2，4-二硝基苯肼气相色谱法测定食品中甲醛的含量

2017-09-03周兰影郑宏儒刘大鹏李桂杰吉林省产品质量监督检验院

食品安全导刊 2017年21期

□ 贾俊周兰影郑宏儒刘大鹏李桂杰张旭吉林省产品质量监督检验院

□ 贾俊周兰影郑宏儒刘大鹏李桂杰张旭吉林省产品质量监督检验院

建立一种2,4-二硝基苯肼气相色谱法测定食品中甲醛的方法，优化色谱条件，测定分析市售米粉、腐竹和毛肚三种食品中的甲醛含量。食品经水浸提，2,4-二硝基苯肼（DNPH）衍生15 min，正己烷萃取，经HP-5型色谱柱（15 m×0.25 mm，0.25 μm）分离，N2为载气，柱流量1.20 mL/min，分流比为10∶1，进样口温度为250 ℃，ECD电子捕获检测器温度设为280 ℃时，色谱条件最佳。

甲醛；2,4-二硝基苯肼；气相色谱；食品

甲醛（HCHO）是对人体细胞功能损害较大的致癌物，对神经系统、免疫系统和肝脏等也会产生毒害。不法商贩将其用在食品杀菌、防腐、增白、漂白、凝固和定型等加工过程中，产生极大的食品安全隐患。目前常用方法有分光光度法，但是分光光度法中的乙酰丙酮法中乙酰丙酮见光易分解，准确度及灵敏度低；变色酸法易受酚、胺和其他醛等物质的干扰，操作较为繁琐[1-4]。

本工作采用2,4-二硝基苯肼为衍生剂与甲醛脱水形成2,4-二硝基苯腙（HCHO-DNPH），由于该物质的性质比较稳定，而且不易挥发，仪器响应值较高，用气相色谱检测正己烷萃取反应产物2,4-二硝基苯腙，间接测得食品中甲醛含量。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

气相色谱仪（赛默飞世尔，TRAS-1300，配ECD检测器）；涡旋振荡器（XW-80型）；电热恒温水浴锅（DK-S24型）；甲醛、2,4-二硝基苯肼、无水乙醇、氢氧化钾，均为分析纯。米粉、腐竹、毛肚，市售。

1.2 色谱条件

HP-5型毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；正己烷萃取物，经HP-5型色谱柱（15 m×0.25 mm，0.25 μm）分离，N2为载气，柱流量1.20 mL/min，分流比为10∶1，进样口温度为250 ℃，ECD电子捕获检测器温度设为280 ℃时，色谱条件最佳。

1.3 绘制标准工作曲线

分别取浓度为100 mg/L甲醛工作液0、25、50、100、200、300 μL放置到25 mL的具塞比色管中，然后分别加入2.8 mL的2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，加入50 μL的浓盐酸后摇匀，置于60 ℃水浴衍生30 min后，取流水快速冷却并加入5 mL的正己烷摇匀，超声萃取2 min，离心3 min，移取正己烷层于干净试管中；再加入5 mL正己烷，重复萃取一遍，合并正己烷层混匀待测。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线、检出限和测定下限

按照标准曲线绘制要求，在最优色谱条件下进行相当于甲醛浓度为0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的标准溶液的检测，绘制以峰面积与甲醛质量浓度关系曲线。线性回归方程为y=1.32×104x+21.62，相关系数r2=0.999 1，该方法的检出限小于20 μg/L。甲醛测定下限为0.50 mg/kg。

2.2 选择样品前处理条件

甲醛易挥发性，提取方式对测定结果重复性影响大。通过考察浸泡时间和超声波水浴振荡时间对提取效果的影响。结果表明：在浸泡50 min、超声波水浴中超声10 min，色谱峰面积基本趋于稳定，测试效果最佳。

2.3 色谱条件的选择

衍生-气相色谱法测定甲醛时，通常使用的检测器有电子捕获检测器（ECD）与氢火焰离子化检测器（FID）两种，本实验选用响应高、杂峰少、干扰少的ECD检测器测定。分别使用极性、中等极性和弱极性的色谱柱分析测定，实验结果表明选用弱极性HP-5柱（聚5%苯基、5%甲基聚硅氧烷，30 m×0.32 mm，0.25 μm）作为实验用柱效果最好。优化仪器条件，最后确定的气相色谱条件见1.2。甲醛标准溶液的气相色谱图见图1。

2.4 方法的精密度及回收实验

图1 经衍生的甲醛标准溶液的色谱图

对米粉、腐竹、毛肚三种不同基质样品的加标回收率研究，在0.5、1.0、2.0 mg/kg三个浓度水平上加标回收实验，每个样品平行测定10次，添加水平为0.50 mg/kg，回收率在72%～110%；添加水平为1.00 mg/kg时，回收率范围在77%～108%；添加水平为2.00 mg/kg时，回收率在88.5%～110%，相对标准偏差（n=10）在6.4%～13%，重现性和稳定性好。

2.5 基质对回收率影响

通过统计学t值检验分析，米粉、腐竹和毛肚三种不同基质样品的加标回收率无显著性差异(P>0.05)，即样品基质对衍生色谱检验法的准确度基无影响。