结直肠癌中CXCL9的表达及其临床意义

方立武，贺海珍，朱从伦，沈 慧，彭鲁璐

结直肠癌中CXCL9的表达及其临床意义

方立武，贺海珍，朱从伦，沈 慧，彭鲁璐

目的检测趋化因子CXCL9在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织及癌旁组织中的表达，探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化EnVision法检测95例CRC及55例癌旁组织中CXCL9的表达。结果CRC中CXCL9高表达51例(53.7%，51/95)，癌旁组织中高表达11例(20.0%，11/55)。CXCL9在CRC中高表达发生率显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCL9高表达和肿瘤分化程度高、未达浆膜浸润、淋巴结无转移及TNM低分期具有相关性(P<0.05)。CXCL9高表达CRC患者的5年无瘤生存期及总生存期明显高于低表达组(P<0.05)。结论CXCL9可能参与CRC的发生、发展，其高表达提示CRC患者预后较好。

结直肠肿瘤；趋化因子；CXCL9；预后；免疫组织化学

结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是全球常见的恶性肿瘤，其侵袭及远处转移是CRC患者预后不良的主要原因[1]。CXCL9与肿瘤发生、发展的关系密切，其在CRC中的作用近年来逐渐受到关注[2]。本文应用免疫组化EnVision法检测CXCL9在CRC组织中的表达，分析其与临床病理特征及预后的关系，为CRC的治疗寻找潜在靶点。

1 材料与方法

1.1临床资料收集2009年1月～2011年12月浙江省象山第一人民医院病理科95例CRC组织石蜡标本及55例对应的癌旁组织标本。所有患者术前均未行放、化疗或免疫治疗。患者年龄为26～83岁，中位年龄为58岁，女性42例，男性53例；肿瘤直径≤5 cm者45例，>5 cm者50例；肿瘤位于结肠43例，位于直肠52例；组织病理学分级：高分化者34例，中分化者38例，低分化者23例；血管有浸润者30例，无浸润者65例；浸润达浆膜者55例，未达浆膜者40例；淋巴结有转移者49例，无转移者46例；按美国癌症联合委员会(AJCC)第7版CRC TNM分期标准进行分期：Ⅰ+Ⅱ期59例，Ⅲ+Ⅳ期36例；癌胚抗原浓度≤5 μg/L者56例，>5 μg/L者16例，不明确者23例；随访从手术之日开始，末次随访日期为2015年12月25日。本组患者随访时间均超过5年。

1.2方法所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，免疫组化采用EnVision两步法染色，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。所用抗体购自上海长岛公司。

1.3判断标准CXCL9以胞膜或胞质呈棕黄色为阳性。由两名资深病理医师根据染色强度和染色细胞百分比分别进行评定和分析，结果判断均采用统一评分标准和双盲法。按阳性细胞数分为：无阳性细胞为0分、≤10%为1分、11%～50%为2分、51%～80%为3分、>80%为4分。按染色强度分为：无阳性着色为0分、弱阳性为1分、中等强度为2分、强阳性为3分。将阳性细胞数乘以平均染色强度得出评分范围：0～12分。评分≤4分为无或低表达，>4分为高表达。

1.4统计学分析采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，CXCL9表达与CRC临床病理特征的关系采用χ2检验，对生存数据应用Kaplan-Meier分析并绘制生存曲线，运用Log-rank检验差异性。

2 结果

2.1CXCL9在CRC及癌旁组织中的表达CXCL9定位于肿瘤细胞的胞膜及胞质(图1、2)。95例癌组织中CXCL9高表达51例(53.7%，51/95)，癌旁组织中高表达11例(20.0%，11/55)。CXCL9在CRC和癌旁组织中的表达差异，有统计学意义(P<0.05)。

①②

图1CXCL9在肿瘤细胞中低表达，EnVision法图2CXCL9在肿瘤细胞中高表达，EnVision法

2.2CXCL9表达与CRC临床病理特征的关系CXCL9高表达和肿瘤较高的分化程度、未达浆膜浸润、淋巴结无转移及较低的TNM分期具有相关性(P<0.05)；与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、血管浸润及癌胚抗原浓度均无相关性(P>0.05，表1)。

表1 CXCL9表达与CRC临床病理特征的关系

2.3CXCL9表达与CRC患者预后的关系CRC肿瘤细胞CXCL9高表达组患者的5年无瘤生存率为70.6%(36/51)，中位生存时间65个月，低表达者43.2%(19/44)，中位生存时间58个月，两组相比差异有统计学意义(χ2=6.043，P<0.05)。此外，CXCL9高表达组5年总生存率为74.5%(38/51)，中位生存时间69个月，低表达者5年总生存率为52.3%(23/44)，中位生存时间60个月，CXCL9高表达的患者生存期明显高于低表达组(χ2=6.825，P<0.05，图3、4)。

3 讨论

趋化因子是一类包含4个保守半胱氨酸残基，具有化学趋化功能的多肽。根据其第1、2个半胱氨酸所含其它氨基酸的个数，可分为CXC、CC、C及C3XC 4个亚族。目前，有许多关于趋化因子及其受体在肿瘤形成及进展中作用分析。CXC趋化因子及其受体可以从几方面调节肿瘤的生物学行为，如调节血管生成，通过吸引白细胞激活肿瘤特异性免疫反应，刺激肿瘤细胞的增生及转移[3]。趋化因子CXCL9是趋化因子CXC亚族的一员，人CXCL9基因位于染色体4q21上，紧邻编码CXCL10的基因。在体内主要由干扰素γ(INF-γ)刺激巨噬细胞及单核细胞产生[4]。研究表明CXCL9可以在乳腺癌[5]、肾细胞癌[6]、CRC[7]及非小细胞肺癌[8]中表达。CXCR3是CXCL9的受体，其为7次跨膜的G蛋白偶联受体，其胞内区与G蛋白偶联。同时，CXCR3也是趋化因子CXCL10及CXCL11的受体[9]。

图3 CXCL9表达与CRC患者5年无瘤生存期的关系

图4 CXCL9表达与CRC患者5年总生存率的关系

本实验中CXCL9高表达率为53.7%，显著高于癌旁正常组织，表明CXCL9在CRC的发生过程中发挥作用。CXCL9高表达和肿瘤较高的分化程度、未达浆膜浸润、淋巴结无转移及较低的TNM分期具有显著相关性，提示CXCL9高表达不利于肿瘤的侵袭及转移。CXCL9高表达患者的5年无瘤生存期及总生存期均显著高于低表达患者。有研究报道CRC中CXCL9及CXCL10高表达提示患者预后较好，无瘤生存期较长，同时记忆性CD8+及CD4+T细胞数量也较多；与本组结果基本一致。CXCL9高表达提示患者预后较好，评估CXCL9表达有助于选择CRC患者免于术后的辅助治疗，该患者肿瘤进展的风险相对较低。CXCL9低表达提示患者预后较差，患者术后需密切监测。我们认为以下3种原因可以解释为何CXCL9高表达提示患者预后良好。CXCL9在恶性肿瘤中高表达，它的抗肿瘤活性主要通过促进免疫反应介导的，例如增强细胞毒性T淋巴细胞的反应，促进CD4+及CD8+T淋巴细胞浸润到肿瘤细胞区域杀伤肿瘤细胞[10]。CXCL9及CXCL10不但可以趋化吸引T淋巴细胞浸润到肿瘤细胞的区域，而且可以扩大T淋巴细胞引起的效应[11]。有研究表明CRC中CXCL9及CXCL10高表达的病例中CD8+记忆性T细胞、CD4+T细胞及巨噬细胞的数量也较多，提示患者预后较好，且和较长的无瘤生存期相关[12]。其次，CXCL9结合到其受体CXCR3具有抗血管生成的作用；其通过与血管内皮细胞相作用，并且招募T或NK细胞，它们可以破坏肿瘤的血管形成[13]。血管形成在肿瘤形成、进展及转移过程中发挥重要作用，研究表明CXCL9可以抑制肿瘤血管生成，从而引起瘤体消退。联合pORF-CXCL9及顺铂可以更好的抑制肿瘤血管生成，诱导凋亡及增强细胞毒性T细胞的活性，这些均具有抗肿瘤的活性[14]。例如CXCL9过表达通过降低肿瘤相关血管形成从而抑制肺非小细胞肺癌生长及转移[15]。最后，Liu等[16]报道CXCL9或CXCR3拮抗剂可以抑制恶性黑色素瘤及乳腺癌的转移。上述结果均表明CXCL9有望成为CRC的预后标记及治疗靶点。

综上所述，本实验结果提示CXCL9可能参与CRC的发生、发展，其高表达提示患者预后良好。检测CXCL9的表达可以更好的指导临床医师进行实际工作，并为CXCL9成为CRC治疗策略的潜在靶点提供依据。

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时间：2017-7-18 11:52 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1152.024.html

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方立武，男，副主任医师。Tel：(0574)65736568，E-mail：diandongfeng@163.com

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1001-7399(2017)07-0800-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.024

接受日期：2017-05-14