正交设计优化西青果中没食子酸的提取工艺

安 硕， 黄丽珍， 李苏颖

(河南医学高等专科学校药学教研室，郑州 451191)

中医药学

正交设计优化西青果中没食子酸的提取工艺

安 硕， 黄丽珍， 李苏颖

(河南医学高等专科学校药学教研室，郑州 451191)

目的 建立西青果没食子酸的最佳提取工艺。方法 以西青果提取液中没食子酸含量为考察指标，通过正交试验优选出最佳提取条件。结果 最佳工艺为加水10倍量，提取3次，每次2 h。结论 该提取工艺稳定合理、快速简单、生产成本较低。

西青果；没食子酸；正交设计

西青果又名藏青果，为使君子科植物诃子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果[1]。本品有降火利咽开音功能，用于急、慢性咽炎或慢性喉炎、扁桃体炎等[2]，临床用药有藏青果冲剂[3]、藏青果喉片[4]等，也是西青果口含片[5]的主要原料药之一。其主要含没食子酸等酚酸类成分[6-7]。高效液相色谱(HPLC)法测定西青果没食子酸的含量已有报道[8-10]，但未见西青果提取工艺优化的相关文献。为进一步开发和利用西青果资源，笔者采用正交设计研究西青果的提取工艺，通过HPLC法测定西青果中没食子酸的含量以控制其质量，报道如下。

1 仪器与方法

1.1 仪器与试药 Waters高效液相色谱仪(包括Waters e2695分离单元，Waters e2998 PDA检测器)；KQ-100E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；YUPINGFA2004b型电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；METTLERAE240型十万分之一分析天平。

西青果(广西永福产，经河南中医学院董诚明教授鉴定为使君子科植物诃子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果)；没食子酸对照品(由成都曼斯特生物科技有限公司提供，批号0831-9501，经高效液相色谱法测定含量达98%以上)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法与结果

1.2.1 正交试验 根据单因素初筛试验结果，确定提取次数、加水倍数、提取时间3个因素，取3个因素水平。见表1。

1.2.2 色谱条件 色谱柱: HypersilODS2(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相:甲醇-0.2 %磷酸(5∶95)；流速:0.8 ml/min；柱温:30°；检测波长:274 nm；进样量:10 μl；理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于3000。在此色谱条件下，没食子酸与其他组分能达到基线分离。

表1 西青果水提取工艺条件正交试验设计

1.2.3 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成0.02 g/L的溶液，即为对照品溶液。

1.2.4 供试品溶液制备 准确称取7.5 g西青果，按正交实验设计，溶液滤液移入250 ml容量瓶中，水定容至刻度，精密吸取1 ml药液定容至25 ml量瓶，0.22 μm微孔滤膜滤过，即为供试品溶液。

1.2.5 标准曲线的制备 精密吸取没食子酸对照品溶液1、3、5、7、9 μl进样(n=2)，按上述色谱条件测定，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程和相关系数，Y=4.8×106x-5296 6，r=0.999 9。结果表明没食子酸在进样量0.021 6～0.194 0 μg范围内线性关系良好。

1.2.6 精密度试验 精密量取没食子酸对照品溶液10 μl，重复进样6次，按上述色谱条件测定，RSD=0.6%。

1.2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μl，于0、2、4、8、12、24 h进样，按上述色谱条件测定，RSD=2.75%。表明至少24 h内供试品溶液在常温下仍保持稳定。

1.2.8 水提取工艺条件 正交试验结果将1～9号供试品溶液分别进样10 μl，按上述色谱条件测定，计算没食子酸含量。没食子酸含量及方差分析结果见表2-3。

由正交试验结果可知，所考察的3个因素对没食子酸含量的影响，显著性大小为B>D>C，即提取次数>提取时间>加水倍数，提取次数视为主要的影响因素；表3方差分析结果表明：B、D因素影响差异有统计学意义(P<0.05)，而C因素影响差异无统计学意义(P>0.05)，以B3C2D3为最佳方案，即提取条件为提取次数3次，用10倍量水，提取时间2 h。

1.2.9 优选提取工艺验证试验 为了进一步考察上述工艺的稳定性和合理性，按所筛选出的最佳工艺条件进行重复性实验3次，分别测定没食子酸的含量。见表4。

表2 西青果正交实验及结果

表3 没食子酸含量方差分析表

注：F0.05(2,2)=6.94。

表4 验证试验结果

没食子酸的平均含量为2.451 1%，因此，所选的提取条件为最佳工艺。

2 讨论

通过正交试验，确定了西青果中没食子酸的最佳提取工艺。极差和方差分析表明，最佳条件为提取次数3次，用10倍量水，提取时间2 h。试验结果表明，该提取工艺稳定性好，操作简单，成本较低，为进一步开发利用西青果提供了理论基础。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版：一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015.

[2] 王本详.现代中药药理与临床[M].天津:天津科技翻译出版公司,2004:785.

[3] 孙璐璐,张石革.五官科用药(四)-咽喉用药[J].中国药房,2003,14(1):59.

[4] 刘元,宋志钊,李星宇,等.藏青果喉片药效学研究[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(1):61.

[5] 谢永红,戴青,赵鸿燕,等. 西青果口含片的处方研究[J].中国药房,2017,28(10):1386-1388.

[6] 谢培山.中药色谱指纹图谱鉴别的概念、属性、技术与应用[J].中国中药杂志,2001,26(10):653-655.

[7] 赵映兰. 西青果抗炎活性成分的分离鉴定及体内外抗炎作用研究[D].重庆：第三军医大学,2016.

[8] 赵建平.西青果中没食子酸的含量测定[J].广西中医学院学报,2003,6(4):53.

[9] 袁铭,熊晔,向阳,等.高效液相色谱法测定藏青果中没食子酸的含量[J].医药导报,2009,28(7):916.

[10]黄耀广,陈小雪,陈秀英.诃子、西青果和毛诃子的含量比较研究[J].西北药学杂志,2017,32(2):154-157.

[责任编辑：马香芹]

Study on Extraction Technology for Gallic Acid from Terminalia Chebula by Orthogonal Design

AN Shuo, HUANG Li-zhen, LI Su-ying

(HenanMedicalCollege,ZhengzhouHenan451191,China)

Objective The research aims at studying the optimum extraction technology of gallic acid from Terminalia Chebula. Methods The best extraction condition was screened by orthogonal experiment according to the content of gallic acid. Results The optimum was 10 times the amount of water, extracted three times, each time 2 h. Conclusion The extraction process is stable， reasonable, fast and simple with low cost of production.

Terminalia Chebula; gallic acid; orthogonal design

2016-12-30

安硕(1989-)，女，河南省南阳市人，硕士，助教，从事药学专业教学与科研工作。

R 284.2

A

1008-9276(2017)05-0500-03