复方益母胶囊质量标准提高研究

李 柯，陈 丹，李若存，蒋 波，林凡友，王文天

(1.湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410013； 2.湘潭医卫职业技术学院，湖南 湘潭 411102；3.翔宇药业股份有限公司，山东 临沂 276023)

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复方益母胶囊质量标准提高研究

李 柯1，陈 丹2，李若存1，蒋 波1，林凡友3，王文天3

(1.湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410013； 2.湘潭医卫职业技术学院，湖南 湘潭 411102；3.翔宇药业股份有限公司，山东 临沂 276023)

目的 提高复方益母胶囊质量标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法对复方益母胶囊中益母草进行定性鉴别；采用高效液相色谱法进行定量分析，色谱柱为Hypersil NH2柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，流动相为磷酸盐缓冲液（pH＝5.5)－乙腈(20∶80），检测波长为192 nm。结果 TLC斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰；盐酸水苏碱质量浓度在 0.027～0.162 g／L范围内与峰面积线性关系较好(r＝0.999 5)，平均回收率为 97.58%，RSD为 2.82%（n＝9）。结论 所建立的定性、定量分析方法可用于复方益母胶囊的质量控制。

复方益母胶囊；质量标准；高效液相色谱法；盐酸水苏碱

复方益母胶囊由益母草、当归、川芎、木香4味中药 组方，活血行气，化瘀止痛，临床用于治疗气滞血瘀证所致痛经、产后腹痛、产后子宫复旧等，疗效确切[1－3]。为更好地控制本品质量，将现行标准中的薄层色谱（TLC）法测定盐酸水苏碱含量改为高效液相色谱（HPLC）法，采用TLC法进行木香、益母草定性鉴别，操作简单、合理，可作为本品质量控制方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent Technologies 1260 Infinity高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Agilent Open LAB色谱数据处理软件。

1.2 试药

益母草对照药材(批号为120912－201209)，木香对照药材（批号为120921－201309），盐酸水苏碱对照品（批号为110712－201513），均由中国食品药品检定研究院提供；复方益母胶囊（翔宇药业股份有限公司，批号分别为160102，160107，160313，150505，150517，150609，150713，160101，160112，160203)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水（实验室自制），丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯、环已烷等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 益母草

取3批样品（批号分别为160102，160107，160313）内容物，研细，取1 g，分别加乙醇30 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液浓缩至5 mL，加到中性氧化铝柱（上海五四化学试剂，100～200目，5 g，乙醇上柱）上，用50 mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至1 mL，作为供试品溶液。另取益母草对照药材1 g，加乙醇30 mL，同上述方法制成对照药材溶液。再取缺益母草的阴性样品细粉1 g，同法制成阴性对照品溶液。按2015年版《中国药典（四部）》通则0502中薄层色谱法[4]试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮－无水乙醇－盐酸（10∶6∶1）为展开剂，展开，取出，室温挥干溶剂，100℃加热约10 min，取出，放置室温，喷以新配制的稀碘化铋钾与1%三氯化铁无水乙醇溶液（2∶1）的混合溶液，至斑点清晰[5]。供试品溶液色谱中，在与益母草对照药材溶液色谱相应位置上显橘黄色斑点，而阴性对照品溶液相应位置无斑点，见图1 A。

2.1.2 木香

取3批样品（批号分别为160102，160107，160313）内容物研细，取1.6 g，分别置带塞三角瓶中，加乙酸乙酯20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液挥干，残渣用乙醇溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.4 g，加20 mL乙酸乙酯，同法制成对照药材溶液。再取缺木香的阴性样品细粉1.6 g，同法制成阴性对照品溶液。照2015年版《中国药典（四部）》通则0502中薄层色谱法[4]试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各4 μL，对照药材溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开，取出，室温挥干溶剂，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰[5]。供试品溶液色谱中，在与木香对照药材溶液色谱相应位置上显蓝色斑点，而阴性对照品溶液相应位置上无斑点，见图1 B。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取0.02 mol／L磷酸二氢钠用0.02 mol／L磷酸氢二钠调pH至5.5)－乙腈(20∶80）；检测波长：192 nm；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃。理论板数按盐酸水苏碱峰计不低于5 000[2]。

2.2.2 溶液制备

对照品溶液：精密称取盐酸水苏碱对照品适量，75%乙腈溶解，定容，得0.1 g／L的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液：取样品胶囊内容物1 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定总质量，静置1 h，于水浴回流（90～100℃）30 min，放置室温，复称总质量，加甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10 mL，加到中性氧化铝柱（100～200目，5 g，内径为1.2 cm）上，用100 mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加75%乙腈适量使溶解，定容至10 mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得[5]。

阴性对照品溶液：按处方比例和制法制成缺益母草的细粉，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样10 μL测定，结果阴性对照品溶液在供试品溶液色谱图上无干扰，色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液（质量浓度为0.216 g／L）适量，分别加75%乙腈稀释成质量浓度为 0.027，0.054，0.081，0.108，0.162 g／L的溶液，分别进样10 μL，记录色谱图。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以盐酸水苏碱对照品进样量(X，μg)为横坐标，绘制盐酸水苏碱标准曲线，得回归方程Y＝3 160 X＋7.059，r＝0.999 5（n＝5）。结果表明，盐酸水苏碱质量浓度在0.027～0.162 g／L范围内与峰面积积分值线性关系良好。

加样回收试验：取同一批样品（批号为160107，质量浓度为3.95 mg／g），加入高、中、低浓度盐酸水苏碱对照品适量，与所取供试品中待测定成分量之比控制在1.5∶1，1∶1，0.5∶1，依法进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸水苏碱加样回收试验（n＝9）

重复性试验：取同一批样品（批号为 160107），按低、中、高不同含量样品取样，每份样品分别制备3份，根据含量测定结果进行评价。结果供试品中盐酸水苏碱平均含量为3.95 mg／g，RSD为2.51%（n＝9），表明方法重复性良好。

中间精密度试验：取同一批样品（批号为160107），按低、中、高不同含量样品取样，每份样品分别制备 3份，由实验室不同的操作人员与不同仪器测定进行评价。结果供试品中盐酸水苏碱平均含量为3.99 mg／g，RSD为0.71%（n＝9），表明方法中间精密度良好。

稳定性试验：取放置0，2，4，8，12 h时的供试品溶液，分别进样，测定盐酸水苏碱的峰面积积分值。结果的 RSD为1.03%（n＝5），表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.2.4 样品含量测定

取10批样品，依法测定，结果见表2。结果表明，10批样品中的盐酸水苏碱平均含量为每粒1.91 mg，最低为1.69 mg，考虑到益母草药材产地、采收季节、工业化大生产中有效成分转移率、有效成分稳定性等因素对成品中盐酸水苏碱含量的影响，为保证产品在有效期内有效成分含量符合质量标准要求，暂订每粒含益母草以盐酸水苏碱（C7H13NO2·HCl）计，不得少于1.0 mg。

3 讨论

3.1 TLC鉴别

现行标准无益母草TLC鉴别，本研究中以益母草对照药材作对照，以硅胶G为吸附剂，建立益母草的TLC鉴别方法。经耐用性考察方法稳定，缺益母草阴性对照品试验未见干扰。现有标准木香的TLC展开剂为苯－醋酸乙酯（19∶1），因苯毒性较大，长期使用，会对周围环境及操作人员的身体健康造成伤害。曾选择不同展开剂、不同浓度香草醛硫酸溶液显色试验，确定以环己烷－乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，以5%香草醛硫酸溶液为显色剂，较2015年版《中国药典（一部）》收载的木香TLC鉴别条件[展开剂为环己烷－甲酸乙酯－甲酸（17∶3∶1）]效果更佳[5]。本研究中建立的木香TLC鉴别方法，经耐用性试验，斑点清晰，缺木香阴性样品试验未见干扰。现有标准经改进后，处方中的益母草、当归、川芎及木香4味药材都采用对照药材作对照，全部建立了TLC鉴别方法。

表2 10批样品含量测定结果(n＝2，mg)

3.2 检测方法选择

益母草为方中君药，盐酸水苏碱是益母草主要活性成分，因此将盐酸水苏碱作为本品质量控制指标性成分。目前，测定益母草及其制剂中盐酸水苏碱含量的方法有薄层扫描（TLCS）法，如妇康宁片、加味益母颗粒[6－7]；高效液相色谱－质谱（HPLC－MS）法，如妇宁丸、益母草及其颗粒剂[8－9]；高效液相色谱－蒸发光散射（HPLC－ELXD）法，如益母草胶囊[10]；高效液相色谱－紫外检测器（HPLC－UV）法，如益芪颗粒、癃闭舒胶囊、八珍益母片、益母草膏、益母草片、益母草胶囊及益母草颗粒[11－16]。其中HPLC－UV法灵敏度高，重复性好，易于操作，应用广泛。本品现标准采用TLCS法，在操作过程中因受各种因素影响，可操作性较差，展开剂的比例和展开环境（温度、湿度）、薄层板固定相的厚度与紧密度、显色时所喷显色剂的量及在薄层板上的均匀度，均会影响最终测定结果，故确定用HPLC法测定本品中盐酸水苏碱的含量。

3.3 色谱柱选择

2015年版《中国药典（一部）》收载品种和文献报道中，用HPLC法测定益母草及其制剂中的盐酸水苏碱用强阳离子交换（SCX）色谱柱，本研究中在选择色谱柱时对氨基键合硅胶与强阳离子交换柱进行了比较，结果发现氨基柱的分离效果明显优于阳离子交换柱，因此选择氨基柱作为分离本品的色谱柱。本品益母草采用水提醇沉，当归、川芎及木香用70%乙醇提取制备而成，利用盐酸水苏碱易溶于水和乙醇的特性，供试品直接醇提，上氧化铝柱纯化，去除了脂溶性成分的干扰。与薄层色谱法测定盐酸水苏含量比较，本研究中建立的HPLC法具有操作简单、快速、准确的特点，能更好地控制本品质量。

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Improvement of the Quality Standard of Fufang Yimu Capsule

Li Ke1,Chen Dan2,Li Ruocun1,Jiang Bo1,Lin Fanyou3,Wang Wentian3
(1.Hunan Academy of TCM,Changsha,Hunan,China 410013; 2.Xiangtan Medical and Health Vocational and Technical College,Xiangtan,Hunan, China 411102; 3.Xiangyu Pharmaceutical Limited by Share Ltd.,Linyi,Shangdong,China 276023)

Objective To improve the quality control standard of Fufang Yimu Capsule.M ethods TLC was used for identification of LeonuriHerba in Fufang Yimu Capsule.HPLC was used for quantitative analysis.The Hypersil NH2column(250 mm×4.6 mm，5 m) was used with the mobile phase of mixture of phosphate buffer－acetonitrile(pH＝5.5,20∶80),the detection wavelength was 192 nm.Results TLC sports developed were fairy clear,and the blank test showed no interference.The linear relationship of stachydrine hydrochloride was good in the range of 0.027－0.162 g／L(r＝0.999 5).The average recovery rate was 97.58%,RSD＝2.82%（n＝9）.Conclusion The established qualitative and quantitative analysis method is applicable for the quality control of Fufang Yimu Capsule.

Fufang Yimu Capsule;quality standard;HPLC;stachydrine hydrochloride

R284.1

A

1006－4931(2017)15－0016－04

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.15.005

李柯，硕士研究生，工程师，研究方向为中药新药工艺与质量标准，（电子信箱）17848689＠qq.com。

陈丹，硕士研究生，讲师，研究方向为药物制剂，（电话）0731－88807491（电子信箱）252916321＠qq.com。