提高肉苁蓉中苯乙醇苷类成分含量的加工方法研究△

梁淑燕，卢丹逸，耿宗成，谢大栋，祁正梅，马志国*

(1.暨南大学 药学院，广东 广州 510632；2.新疆沃霖生态科技有限公司，新疆 奇台 831800；3.内蒙古巴丹吉林沙产业有限责任公司，内蒙古 阿拉善右旗 737300)

提高肉苁蓉中苯乙醇苷类成分含量的加工方法研究△

梁淑燕1，卢丹逸1，耿宗成2，3，谢大栋2，3，祁正梅2，3，马志国1*

(1.暨南大学 药学院，广东 广州 510632；2.新疆沃霖生态科技有限公司，新疆 奇台 831800；3.内蒙古巴丹吉林沙产业有限责任公司，内蒙古 阿拉善右旗 737300)

目的：考察肉苁蓉采挖后放置过程中苯乙醇苷成分的含量变化情况，优选可提高成分含量的加工方法；方法：采用高效液相色谱(HPLC)法，以松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷4个成分为考察指标，对鲜肉苁蓉采挖后的放置时间、加热处理方法及干燥方法进行考察和优选；结果：肉苁蓉采挖后，指标成分在放置过程中含量均呈现先增加后减少的变化，4个成分总量在存放至第4天时达到最大，但从第6天开始出现明显下降，故加热处理前的最佳存放时间为4 d。水蒸气蒸10 min为最佳加热处理方法，冷冻干燥为最佳干燥方法；结论：本实验优选的加工方法可明显提高肉苁蓉中苯乙醇苷类成分含量，有利于提高肉苁蓉饮片的质量。

肉苁蓉；苯乙醇苷；产地加工；含量测定

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight的干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能；主治肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘[1]。肉苁蓉主要含有苯乙醇苷、环烯醚萜及其苷、木脂素、多糖等成分[2]，其中补肾阳作用的有效成分为松果菊苷和毛蕊花糖苷等苯乙醇苷类成分[3]，此类成分还具有神经细胞保护[4]、抗氧化[5]等较为广泛的药理活性。《中华人民共和国药典》2015年版一部肉苁蓉项下规定，其在春季苗刚出土时或者秋季冻土前进行采挖，去除茎尖，切段，晒干[1]。由于肉苁蓉体积大、含水量高，晾晒干燥时间长。有文献报道，肉苁蓉所含的苯乙醇苷类成分易于被体内的酶水解，而降低其含量[6]。因此，肉苁蓉的产地加工研究报道中[7-8]提出，采挖后尽快进行加热处理，以破坏水解酶，然后干燥，从而提高苯乙醇苷类成分含量，但肉苁蓉采挖后在放置过程中其苯乙醇苷类成分的含量变化情况未见报道。因此，本文以松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷4个主要的苯乙醇苷类成分为考察指标，考察肉苁蓉采挖后放置不同时间的含量变化情况，并对不同的加工处理方法进行对比，优选可提高苯乙醇苷类成分含量的肉苁蓉产地加工工艺。

1 仪器与试药

Thermo Ultimate 3000液相色谱仪、DAD检测器、四元低压梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱(美国赛默飞公司)；XDB-C18色谱柱(十八烷基硅烷键合硅胶，250 mm×4.6 mm，5 μm，美国安捷伦公司)；KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GZX-9240 MBE数显鼓风干燥箱(中国上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；万分之一电子天平(北京塞多利斯仪器系统有限公司)；A11BS25磨粉机(德国IKA工业设备公司)；HC-280T2粉碎机(永康市绿可食品机械有限公司)。

色谱分析时的流动相使用色谱纯甲醇，实验用水为纯净水(华润怡宝食品饮料有限公司)；供试品溶液制备时使用分析纯甲醇；其他试剂均为分析纯。

对照品松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷和2′-乙酰毛蕊花糖苷为实验室自制(经1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定了化学结构)，HPLC检出纯度均大于98%。

实验用肉苁蓉药材于2014年4月采集于内蒙古巴丹吉林沙产业有限责任公司肉苁蓉栽培基地(位于内蒙古阿拉善盟)，经暨南大学药学院马志国副教授鉴定为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的新鲜带鳞叶的肉质茎。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

2.1.1 混合对照品溶液的制备 取松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷和2′-乙酰毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇水制成每1 mL含松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、2′-乙酰毛蕊花糖苷分别为0.314、0.216、0.234、0.206 mg的混合溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取干燥肉苁蓉粉末(65目)1 g，精密称定，加70%甲醇水溶液50 mL，称重，浸泡30 min后，超声(250 W，40 kHz)提取30 min，放冷后加70%甲醇水补足减失的量，滤过，取续滤液以0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.3 色谱条件 采用Agilent XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温30 ℃；流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱(0 min，30%A；30 min，40%A；35 min，30%A；40 min，30%A)；流速1.0 mL·min-1；检测波长330 nm。在上述条件下，肉苁蓉中4个成分的色谱图见图1[9]。

2.1.4 样品的含量测定 分别称取各肉苁蓉粉末1 g，按2.1.2项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取不同浓度的混合对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，外标法计算含量。

2.2 肉苁蓉加工工艺优选

2.2.1 放置不同时间指标成分的考察 取采挖的大小相当的新鲜肉苁蓉7 kg，立即洗净，每根肉苁蓉分别进行纵切处理，然后平均分为7份，于采挖当天取样1份，剩余6份分别在室温下放置6 d，每天取样1份。所有样品取样后先-18 ℃冷冻，然后进行冷冻干燥，干燥后粉碎过65目筛，按2.1项下方法测定成分含量，结果见表1。

由结果可知，各成分在放置过程中含量均呈现先增加后降低的变化，其中松果菊苷、肉苁蓉苷A含量变化程度较弱；而毛蕊花糖苷与2′-乙酰毛蕊花糖苷变化明显，与刚采挖当天对比，在放置到第4天时含量分别增加了4.2倍和1.6倍，到第6天开始出现明显减少，肉苁蓉4种指标成分总量在存放至第4天时达到最大，为采挖当天的2.3倍，因此加工处理前肉苁蓉的最佳存放时间为4 d。

2.2.2 加热处理方法的优选 取大小相当的鲜肉苁蓉5 kg，洗净，分别切5 mm厚片，混匀，平均分为3份，分别采用蒸10 min、沸水煮1 min和800 W微波加热2 min的方法加热处理后，70 ℃烘干，粉碎过65目筛，按2.1项下方法分别测定3份样品中的指标成分含量，结果见表2。

由以上结果可知，蒸10 min的加热处理方法明显优于煮法和微波加热法，确定蒸10 min为最佳方法。

2.2.3 干燥方法的优选 取大小相当的鲜肉苁蓉6 kg，洗净，分别切5 mm厚片，混匀，蒸10 min加热处理后，平均分为4份，其中1份冷冻干燥，另外3份分别采用晒干、60 ℃烘干、80 ℃烘干干燥后，粉碎过65目筛，按2.1项下方法分别测定4份样品中的指标成分含量，结果见表3。

注：A.对照品；B.样品；1.松果菊苷；2.肉苁蓉苷A；3.毛蕊花糖苷；4.2′-乙酰毛蕊花糖苷。图1 4种苯乙醇苷对照品和样品HPLC图

表1 放置不同时间指标成分含量测定结果表(n=3) mg·g-1

注：与0天比较*P<0.05；**P<0.01。

表2 不同加热处理方法指标成分含量测定结果表(n=3) mg·g-1

注：与微波法比较*P<0.05。

表3 不同干燥方法指标成分含量测定结果表(n=3) mg·g-1

注：与晒干法比较*P<0.05，**P<0.01。

从上表可知，晒干与烘干均会造成有效成分的明显减少，与冷冻干燥法比，晒干法成分损失最多，达到60%，而60 ℃与80 ℃烘干也明显低于冷冻干燥法。因此，冷冻干燥法为最佳干燥方法。

3 讨论

综合分析本实验结果，肉苁蓉产地加工的最佳工艺为鲜肉苁蓉洗净后，纵切为若干份，室温放置4 d，然后沸水蒸10 min加热处理后，切5 mm厚片，冷冻干燥。现有关于肉苁蓉产地加工的文献报道均为通过不同的工艺技术尽量避免药材中本身含有的有效成分的损失，从而提高饮片质量，而无增加有效成分含量的效果，本文优选的工艺中明确了加热处理前应放置一定时间，这一操作可明显提高肉苁蓉中苯乙醇苷类成分的含量，对指导肉苁蓉的产地加工和提高肉苁蓉药材的质量具有重要意义。

本实验证实，肉苁蓉中的4个苯乙醇苷类成分在药材采挖后不会立即降低，而呈含量上升的趋势，至第4天成分总量达到最高值，为采挖当天的2.3倍，之后可能在其内部水解酶的作用下才开始逐渐降低。推测产生此现象的原因为新鲜肉苁蓉采挖后，其组织细胞并未立即死亡，仍会利用其内部贮存的水分和营养来进行生命活动，但生存环境的变化使其处于应激状态，并会发生一系列复杂的生化反应，导致其化学成分发生转化，使得肉苁蓉在采挖后的最初几天内苯乙醇苷类成分含量呈现增加趋势。因此，给肉苁蓉药材一定的物理刺激，并提供一定的放置环境，是可提高肉苁蓉有效成分含量的关键，而不必尽快进行加热处理。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 雷厉，宋志宏，屠鹏飞.肉苁蓉属植物的化学成分研究进展[J].中草药，2003，34(5)：473-476.

[3] 宋志宏，雷丽，屠鹏飞.肉苁蓉属植物的药理活性研究进展[J].中草药，2003，34 (9)：附16-18.

[4] Deng M，Zhao J Y，Tu P F.Echinacoside rescues the SHSY5Y neuronal cells from TNFα-induced apoptosis[J].Euro J Pharmacol，2004，505(1/3)：11-18.

[5] Xiong Q B，Kadota S，Tani T.Antioxidative effects of phenylethanoids from cistanche deserticola[J].Biol Pharm Bull，1996，19(12)：1580-1585.

[6] 屠鹏飞，王玢，张正高，等.肉苁蓉类生药中苯乙醇甙类成分的RP-HPLC分析[J].药学学报，1997，32(4)：294.

[7] 杨建华，胡君萍，热娜·卡斯木，等.不同加工方法对肉苁蓉饮片苯乙醇苷类成分的影响[J].中药材，2010，33(5)：691-693.

[8] 蔡鸿，鲍忠，姜勇，等.鲜管花肉苁蓉加工工艺[J].中国中医药杂志，2007，32(13)：1289-1291.

[9] 钱浩，喻芳君，耿宗成，等.不同季节采收的肉苁蓉中4种苯乙醇苷的含量比较研究[J].药物分析杂志，2016，36(11)：1974-1979.

MethodforIncreasingContentsofPhenylethanoidGlycosidesinCistanchedeserticola

LIANGShuyan1，LUDanyi1，GENGZongcheng2，3，XIEDadong2，3，QIZhengmei2，3，MAZhiguo1*

(1.CollegeofPharmacy，JinanUniversity，GuangdongGuangzhou510632，China；2.XinjiangWolinEcologicalTechnologyCo.Ltd.，XinjiangQitai831800，China；3.InnerMongoliaBadainJaranDesertIndustryCo.，Ltd.，NeimengguAlashanYouqi737300，China)

Objective：To investigate the changes of four phenylethanoid glycosides inCistanchedeserticolain the process of storage，and to optimize the processing method for increasing the contents of phenylethanoid glycosides.Methods：The contents of echinacoside，cistanoside A，acteoside and 2′-acetylacteoside were used as indexes to optimize the storage time，heat treatment and drying method.Results：After the collection ofC.deserticola，the contents of four phenylethanoid glycosides increased firstly and then decreased，the total amount reached the maximum in the fourth day，but decreased significantly from the sixth day.So the best storage time before heat treatment was 4 days.Steaming 10 minutes was the best method to heat treatment.Freeze drying was the best drying method.Conclusion：The optimum process method can significantly improve the contents of phenylethanoid glycosides inC.deserticola.It is beneficial to improve the quality ofC.deserticolapieces.

Cistanchedeserticola；phenylethanoid glycosides；processing in the planting area；content determination

国家自然科学基金项目(No.30902001)；新疆自治区重点研发计划项目(2016B03039-1)

] 马志国，副教授，研究方向：中药炮制与饮片质量研究；Tel：(020)85223784；E-mail：mzg79@hotmail.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.7.025

2016-10-30)

*[