乳与乳制品中三聚氰胺的快速检测-高效液相色谱法

2017-09-03王新喜北京和瑞祥通检测技术有限公司

食品安全导刊 2017年21期

关键词：氯乙酸三聚氰胺氨水

□ 王新喜北京和瑞祥通检测技术有限公司

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通过测定高效液相色谱检在牛奶中三聚氰胺的残留量。目前为止，三聚氰胺已作为蛋白质添加在食品中。但是根据相关规定，三聚氰胺为非食品添加剂。本文根据三聚氰胺的概述、三聚氰胺的检测现状以及三聚氰胺的检测分析结果有效认识三聚氰胺。

三聚氰胺；高效液相色谱检测；检测

由于三聚氰胺在食品中的添加引发了大规模的食品事件。三聚氰胺严重超出蛋白质含量。因为，三聚氰胺属于化工原料，无色无味[1-3]。如果过多摄入三聚氰胺的使用量会导致婴儿死亡。所以，加强对三聚氰胺的快速检测是必要的。

1 三聚氰胺的概述

1.1 三聚氰胺的实验原理

用乙腈作乳与乳制品中的蛋白沉淀剂和三聚氰胺的提取剂，用强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱仪-DAD检测，外标法定量。复色光通过样品池被组分选择性吸收照射在二极管阵列装置上。

1.2 三聚氰胺在食品中的检测现状

我国在蛋白质、细菌和脂肪等检测检验标准有明确规定，目前三聚氰胺不允许添加到食品中。三聚氰胺的检测方法有三聚氰胺HPLC-UV定量方法、HPLC-MS检测方法等。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

仪器：液相色谱仪；二极管阵列检测器（DAD）；分析天平（感量0.001 g）。

试剂：乙腈（色谱纯）；氨水（分析纯）；三氯乙酸（分析纯）；5%氨水甲醇溶液（取5.0 mL氨水用水定容至100 mL）；75%乙腈水溶液（取75 mL用水定容至100 mL）；1%三氯乙酸溶液（取10 g三氯乙酸溶在1 L水中）。

2.2 三聚氰胺的提取与净化

（1）提取。根据提前储存在冰箱中的牛奶，在实验之前必须在恒温条件下，称取样品5 g（精确到0.01 g）放入50 mL的离心管中，等待检测；在样品中放入1%三氯乙酸溶液15.0 mL，乙腈5 mL，震荡摇匀25 min，8 000 r/min的速度离心5 min，取上清液。

（2）净化。MCX混合型阳离子交换固相取柱在装置上，使用甲醇3.0 mL和超纯水活化后，添加样品提取液5.0 mL；按照顺序依次使用3.0 mL甲醇和0.1 mol/L盐酸水溶液3.0 mL，3.0 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱收集。使用氮气吹干后；流动相定容，高效液相色谱分析。

（3）液相色谱条件。流动相：磷酸盐缓冲液+乙腈=80+20；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。

2.3 测量方法与含量计算

通过保留时间定性（光谱图辅助定性），外标法峰面积定量。根据表1、图1和图2结合实际探究结果如下。

计算公式。以三聚氰胺的含量为质量，数值以mg/kg表示。

表1 不同浓度三聚氰胺标准浓液与峰面积表

图1 样品色谱图

图2 三聚氰胺的光谱图

表2 样品添加回收率表

式中：C——工作液中的浓度；

V——溶解后的体积；

m——称样量；

F——稀释倍数。

通过三聚氰胺的光谱图和样品色谱图，不能明显看出DAD检测器的优势。通过样品回收率以及标准曲线图具体分析。样品添加回收率见表2。

2.4 实验结果分析

根据三聚氰胺的标准曲线图得知：在0.0～50 mg/L线性关系良好。具有良好精密度和准确度，样品处理简单，快速，适合实验室大批量检测。与其他检测器相比，DAD检测器具有噪音低、灵敏度高，可以得到任意波长的色谱图，效果极为方便。而UV检测器只是对特定波长做检查，结果出来是特定波长下的吸收，在定性上不如DAD有优势。