石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价

2017-09-14杨秀媚

中国实用医药 2017年24期

关键词：价值

杨秀媚

【摘要】目的探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测的价值。方法 63份经石蜡包埋的组织，随机分为实验组（32份）和对照组（31份）。实验组采用DNA快速提取法，对照组采用试剂盒DNA提取法。分别对两组提取出的DNA进行对比分析。结果实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上，实验组扩增产物则在400 bp以上。结论分子病理检测中应用石蜡包埋组织DNA快速提取法，可在保证质量的情况下，大大缩短检测时间，提高检测安全性，临床上值得应用。

【关键词】分子病理检测；石蜡包埋组织；DNA快速提取法；价值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.24.118

近年来，随着分子病理学的不断发展，人们对肿瘤疾病的认识与研究不再局限于患者的器官、细胞，而是延伸到了蛋白质、DNA等水平。分子病理学使病理诊断变得更加准确、客观，而且在肿瘤的治疗及预后等方面也有着重要价值，其中免疫检测、基因检测、流式细胞术等技术目前应用较为广范，全面推动着医疗技术的发展[1]。提取DNA是分子病理检测的重要内容，本研究通过对石蜡包埋组织进行DNA提取、分析，旨在评价石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测中的价值，现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料选取2016年3～12月经石蜡包埋的组织63份，将其随机分为实验组（32份）和对照组（31份）。所有标本均使用中性甲醛固定，其中淋巴结、肿瘤、宫颈组织各21份。

1. 2 方法

1. 2. 1 实验组采用DNA快速提取法，对每例标本制作4张蜡片，首先将蜡片置入离心管中并加入裂解液，采用金属浴方法将石蜡溶解，并将温度控制在95℃，持续时间在10 min左右，然后以14000 r/min对其进行离心操作，离心过程持续5 min，最后将蜡层下出现的清凉溶液置于-20℃环境下保存。

1. 2. 2 對照组采用试剂盒DNA提取法，与实验组相同方法制作4张蜡片，将其置入离心管中并加入二甲苯1 ml， 14000 r/min对其进行离心操作， 3 min后抛除上层清亮液体，重复操作1次；1 ml无水乙醇加入离心管中，混匀后重复上述离心操作，并再次进行乙醇去苯，完成后开盖蒸发乙醇；将Buffer ALT及蛋白酶K混入离心管，混匀后进行消化、孵育；使用离心柱9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW1， 9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW2， 9000 r/min对其进行离心， 2 min后将废液丢弃；加入ATE静置2 min，再离心处理；处理完毕后管内剩余液体置于-20℃环境下保存[2]。

1. 3 DNA产物评价

1. 3. 1 DNA浓度及纯度利用紫外分光光度计评价提取物DNA浓度及其纯度。

1. 3. 2 PCR可行性对提取出的DNA进行PCR扩增（实验组使用DNA原液，对照组DNA浓度65 ng/μl）；反应温度：预变性95℃，变性95℃，退火60℃；反应时间：预变性7 min，变性45 s，退火45 s；经循环35次后对其进行电泳处理，并经BIO-RAD系统对两组DNA质量进行分析。

2 结果

2. 1 提取物DNA浓度及纯度评价实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。

2. 2 PCR可行性对比分析对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bP以上，实验组中不同组织提取的DNA扩增产物大小不同，其中宫颈组织可达300 bp，其余组织则在400 bp以上。见图1。

3 讨论

随着科学技术的持续发展及医疗水平的不断进步，石蜡包埋组织因其具有便于运输储存、交叉污染少等优点，被广泛应用于临床病理工作中[3-6]。在进行分子病理检测时提取DNA的方法中，酚-氯仿法应用较早，但因其操作过程复杂，且对人体有损害等缺点，目前已逐渐被离心柱法所代替[3]。离心柱法对操作者要求相对较低，且得到的DNA质量较高，但检测过程中因为需要对组织进行消化，操作步骤较多，所以检测所需时间较长，且在操作过程中换管频繁，增加了标本污染的可能性[4]。如何能够在保证DNA提取质量的情况下缩短操作时间，成为了研究的热点问题之一。

石蜡包埋组织DNA快速提取法无需应用有毒试剂，如二甲苯、氯仿等，能够更好地保障检测人员的身体健康及生命安全[7-11]；采用离心管，不但较通常所应用的PCR管方便许多，而且可有效降低交叉污染的可能性，从而提高DNA提取质量；将加热温度设置为95℃，可有效避免过高的温度所造成的试管爆炸，大大提高操作安全性[12-14]。石蜡包埋组织在处理过程当中，会经过甲醛固定以及脱水等步骤，在进行分子病理检测之前已放置了一定的时间，所以DNA断裂情况较为常见。有研究结果表明， DNA快速提取法所得到的DNA完全可用于PCR扩增[5]。为进一步探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值，本实验对石蜡包埋组织进行了分组实验研究。

本实验研究结果显示，实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异。对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上，实验组扩增产物则在400 bp以上。endprint

综上所述，使用石蜡包埋组织DNA快速提取法所提取的DNA，虽然在小组织中DNA浓度及纯度相对较低，但完全可满足分子病理检测所需的条件，而且该方法拥有方便、快速、经济等优点，具有显著的优势，可在临床上推荐与应用。

参考文献

[1] 徐培，何小艳，李慧，等. 石蜡包埋组织DNA快速提取法在分子病理检测中的应用. 诊断病理学杂志， 2015， 22（12）：804-805.

[2] 蒋金芳，庞丽娟，李洪安，等. 石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化. 临床与实验病理学杂志， 2012， 28（8）：939-942.

[3] 黄玉梅，赵瑾，刘波，等. 探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法. 临床与实验病理学杂志， 2016， 32（5）：583-584.

[4] 郭丽，祁荣，臧旭，等. 甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中三种DNA提取方法的比较. 临床与实验病理学杂志， 2016， 32（12）：1412-1413.

[5] 时姗姗，王建东，马恒辉，等. 不同组织DNA提取的比较. 诊断病理学杂志， 2013， 20（8）：508.

[6] 朱丽华，李琳，章广玲，等. 石蜡包埋组织PCR检测中DNA提取方法的比较及改进. 临床与实验病理学杂志， 2006， 22（4）：495-496.

[7] 张惠丹，任辉，王晓楠，等. 一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法. 临床与实验病理学杂志， 2010， 26（5）：590-593.

[8] 鄢丽敏，孙保存，赵秀兰，等. 石蜡包埋组织DNA提取方法的比较及巢式PCR技术的应用. 生物医学工程学杂志， 2011（4）：795-799.

[9] 裴永彬，贺新奇. 石蜡包埋组织中DNA提取技术研究进展. 河北医科大学学报， 2010， 31（11）：1396-1399.