葡萄籽活性物质原青花素萃取条件的研究

单卫明++刘冬++胡修伟++余红++季雅迪++洪素丽

DOI：10.16661/j.cnki.1672-3791.2017.22.250

摘 要：葡萄籽中含抗氧化物质——原花青素，具有防癌、抗衰老、防心血管疾病等作用，考察了溶剂种类、乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比等因素对原花青素提取量的影响，最终确立最佳提取条件：乙醇为溶剂、提取浓度为70%、提取时间为60 min、提取温度为50 ℃、料液比1∶7。

关键词：原花青素 提取 葡萄籽

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）08（a）-0250-02

原花青素结构中具有较多的羟基，具有较大的极性，使其能够很好的溶解于水、甲醇、丙酮、乙醇等极性溶剂而不溶解于苯、氯 仿、石油醚等非极性物质。较多羟基结构也使其成为良好的氢原子给予体，具有较强的抗氧化性质。

提取原花青素常用的方法有溶剂提取法，微波浸提法，超声提取法和超临界CO2萃取[1]法。葡萄籽中的原花青素物质通常以结合态与蛋白质、纤维素结合在一起，一般不易提出，通常选用有机溶剂或水提取，具有断裂氢键的作用。同时由于有机溶剂的渗透性较差，一般不单独使用，常需要水作为传质剂。

该研究掌握了葡萄籽中原花青素的溶剂提取工艺，考察了溶剂种类、乙醇浓度、提取时間、提取温度、料液比等因素对原花青素提取量的影响，最终确立最佳提取条件：乙醇为溶剂、提取浓度为70%、提取时间为60 min、提取温度为50℃、料液比1∶7。

1 材料与方法

1.1 实验材料

葡萄籽粉，化学试剂：甲醇，乙醇，石油醚，丙酮。

1.2 实验器材

720N紫外分光光度计，分析天平，离心机，水浴锅。

1.3 试验方法

（1）提取剂的确定：准确称取石油醚脱脂后的葡萄籽粉1.0 g四份，分别加入等量（7 mL的相同浓度的甲醇，乙醇，丙酮以及纯化水。置于30 ℃水浴锅中加热30 min。静置冷却至室温，置于离心机中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度计测量上清液吸光度（ps：不同的溶剂选用相同的溶剂作为吸光度空白对照）。结果显示乙醇作为提取剂提取效果最好。

（2）提取浓度的确定：准确称取石油醚脱脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分别加入等量（7 mL）的40%，50%，60%，70%，80%浓度的乙醇溶液。置于30℃水浴锅中加热30 min。静置冷却至室温，置于离心机中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度计测量上清液吸光度。结果显示选用70%浓度的乙醇提取效果最好。

（3）提取温度的确定：准确称取石油醚脱脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分别加入等量（7 mL）的70%浓度的乙醇溶液。分别置于30℃，40℃，50℃，60℃，70℃水浴锅中加热30 min，静置冷却至室温，置于离心机中，4 000R，20 min，取上清液，用紫外分光光度计测量上清液吸光度。结果显示50℃提取温度提取效果最好。

（4）提取时间的确定：准确称取石油醚脱脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分别加入等量（7 mL）的70%浓度的乙醇溶液。置于50℃水浴锅中分别加热30 min，40 min，50 min，60 nin，70 min，静置冷却至室温，置于离心机中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度计测量上清液吸光度。结果显示60 min提取时间提取效果最好。

（5）料液比的确定：准确称取石油醚脱脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，按1∶5，1∶6，1∶7，1∶8，1∶9的比例与70%浓度的乙醇溶液混合，置于50℃水浴锅中加热60 min，静置冷却至室温，置于离心机中，4 000R，20 min，取上清液，用紫外分光光度计测量上清液吸光度（ps：将所有的上清液加70%乙醇稀释至等体积再测量）。结果显示1∶7的料液比提取效果最好。

2 实验结果

2.1 溶剂的确定

原花青素易溶于水，甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯等有机溶剂，所以我们选择了以上五中溶剂，实验结果见表1。水虽然极性较强，但对细胞的穿透能力较差，故在同等条件下水的提取浓度最低，而甲醇、丙酮虽然也有较高的提取效果，且提取效果优于乙醇，但两者有毒或沸点较低、易挥发和燃烧等特性不适合作提取剂，最终选取乙醇为最佳提取剂。

2.2 提取浓度的确定

在常用提取溶剂中，乙醇的溶解性及穿透能力较强。在提取原花青素的实验中原花青素的提取量随乙醇浓度的增加而增加，当乙醇浓度达到一定程度时，原花青素提取量达到最大值，并呈下降趋势，见图1。原因可能是原花青素含有大量羟基，具有一定的极性，根据相似相溶原理，当乙醇浓度增加，溶液极性逐渐接近原花青素极性，原花青素溶解度增加，浓度为70%时最大，选取70%为最佳提取浓度[2]。

2.3 提取温度的确定

在通常情况下，进行有效成分的提取实验时，冷提取时产生的杂质少，热提取时的效率高。根据物理学理论可知，分子运动速度随提取温度升高而加快，溶剂在被提取物中的渗透、扩散及有效成分在提取液中的溶解速度随提取温度升高而加快，同时细胞膜结构在高温下遭到破坏，使原花青素更容易从葡萄籽中提取出来。升高温度会增加原花青素的提取量，继续增加温度会使原花青素结构被破坏，提取量降低。图2可以看出，葡萄籽中原花青素最佳提取温度为50℃左右，在此温度后，提取量反而呈现下降趋势。

2.4 提取时间的确定

根据理论可知，溶剂提取时间越长，提取成分越多，吸光度越大。但根据图3可知，提取时间不同导致原花青素的提取量不同。原因是在短时间内，原花青素还未有效溶出，所以在一定时间内，其提取量与提取时间成正相关趋势；时间过长，原花青素受热结构遭到破坏，所以在最佳提取时间之后两者成负相关趋势，见图3。

2.5 料液比的确定

原花青素的提取量受到料液比的影响，乙醇太少，原花青素未有效提取；乙醇太多，影响下一步的分离提纯。由表2可知，最佳料液比为1∶7左右，尤其要注意的是在用紫外分光光度计测量之前要进行稀释，加70%乙醇稀释至相同体积，该实验稀释到9 mL。

3 结论

该课题研究了原花青素在葡萄籽中的溶剂提取方法，综合研究了溶剂种类、浓度、温度、时间、料液比与原花青素提取量的关系，初步得出结论：70%乙醇在料液比1∶7、温度50℃时提取60 min为最佳提取条件。

参考文献

[1] 肖湘，俞丽君，邱玉莹，等.油柑多糖的提取与清除氢自由基的作用研究[J].中国药学杂志，1998（5）：25-27.

[2] 洪新，唐克.葡萄籽中原花青素提取研究[J].河北化工，2009（4）：24-26.endprint