青海贵德地区猪圆环病毒2 型感染调查

刘秀清，董永森，张春霞，解秀梅，傅义娟

（1.青海畜牧兽医职业技术学院，青海 湟源 812100；2.青海省动物疫病预防控制中心，青海 西宁 810001）

青海贵德地区猪圆环病毒2 型感染调查

刘秀清1，董永森1，张春霞1，解秀梅1，傅义娟2

（1.青海畜牧兽医职业技术学院，青海 湟源 812100；2.青海省动物疫病预防控制中心，青海 西宁 810001）

为了解青海贵德地区猪群中猪圆环病毒2型（PCV2）的感染状况，本研究应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对采自该地区2个猪场的73份血清样品进行了PCV2抗体检测，采用荧光PCR技术对45份猪病料样品进行了PCV2病毒核酸检测。结果显示：PCV2抗体检测的平均阳性率为95.89%，猪病料PCV2病毒核酸检测的阳性率为100%。

猪圆环病毒2型；流行病学；ELISA；PCR

猪圆环病是由圆环病毒引起的猪的一种传染病。猪圆环病毒（PCV）是圆环病毒属的成员之一，可以分为2种血清型，即PCV1和PCV2，其中PCV2对猪的危害更大[1]。PCV2主要侵害机体的免疫系统，导致感染猪免疫抑制，对其他病原的抵抗力下降，容易引起其他病毒和细菌的继发感染，给养猪业带来巨大的经济损失[2]。为了有效控制该病在猪场的感染，就要定期对该病进行流行病学调查，只有掌握该病在猪场和一个地区的发病状况，才能采取科学的防控措施。本研究采用间接ELISA方法对采自青海省贵德地区两个猪场的73份血清样品进行了PCV2抗体检测，用荧光PCR技术对采集的45份猪病料样品进行了PCV2病毒核酸检测。旨在了解贵德地区PCV2的流行情况，为该地区有效防控PCV2感染，促进养猪业健康发展提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源与处理 2015年4月，从青海省贵德县两个猪场（A猪场和B猪场）采集了73份血液样品和45份猪病料样品（肺和淋巴结），所有的检测样品均于-20℃保存备用。

1.2 检测试剂 猪圆环病毒2型抗体酶联免疫检测试剂盒（生产批号：PCV 20150708E），猪圆环病毒2型实时荧光PCR检测试剂盒（批号：PCV2 20150701P），生产厂家为北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1.3 主要仪器设备 ABI7500荧光定量PCR仪，A-64R高速冷冻离心机，AC2-6S1生物安全柜，BIORAD美国伯乐iMark酶标仪等。

1.4 试验方法

1.4.1 猪圆环病毒2型ELISA抗体检测 按试剂盒说明书操作方法进行，具体结果判定如下：

（1）试验结果同时符合下列条件方为有效：两孔阴性对照OD450平均值应≤0.15；每孔阳性对照OD450值均≥0.60。临界值的计算：临界值=阳性对照孔OD450均值×0.25。

（2）结果判定：被检样品OD450值＜临界值,为PCV2抗体阴性；样品OD450值≥临界值，为初试PCV2抗体阳性。初试阳性的样品应再进行双孔复试，若任意一孔或两孔均为阳性，则视为PCV2抗体阳性；若两孔均为阴性，则视为PCV2抗体阴性。

1.4.2 猪圆环病毒2型实时荧光PCR检测 设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为N,则反应体系配制如表1所示。

表1 荧光PCR检测反应体系

将以上反应体系充分混匀后，分装到每个反应管中各18μL。分别取2μL模板DNA，加入相应反应管中，混匀，并做好标记。在荧光PCR扩增仪上进行反应：95℃ 2min；95℃ 5s，60℃ 35s，共 40次循环，每次循环的第二步（60℃ 35s）收集荧光信号（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。

结果判定：阳性对照Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值且无特定扩增曲线，试验结果成立。被检样品Ct值≤30并出现特定扩增曲线，视为PCV2核酸阳性；被检样品Ct值在30～37之间并出现特定扩增曲线，需重新取样提取DNA扩增后判定，如仍是可疑，则判为阳性；被检样品Ct值≥37时，超过本方法检测灵敏度范围，判为阴性；对于某些未呈现S型曲线，但本底较高的样品，应判为阴性。

2 结果与分析

2.1 猪血清PCV2抗体检测结果 在被检的73份血清中，采用ELISA方法共检出PCV2抗体阳性血清70份，平均阳性率为95.89%。其中A猪场被检血清的PCV2抗体阳性率为100%，B猪场为95.0%。

2.2 实时荧光定量PCR检测结果 45份猪组织病料中均检测出PCV2病毒核酸呈阳性，PCV2猪群阳性率高达100%，说明本地区猪群有PCV2感染。

3 讨论

3.1 从荧光定量PCR检测结果可以看出，PCV2在贵德地区的猪场和猪群中广泛存在，与文献[3-4]报道的“PCV2感染广泛存在于国内猪群中”一致。高于李菊梅等[5]报道的青海省部分地区猪圆环病毒2型感染阳性率为47.58%（108/227）。与赖笑娴等[6]采用荧光定量PCR方法对广东省部分地区PCV2疑似病例进行检测的结果（阳性率为97.9%）较为接近。这可能与检测方法有关，因为荧光定量PCR的灵敏度比普通PCR的灵敏度要高很多；也可能与近几年猪圆环病毒病发病率呈现暴发式增长有关。

3.2 猪圆环病毒2型危害较大，往往伴随其他一系列病毒或细菌感染。例如，可以引起猪圆环病与伪狂犬病的混合感染、猪圆环病与细小病毒病的混合感染等。PCV2感染及其引发的疾病已经成为全球养猪产业的一大问题，这是继猪繁殖与呼吸综合征之后出现的又一重大生猪疫病。对猪圆环病的控制不仅要做好猪场的卫生消毒工作、降低或避免应激因素、提高饲养管理水平、改善断奶仔猪营养等，还要采取药物预防方案加以控制，比如对副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌等继发感染的控制，最大限度地降低猪群死亡率，减少经济损失。

[1]陈薄言，王川庆.兽医传染病学[M].5版.北京：中国农业出版社，2015：231-233.

[2]李超，魏建忠，凌英济，等.安徽省猪圆环病毒2型感染的流行病学调查[J].中国微生态学杂志，2010，22（4）：330-336.

[3]陈洁，金尔光，郭一，等.猪圆环病毒感染相关疾病及防控措施[J].现代农业科技，2010，21（2）：363-364.

[4]赵朴，赵坤，李任峰，等.一株猪圆环病毒2型的分离与分子鉴定[J].河南农业科学，2011，40（7）：155-157.

[5]李菊梅，王明辉，程思乐，等.青海省部分地区猪圆环病毒2型感染的病原学调查[J].畜牧与兽医，2015，47（10）：155-156.

[6]赖笑娴，洪伟彬，李永福，等.广东省部分地区猪圆环病毒2型流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医，2014（11下）：80-81.

Infection Survey of Porcine Circovirus Type 2 in Guide Region

Liu Xiuqing1，Dong Yongsen1，Fu Yijuan2，et al.
（1.Qinghai Vocational and Technical College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Qinghai Huangyuan 812100；2.Animal Disease Prevention and Control Center of Qinghai Province，Qinghai Xining 810001，China）

To understand the infection situation of porcine circovirus type 2（PCV 2）in the area of Guide，PCV 2 antibody had been detected in 73 serum samples from 2 pig farms by ELISA，and viral nucleic acid of PCV 2 had been detected in 45 tissue samples by fluorescence PCR.The results showed that the average positive rate of PCV 2 antibody was 95.89%，the positive rate of pathogen tissue samples was 100%.

Porcine circovirus type 2；Epidemiology；ELISA；PCR

S852.659.2

B

1001-8964（2017）09-0032-03

2017-05-24

刘秀清（1967-）,女，河南人，教授，硕士，主要从事预防兽医学的教学与研究。