超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量

孙磊

哈药集团世一堂饮片有限责任公司 150000

超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量

孙磊

哈药集团世一堂饮片有限责任公司 150000

目的：通过超声提取的方式，对药食同源植物中6种人参皂苷的含量进行检测。方法：提取剂为50%浓度的甲醇溶液，料液配比为1:80（g:ml）,设置超声时间为30分钟，本次实验的流动相为0.05%的磷酸水以及乙腈，通过梯度洗脱的方式实现实验操作，检测的波长为203nm。结果：通过检测实验可以发现，当质量浓度保持在5～1000μg/mL的范围之中时，其线性较好，在对6种不同的人参皂苷含量进行检测时，发现最低检出限一般在22.5到51.0mg范围中，平均回收率最低为98.1%到105.5%，本实验中的三种样品的三醇类皂苷含量低于二醇类皂苷含量，三七中的Rgl含量最高，西洋参的Re含量最高。结论：实验结果表明，这种超高效液的相色谱法检测结果准确，灵敏度较好，适用于数量较多的产品检测。

超高效液相色谱；超声提取；皂苷含量

三七、西洋参以及人参都属于“药食同源”的人参属植物，这类植物中的功能成分一般是人参皂苷，属于一种特殊的化合物，主要是糖与苷元相连制成的化合物提取人参皂苷的方法有很多种，检测的方法也有很多种，为了提升人参皂苷的分离性能，本文对超高效液相色谱的检测方法进行研究，不仅检测结果比其他的检测方法更准确，检测速度也相对比较快，现有检测过程如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

实验材料：无水甲醇、无水乙醇和磷酸、乙腈、Milli Q超纯水、人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rd、人参、西洋参及三七。

仪器：Aglient1290超高效液相色谱仪、Aglient 1100高效液相色谱仪、Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μ m）、C18 色谱柱 （Phenomenex 4.6 mm×250 mm，5 μm）、BSA2245-CW 电子天平、KQ-600DA 型超声波清洗器

1.2 方法

样品粉碎，过 80 目筛。 准确称取（0.50±0.01）g样品，加入适量提取液，在一定条件下超声提取。将提取液定容，过 0.22 μm 有机滤膜，待液谱分析。UPLC 色谱条件：流动相为乙腈 （A）和 0.05%磷酸水（B），梯度洗脱程序：0～5 min，18%A；5～6min，18%～20%A；6～7 min，20%A；7～11 min，20%～30%A；11～15 min，30%A；15～18 min，30%～35%A。柱温 30 ℃，流速 0.35 m L/min，检测波长 203 nm，进样量 2 μL。HPLC 色谱条件 ：流动相为乙腈 （A）和 0.05%磷酸水（B），梯度洗脱程序：0～5 min，20%A；5～25min，20% ～22% A；25 ～30 min，22% ～25% A；30 ～55min，25% ～50% A；55 ～57 min，50% A；57 ～60 min，50%～80%A。 柱温 30 ℃，流速 1.0 m L/min，检测波长 203 nm，进样体积20μL。采用 SPSS17.0 One-way（ANOWA）进行单因素方差分析（P＜0.05），比较不同提取条件对人参皂苷含量的影响。

2 结果

2.1 超声提取单因素试验

研究提取溶剂、料液比、超声时间对提取物皂苷含量的影响，确定相关因素及其范围。

2.1.1 提取溶

利用甲醇、水、乙醇、50%甲醇 、60%甲醇、70%甲醇提取样品中人参皂苷， 种纯溶剂对皂苷提取效果有一定的差异。 用水提取到的总皂苷含量高于甲醇、乙醇，且水溶剂和甲醇溶剂差异不显著。 以纯水溶剂提取到的原人参三醇类皂苷含量高于二醇类，用甲醇溶剂相反。 由于三醇类皂苷在结构上较二醇类皂苷多1 个羟基， 极性略强与二醇类皂苷， 因此用纯水溶剂提取到的三醇类皂苷含量略高。 最终采用甲醇水溶液提取样品中的皂苷。用甲醇水溶液提取到的总皂苷含量基本相近，均显著优于纯溶剂提取的效果。4种比例的甲醇水溶液对原人参三醇皂苷的提取效果均优于纯水溶液， 对原人参二醇类皂苷的提取效果与纯甲醇溶剂基本相当。

2.1.2 超声时间

固定超声波清洗仪 功率 600W，频率 40k Hz 条件，比较不同超声时间对人参皂苷的提取效果。超声时间对原人参二醇类皂苷影响不大，对原人参三醇类有影响。从总皂苷含量看，超声10min 和 20 min 的提取率偏低，超声提取 30，40，50，60 min 的提取效果较好。最终选择提取时间30 min。

2.2 流动相对分离效果的影响

人参皂苷的检测波长为 203 nm。 选择乙腈为有机相，扣除溶剂的背景值。 水相中磷酸的含量对 6 种人参皂苷的分离影响较大 ， 尤其是对 Rg1 和Re 分离度的影响。 纯水相中不能很好地将 Rg1 和Re 分离。 随着磷酸含量的增加 ，这两组分分离度增大，然而分析时间延长，组分的响应值降低。最终选择含磷酸 0.05%的水溶液为 A 相。

2.3 UPLC 与 HPLC 分离效果比较

采用 UPLC，18min 即 可分 离 6 种 皂苷 ， 而 采用HPLC 需 要 50min 才能进行基线分离，节约近 2 倍的时间。UPLC的流速约为 HPLC 的 1/3，大大减少了流动相的使用。在分析人参皂苷时，使用 UPLC，其分离度与使用 HPLC 的相似，但进样量少，分析速度快，节省溶剂。

2.4 线性范围、准确度和精密度

将6种人参皂苷标准品配成质量浓度为 5，10，20，50，100，200，500，1 000 μg/m L 的混合标准溶液，以浓度（x）为横坐标、色谱峰面积（y）为纵坐标绘制标准曲线，进行回归分析。 以3倍信噪比计算方法的最低检出限。6种人参皂苷在质量浓 度5～1 000 μg/m L 范围内线性良好，相关系数均大于0.999，最低检出限在 22.5～51.0 mg/kg 之间。

2.5 加标回收率试验

选取有代表性的人参样品向其中加入 500，1 000，2 000 mg/kg 3 个水平的混标，做加标回收试验。平均回收率为 98.1%～105.5%，相对标准偏差为1.3%～3.3%。该方法准确，灵敏度高，重现性好，省时快捷，适合日常大批量样品的检测。

2.6 样品测定

对市售人参、西洋参、三七样品中 6 种人参皂苷含量进行测定人参中 6 种皂苷总含量比西洋参和三七低。 人参、西洋参和三七中人参皂苷含量差异很大。 对于原人参三醇类皂苷（Rg1、Re和 Rf），三七样品高于西洋参、人参，平均含量依次为 19 124.0，10 392.2，5 316.1 mg/kg， 并且西洋参和三七中不含 Rf。西洋参中 Re 含量最高，三七中Rg1 的含量最高。 对于原人参二醇类皂苷（Rb1、Rc和 Rd）， 西洋参样品高于三七高于人参，平均含量依次为 28 368.1，24 785.3 和 9 760.1 mg/kg。 三类样品中原人参二醇类皂苷均高于三醇类皂苷。

3 讨论

苷元的种类不同，其合成的人参皂苷也存在差异，人参皂苷主要有三种不同的类型，分别是：齐墩果酸皂苷、二醇型皂苷以及三醇型皂苷。除了第一种人参皂苷之外的两种人参皂苷都可以作为活性成分，能够有效地调节人体的神经中枢系统、内分泌系统以及造血系统，不仅能起到抗疲劳的作用，还能发挥抗癌的作用。UPLC是一种比较常见的检测中药材的方式，本文对 HPLC与UPLC进行了比较，比较对象主要是分离性能，通过比较试验发现，在同样的实验条件之下，UPLC方法的实用性更强，不仅能够快速获取检测数据，其检测数据的准确性也比较高，再进行精密度实验、回收实验后，对人身、三七以及西洋参三种药品进行测定，确定在对数量比较多的批量药品检测时，可以使用这种方法，技术人员还要对这种方法进行改进，使其能够更好地检测人身皂苷。

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R473.5

A

1672-5018（2017）05-213-01