坐标，进样质量浓度X(μg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线。结果见表2。

表2 各成分回归方程及相关系数

2.8 检出限及定量限

取2.7中溶液，逐级稀释成系列浓度，分别进样1 μL，当峰高为基线噪音的3和10倍量时，测得丙酸、山梨酸与苯甲酸的检出限分别为0.6、0.5、1.3 μg·mL-1；定量限分别为1.8、1.6、4.4 μg·mL-1。

2.9 加样回收率试验

取已知丙酸、山梨酸及苯甲酸含量的样品(批号：20741221)9份，按高、中、低浓度分别精密加入混合对照品溶液10、20、30 mL，按2.2方法制备供试品溶液。精密吸取1 μL注入气相色谱仪，测定含量，计算回收率，结果见表3。

表3 回收率试验结果(n=3)

2.10 样品含量测定

照2.2方法制备供试品溶液，对4种口服液中丙酸、山梨酸及苯甲酸含量进行测定，每份样品平行测定2次，取平均值。结果见表4。

表4 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 前处理方法的建立

有文献报道样品用盐酸溶液酸化乙醚提取后，将提取液浓缩近干，经丙酮溶解待测。作者用乙醚提取后取上清液直接进样，结果准确可靠且便捷。

3.2 色谱柱的选择

测试HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)、DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 μm)和DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)不同极性色谱柱对丙酸、山梨酸、苯甲酸的分离效果，发现DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)对这三种物质的分离效果最佳。

3.3 与高效液相色谱法的比较

林清荷等[9]建立了用高效液相色谱法同时测定丙酸、山梨酸、苯甲酸的方法，将之与本法比较：1)高效液相色谱法的流动相需要磷酸盐缓冲液，需要调节pH至2.5，过程繁琐、费时费力。而本法只需用高纯氮气作载气；2)高效液相色谱法提取样品时需加入水、磷酸溶液，再加氢氧化钠溶液调节pH，远不如本法一步提取简便；3)高效液相色谱法需要较昂贵的二极管阵列检测器(非普通的紫外检测器)，而本法中采用的FID检测器，普通的气相色谱仪一般都有配备。

本方法首次建立了同时测定中药口服制剂中3种防腐剂的含量测定方法，方法学考察表明，该方法操作简单，准确可行。《中华人民共和国药典》2015版第四部规定了山梨酸、苯甲酸的限量为0.3%[10]，而对丙酸尚未作出明确规定；参照《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》GB 2760-2014[11]，在食品中丙酸最大限量一般为0.25%。可见，本方法完全可以满足实际检测的需要。

[1] 毕殿洲.药剂学：第四版[M].北京：人民卫生出版社，1999.

[2] 常兆生，于静波.恰当使用防腐剂 确保口服液质量[J].中成药，1990，13(2)：40-41.

[3] 钱木水，叶兴法，倪赤杭.液体制剂中防腐剂选用的体会[J].海峡药学，2009，21(3)：32-34.

[4] 丁茂柏.防腐剂：过量使用有危害[J].安全与健康，2011，26(17)：54.

[5] 李玉琴，崔英杰，贾宝秀，等.场强放大样品进样-毛细管电泳技术对中药制剂中苯甲酸与山梨酸的测定[J].分析测试学报，2010，29(8)：832-836.

[6] 李玉琴，贾宝秀，崔英杰，等.液体中药制剂中苯甲酸和山梨酸含量的高效毛细管电泳法测定[J].时珍国医国药，2010，21(10)：2532-2533.

[7] 韩训萍.液体制剂中山梨酸和苯甲酸的含量测定[J].中成药，1988，11(7)：11-12.

[8] 黎清金，吴佳，林向阳，等.气相色谱内标法测定食品中的防腐剂苯甲酸和山梨酸[J].农产品加工学刊，2009，(6)：102-104.

[9] 林清荷.高效液相色谱法同时测定糕点中丙酸钙(钠)、双乙酸钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸[J].福建轻纺，2012，25(12)：45-47.

[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[11] 国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准:GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.

SimultaneousDeterminationofPropionicAcid，SorbicAcidandBenzoicAcidinOralLiquidPreparationofTraditionalChineseMedicinebyCapillaryGasChromatography

ZENGBo，CHENRuiyan，LIYan，CHENMingjuan

(ZhaotongInstituteforFoodandDrugControl，Zhaotong，Yunnan657000，China)

Objective：To develop a method for the simultaneous determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid formulations.Methods：The three compounds were determined by gas chromatography with flame ionization detector and DB-wax capillary column(30 m×0.25 mm×0.25 μm).Results：Within the range from 25 μg·mL-1to 400 μg·mL-1(r≥0.999)，a good relationship was presented between the injected amounts and peak areas for propionic acid，sorbic acid and benzoic acid.The recoveries ranged from 98.0% to 102.8%，with RSD of less than or equal to 2.0%.Conclusion：The method is suitable for the determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid preparation of traditional Chinese medicine.

Capillary column gas chromatograph；oral liquid preparation of traditional Chinese medicine；propionic acid；sorbic acid；benzoic acid

2016-02-15)

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曾波，主管药师，研究方向：食品药品检验检测；Tel：(0870)3156097，E-mail：279466525@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.3.027