活血通络化痰方对急性脑梗死模型大鼠血液流变学指标、血浆胆红素及氧化低密度脂蛋白水平的影响*

刘 博王 婧

（1.陕西省咸阳市中心医院，陕西 咸阳 712000；2.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳712000）

·研究报告·

活血通络化痰方对急性脑梗死模型大鼠血液流变学指标、血浆胆红素及氧化低密度脂蛋白水平的影响*

刘 博1王 婧2

（1.陕西省咸阳市中心医院，陕西 咸阳 712000；2.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳712000）

目的 观察活血通络化痰方（HTH）对急性脑梗死模型大鼠血液流变学指标、血浆胆红素及氧化低密度脂蛋白水平的影响。方法 将30只健康SD大鼠随机分为对照组、模型组和实验组，各10只，采用自身栓子法制备急性脑梗死大鼠模型大鼠，对照组和模型组0.9%氯化钠注射液灌胃，实验组给予活血通络化痰方煎煮液灌胃，第5、10日观察各组大鼠的脑组织病理，比较血液流变学指标（血浆黏度、全血黏度高切、红细胞聚集指数）、血浆胆红素及氧化低密度脂蛋白水平。结果 与对照组比较，模型组大鼠脑组织神经元肿胀，梗死灶内细胞和血管坏死，结构模糊，间质水肿；与模型组比较，实验组大鼠少数神经细胞死亡，细胞质疏松及肿胀明显减轻，脑组织水肿有减轻。第5、10日，模型组大鼠血浆黏度、全血黏度高切、全血黏度低切明显高于对照组，而实验组大鼠血浆黏度、全血黏度高切、红细胞聚集指数明显低于模型组（P<0.05）。模型组大鼠血浆胆红素明显低于对照组，而实验组血浆胆红素明显高于模型组（P<0.05）。模型组大鼠氧化低密度脂蛋白水平明显高于对照组，而实验组大鼠氧化低密度脂蛋白水平明显低于模型组（P<0.05）。结论 活血通络化痰方可改善急性脑梗死模型大鼠损伤脑组织、降低血液流变学指标氧化低密度脂蛋白、升高血浆胆红素。

活血通络化痰方 急性脑梗死 血液流变学 血浆胆红素 氧化低密度脂蛋白

急性脑梗死是脑动脉发生病变所导致的疾病，脑细胞缺血缺氧，发病率高、致死率高，可由颅脑损伤引起，造成脑组织缺血缺氧发生坏死，导致系列神经症状，严重威胁人体健康［1-2］。急性脑梗死发病复杂，与血脂水平和动脉粥样硬化病变密切相关［3-4］。活血通络化痰方由川芎、生大黄、水蛭、赤芍、丹参、瓜蒌、姜半夏、桔梗、银杏叶组成，具有活血化瘀、通络化痰功效，为笔者所在医院治疗急性脑梗死的院内协定处方，具有较好的临床疗效，但其作用机制不清［5］。本研究通过建立急性脑梗死模型大鼠，比较大鼠血液流变学指标、血浆胆红素及氧化低密度脂蛋白水平的影响，探讨活血通络化痰方治疗急性脑梗死的作用机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 30只健康清洁级SD大鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供 ［SCXK（京）2011-0011］，雌雄各半，体质量（250±20）g。自然光线下，以标准饲料和无菌蒸馏水喂养。

1.2 试药与仪器 水合氯醛（国药集团化学试剂有限公），活血通络化痰方：川芎10 g，生大黄10 g，水蛭10 g，赤芍15 g，丹参15 g，瓜蒌10 g，姜半夏6 g，桔梗10 g，银杏叶10 g；药材均由本院中药房提供，并制成1 g/mL的煎煮液。氧化低密度脂蛋白试剂盒（上海生工技术有限公司）。NI500显微镜 （日本尼康公司），Biotek aQuant型酶标仪 （上海坤肯生物化工有限公司），RM2125切片机和TPIIZO全自动封闭式组织脱水机（德国徕卡公司），Y6-6LF生物组织包埋机（湖北亚光易用电子技术有限公司），13R离心机 （力康集团力新仪器（上海）有限公司）。

1.2 分组与造模 30只健康SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和实验组，各10只；模型组和实验组采用自身栓子法制备急性脑梗死大鼠模型大鼠［6］。腹腔内注射水合氯醛麻醉，固定于手术台，剪开颈部右侧旁正中浅筋膜，暴露右侧颈总动脉和迷走神经，顿性分离颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，近心端结扎近端颈外动脉，微动脉夹夹住颈内动脉，0.3 mm尼龙线结扎固定颈总动脉，阻断大脑中动脉起始端血流，松开颈内动脉，剪除多余尼龙线，并在颈内动脉根部固定，防止线栓移动，消毒缝合皮肤，放回笼中，自由喂养。

1.3 给药方法 造模后第2日，对照组和模型组予3 mL 0.9%氯化钠注射液灌胃，实验组给予3 mL活血通络化痰方煎煮液灌胃，分别于第5日和第10日处死10只大鼠进行观察。

1.4 标本采集与检测 分别于造模后第5日和第10日，各组处死10只大鼠，4℃迅速断头取脑，0.9%氯化钠注射液清洗后，固定48 h后，二甲苯脱脂，酒精脱水，石蜡包埋，切片，染色，观察各组大鼠的脑组织病理。眼球取血，3000 r/min离心15 min，分离血清后-80℃保存，OLYMPUSAU5400全自动生化分析仪检测血浆黏度、全血黏度高切、全血黏度低切等血液流变学指标，钒酸盐氧化法测定血浆总胆红素，酶联免疫吸附（ELISA）双抗体夹心法检测氧化低密度脂蛋白水平。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用t检验比较组内和组间差异，计数资料以n（%）表示，应用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组脑组织病理学观察 见图1。对照组大鼠脑组织细胞形态正常，分布均勾，未见神经元肿胀和炎性细胞浸润现象；模型组大鼠脑组织神经元肿胀，梗死灶内细胞和血管坏死，结构模糊，间质水肿；实验组大鼠少数神经细胞死亡，细胞质疏松及肿胀明显减轻，脑组织水肿有减轻。

图1 各组大鼠脑组织病理学切片（HE染色，400倍）

2.2 各组血液流变学指标比较 见表1。第5日和第10日，模型组大鼠血浆黏度、全血黏度高切、红细胞聚集指数明显高于对照组，而实验组大鼠血浆黏度、全血黏度高切、红细胞聚集指数明显低于模型组，且第10日低于第5日（P<0.05）。

表1 各组大鼠血液流变学指标比较（mPa·s，±s）

表1 各组大鼠血液流变学指标比较（mPa·s，±s）

与对照组同时期比较，*P＜0.05；与模型组同时期比较，#P＜0.05；与本组第5日比较，△P＜0.05。下同。

组别 时间 红细胞聚集指数对照组第5日 4.37±0.62（n＝10）第10日 4.45±0.61模型组第5日 8.75±0.76*3.22±0.57*9.64±1.62*实验组 第5日 2.15±0.47#7.71±1.25#6.97±0.71#（n＝10） 第10日 1.59±0.50#△6.03±1.14#△5.23±0.65#△血浆黏度 全血黏度高切1.37±0.41 5.12±1.03 1.39±0.42 5.18±0.99 3.11±0.54*9.47±1.57*（n＝10）第10日 9.11±0.81*

2.3 各组血浆胆红素水平比较 见表2。第5日和第10日，模型组大鼠血浆胆红素水平显著低于对照组，而实验组大鼠血浆胆红素水平显著高于模型组，且第10日高于第5日（P<0.05）。

表2 各组大鼠血浆胆红素水平比较（μmol/L，±s）

表2 各组大鼠血浆胆红素水平比较（μmol/L，±s）

组别 第5日 第10日对照组 17.59±3.21 17.30±3.18 n 治疗前10 17.21±3.14模型组 9.61±2.52*9.86±2.73*10 9.43±2.47*实验组 10 9.51±2.38*#14.11±3.07*#18.02±3.24#△

2.4 各组氧化低密度脂蛋白水平比较 见表3。第5日和第10日，模型组大鼠氧化低密度脂蛋白水平明显高于对照组，而实验组大鼠氧化低密度脂蛋白水平明显低于模型组，且第10日低于第5日（P<0.05）。

表3 各组大鼠血氧化低密度脂蛋白水平水平比较（μmol/L，±s）

表3 各组大鼠血氧化低密度脂蛋白水平水平比较（μmol/L，±s）

组别 第5日 第10日对照组 5.13±1.17 5.24±1.21 n 治疗前10 5.01±1.12模型组 8.87±1.29*9.01±1.47*10 8.71±1.33*实验组 10 9.01±1.42*#7.03±1.34*#5.41±1.26#△

3 讨 论

急性脑梗死发病急骤，病情变化迅速，缺血再灌注导致的脑组织神经损伤及脑神经细胞坏死与凋亡是导致其高死亡率的主要原因。急性脑梗死的发病机制复杂，与脑微血管结构及功能密切相关，急性脑梗死模型大鼠脑微血管管周间隙增大，皮层微血管管壁扭曲变形，严重水肿，内皮细胞和紧密连接结构受损严重，大量炎症细胞浸润，导致大量VEGF生成，血小板释放炎性介质，加重组织的缺血缺氧，引起血流动力学指标变化［7-8］。胆红素为血红蛋白分解代谢产物，具有抗氧化性，可减少氧化低密度脂蛋白生成，急性脑梗死自由基清除能力下降，脂类过氧化反应能力增加，降低血浆胆红素水平。低密度脂蛋白与动脉粥样硬化有关，低密度脂蛋白可通过促进氧化低密度脂蛋白加速动脉粥样硬化发生发展，氧化低密度脂蛋白可加速脂质沉积，促使血栓形成，引起血管内皮细胞功能障碍损伤，从而引起急性脑梗死［9-10］。急性脑梗死属中医学“中风病”范围，活血通络中药对急性脑梗死可标本兼治，通过活血行气、疏通经络、祛瘀生新等发挥治疗作用，是治疗中风病有效方法，具有较好的临床疗效，但其作用机制尚不明确。

本研究发现，模型组大鼠脑组织神经元肿胀，梗死灶内细胞和血管坏死，结构模糊，间质水肿，大鼠血浆黏度、全血黏度高切、全血黏度低切明显升高，血浆胆红素明显降低，氧化低密度脂蛋白水平明显升高，说明采用自身栓子法制备急性脑梗死大鼠模型大鼠的脑组织、血液流变学、血浆胆红素和氧化低密度脂蛋白发生了明显变化，符合急性脑梗死病理变化，所建立的动物模型可较好地评价药物的干预作用和机制的研究［11］。给予活血通络化痰方后发现大鼠少数神经细胞死亡，细胞质疏松及肿胀明显减轻，脑组织水肿有减轻；浆黏度、全血黏度高切、红细胞聚集指数明显低于模型组，血浆胆红素明显高于模型组，氧化低密度脂蛋白水平明显低于模型组，且第10日低于第5日，差异均有统计学意义，提示活血通络化痰方可改善急性脑梗死模型大鼠损伤脑组织，改善血液流变学指标、血浆胆红素和氧化低密度脂蛋白。川芎所含川芎嗪扩张血管和抗血栓，改善脑循环，抑制自由基，提高耐氧能力和脑血流量，改善其神经学缺损，抑制小胶质细胞的活化等有关［12-13］。水蛭具有纠正微循环，改善脑部缺氧，改善超氧化物歧化酶、丙二酸、内皮素及血小板最大聚集率的作用，治疗急性期缺血性脑中风疗效显著［14］。赤芍、丹参能降低血小板表面活性和血管内皮素、扩张脑血管、改善脑循环、清除氧自由基、改善脑血液供应，对脑神经细胞损伤具有保护作用［15］。银杏黄酮苷和银杏内酯为强有力自由基清除剂，能改善神经功能缺损、减轻缺血后脑水肿和炎症、改善微循环、增加脑血流量、改善血液黏度、减少脑梗死面积等作用［16-17］。

综上所述，活血通络化痰方可改善急性脑梗死模型大鼠损伤脑组织，降低血液流变学指标和氧化低密度脂蛋白，升高血浆胆红素。

［1］ 申丽红，梁小乐，高旭光，等.急性脑梗死患者微栓子与颈动脉粥样硬化斑块的相关性研究［J］.中华老年心脑血管病杂志，2014，16（3）：237-239.

［2］ 李琳芸，李滔，王昌富，等.急性脑梗死患者各类血小板-白细胞聚集体的检测及在临床诊断中的应用［J］.检验医学，2017，32（2）：122-126.

［3］ 江显萍，陈建华，吴大鸿，等.阿司匹林联合奥扎格雷钠对急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化、纤维蛋白原和超敏C反应蛋白水平的影响［J］.中国老年学杂志，2014，34（12）：3258-3260.

［4］ 苏延玲，王红丽，张中华，等.灯盏花素注射液对急性脑梗死患者血液生化指标和血液流变学的影响［J］.中国药房，2016，27（27）：3802-3804.

［5］ 张立，杨佳蕾，艾妮，等.自拟益气活血通络方对急性脑梗死患者血清hs-CRP、S100-β、VEGF及神经功能影响［J］.现代中西医结合杂志，2016，25（17）：1861-1863.

［6］ 张国珍，郑维红，梁戎，等.川芎嗪对急性脑梗死模型大鼠硫化氢、血浆胆红素和氧化低密度脂蛋白水平变化及意义［J］.中国生化药物杂志，2015，35（3）：28-31.

［7］ 陈赟.丹参川芎嗪注射液联合西药对急性脑梗死患者血液流变学及血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量的影响［J］.中国中医急症，2017，26（1）：181-183.

［8］ 刘振宇，王丽华，周俊英，等.依达拉奉联合尤瑞克林治疗对急性脑梗死患者血液流变学及血管内皮细胞功能的影响［J］.海南医学院学报，2014，20（3）：337-339，343.

［9］ 邢影，张旭，常春娣，等.血清胆红素水平在老年急性脑梗死患者中的变化及意义［J］.中华老年医学杂志，2014，33（2）：126-128.

［10］朱卫香，刘彦敏.急性脑梗死患者血清对氧磷酯酶-1活性、氧化低密度脂蛋白水平与颈动脉内膜中层厚度的相关性［J］.实用医学杂志，2015，31（15）：2508-2510.

［11］姜炎，连亚军.鼠神经生长因子对急性脑梗死大鼠炎性因子与神经功能的影响［J］.中华实验外科杂志，2016，33（7）：1819-1821.

［12］吕建卫，马晴.丹参川芎注射液对急性脑梗死患者血清HCY、TNF-α的影响［J］.心理医生，2016，22（5）：123-124.

［13］季巍伟，尤克，傅伟达，等.丹参川芎嗪对急性脑梗死患者外周中性粒细胞淋巴细胞比例、神经功能评分及预后的影响［J］.中国生化药物杂志，2017，37（1）：68-70.

［14］蒋家银.水蛭溶栓胶囊合红花注射液治疗急性脑梗死50例临床疗效观察［J］.中国民族民间医药，2014，23（1）：81，83.

［15］李春丽，扎西草，孙燕辉，等.丹参川芎嗪注射液对急性脑梗死老年患者血清血管细胞间黏附分子-1、细胞间黏附分子-1、内皮素-1和一氧化氮水平的影响［J］.现代中西医结合杂志，2016，25（19）：2088-2090.

［16］范崇桂，郭胜.银杏叶提取物对急性脑梗死大鼠凋亡基因的影响［J］.中国医院药学杂志，2015，35（10）：902-907.

［17］陈坤山，徐国平，王金鹏，等.银杏达莫注射液对急性脑梗死患者脑血流及血管内皮功能的影响［J］.中成药，2014，36（12）：2479-2482.

Influence of Huoxue Tongluo Huatan Decoction on Blood Rheology，Plasma Bilirubin and Oxidized Low Density Lipoprotein Level in Acute Cerebral Infarction Rat Model

LIU Bo，WANG Jing.Xianyang Central Hospital of Shanxi Province，Shanxi，Xianyang 712000，China.

Objective：To study the influence of Huoxue Tongluo Huatan Decoction on blood rheology，plasma bilirubin and oxidized low density lipoprotein level in rats with acute cerebral infarction.Methods：60 healthy SD rats were randomly divided into the control group，the model group and the experimental group，20 rats in each group.A rat model of acute cerebral infarction was made by the method of self-embolism.The control group and the model group were treated with normal saline by lavage，and the experimental group was treated with Huoxue Tongluo Huatan Decoction by lavage.On the fifth day and 10th day，brain pathology of rats in each group was observed；blood rheology indexes（plasma viscosity，whole high viscosity，erythrocyte aggregation index）were compared，as well as plasma bilirubin and oxidized low density lipoprotein level.Results：Compared with the control group，the neurons in the brain tissue of the model group were swollen，the necrosis of the cells and vessels in the infarction，the structure was fuzzy，and the stroma showed edema.Compared with the model group，a few nerve cells died in the experimental group，and the porosity and swelling of the experimental group were obviously reduced，and the edema of the brain tissue was alleviated.On fifth days and tenth days，plasma viscosity，whole high viscosity and whole low viscosity in the model group were significantly higher than those of the control group，while plasma viscosity，whole high viscosity，erythrocyte aggregation index of the experimental group was lower than those of the model group.The differences were statistically significant（P<0.05）.The plasma bilirubin in the model group was lower than that in the control group，while the experimental group was significantly higher than the model group；the difference was statistically significant（P<0.05）.The level of oxidized low-density lipoproteinin the model group was significantly higher than that in the control group，but the level of oxidized low density lipoprotein in the experimental group was lower than that in the model group；the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Huoxue Tongluo Huatan Decoction can improve the injury of brain tissue in rats with acute cerebral infarction，reduce hemorheology and oxidized low-density lipoprotein，and increase plasma bilirubin.

Huoxue Tongluo Huatan Decoction；Acute cerebral infarction；Blood rheology；Plasma bilirubin；Oxidized low density lipoprotein cholesterol

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1340-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.008

2017-05-15）

陕西省医学科技研究项目（2015D118）