制作浆膜腔积液标本液基细胞学病理涂片相关技术探讨

李孜孜　朱淑琴

【摘要】 浆膜腔积液液基薄层细胞涂片制作是一项需要谨慎的态度和高超技巧的工作， 在实际工作中采用不同的制片方式， 制作出优质的浆膜腔液基细胞学涂片， 可为病理诊断提供支持。

【关键词】 浆膜腔积液；液基薄层细胞制片术；病理

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.117

Investigation of related production techniques of serous effusion specimens liquid-based cytology pathology smear LI Zi-zi， ZHU Shu-qin. Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat - sen University， Zhuhai 519000， China

【Abstract】 Serous fluid-based thin-layer cell smear production needs careful attitude and superb skills. Different production methods should be adopted in practical work to produce high-quality serous liquid-based cytology smear and provide support for pathological diagnosis.

【Key words】 Serous effusion； Liquid based thin-layer cell preparation； Pathology

液基薄層细胞制片术是一种较先进的细胞学检查（病理学检查）， 通过分离提取和细胞的自然沉降， 克服了传统制片技术存在的材料太厚、细胞重叠、背景模糊和染色不佳等问题[1-4]。而细胞学检查以标本容易获得、无创在临床广泛的应用。

1 标本采集

从患者中抽取约120 ml标本至细胞保存瓶， 拧紧瓶盖， 并适当摇晃， 以便保存瓶中的抗凝剂与标本混匀。在瓶壁上备注患者姓名、年龄、取样日期， 填写好申请单并及时送检。

2 方法

2. 1 机器法 ①在50 ml离心管、12 ml离心管及申请单上注上相应编号， 摇匀标本后转移50 ml样本至50 ml离心管。②第一次离心600 g、10 min。③弃上清液， 置漩涡混合器上震荡约30 s， 往50 ml离心管中加入3～4 ml细胞保存液（对细胞起固定作用）， 用软吸管将标本混匀后转移至12 ml离心管。④第二次离心600 g、5 min。⑤弃上清液， 置漩涡混合器上震荡约30 s。⑥将处理好的载玻片放置染色板上并扣上制片染色舱， 在载玻片上注上相应编号。使用LBP SYSTEM液基细胞沉降式自动制片染色系统进行制片及染色， 采用巴氏染色法：染色时间与妇科不同， 一般建议苏木素染色8～15 s， EA-OG染色35～55 s[5]。⑦拆除制片染色舱， 将完成制片染色的样片插入无水乙醇缸中的玻片架上进行脱水约30 s。放入透明剂透明约5 min以上， 中性树胶湿式封片（透明剂有二甲苯、环保脱蜡透明剂TO等）。

备注：血性标本处理方法（第一次离心并弃上清液后血红细胞≥1 ml）：第一次离心后用软吸管弃上清液（注意倾倒力度）， 用软吸管将50 ml离心管中的中间细胞层（即血红细胞与上清液的交界处， 约1～2 mm高）转移至12 ml离心管， 往12 ml离心管中加入3～4 ml细胞保存液（对细胞起固定作用）。

2. 2 手工法 ①收集标本：震荡>30 s（目的：使宫颈刷上的细胞震落到保存液当中；打散黏液和血液）。②编号：把保存瓶中上的编号信息转移到12 ml离心管上。③用自动样本转移机转移标本：12 ml离心管加入4 ml细胞分离提取液， 把离心管、移液器、保存瓶放到样本转移机相对应的位置。设置相关参数， 运行。④第一次离心：程序一， 离心力200 g， 时间2 min（目的：去除杂质）[6， 7]。⑤用真空废液装置洗掉上层杂质。⑥第二次离心：程序二， 离心力800 g， 时间10 min（目的：富集细胞）。⑦倒掉上清液， 观察细胞量的多少。较多者加1～2滴缓冲液， 较少者做标记。⑧在震荡器上震散细胞团。⑨手工染色操作：a.在手工染色板上放好载玻片， 套上制片染色仓， 写好编号；b.往制片染色仓中加入少量缓冲液（目的：为了在后面沉降过程中， 使细胞平铺均匀）；c.用移液枪转移标本置于制片染色仓当中（转移量视标本中的细胞量而定）；d. 自然沉降（10 min）——无水乙醇（固定作用）——缓冲液冲洗（2次）——苏木素染色（60～80 s， 染细胞核）——缓冲液洗（2次）——无水乙醇洗（2次）——EA-OG染色（120～180 s， 染胞浆）——无水乙醇洗（2次）[8]；e.取片， 浸泡在无水乙醇中进行脱水， 浸泡在透明剂中进行透明[常用透明剂：二甲苯（5 min）、TO生物透明剂（10 min）]， 封片晾干。

3 讨论

天气较为炎热时， 待检测浆膜腔积液的保存瓶存放时间≤6 h， 如果需要过夜需在冷藏（4℃）。血性标本应先用缓冲液稀释， 第一次离心并弃上清液后血红细胞≥1 ml， 第一次离心后用软吸管弃上清液（注意倾倒力度）， 用软吸管将50 ml离心管中的中间细胞层（即血红细胞与上清液的交界处， 约1～2 mm

高）转移至12 ml离心管， 往12 ml离心管中加入3～4 ml细胞保存液（对细胞起固定作用）[9-11]。

总之， 制作浆膜腔积液液基薄层细胞涂片制作是一项需要谨慎的态度和高超技巧的工作， 需要病理技术人员长期的练习和摸索， 并在实际工作中针对不同送检采用不同的制片方式， 不断总结经验发现问题及解决问题。这不仅体现了医务者精益求精的态度， 更体现了医务工作者的责任心。只有通过这样不断的努力和钻研才能制作出精良的病理切片， 为病理诊断提供保障。

参考文献

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[收稿日期：2017-05-02]endprint