规模化鸡场大肠杆菌病的鉴定及药敏试验

文│刘红梅（河北省黄骅市农业局）

规模化鸡场大肠杆菌病的鉴定及药敏试验

文│刘红梅（河北省黄骅市农业局）

鸡大肠杆菌病是指由禽致病性大肠杆菌所引起的局部或全身感染的疾病。大肠杆菌病在哺乳动物主要引起肠道疾病，而在禽类，当宿主受到高致病性大肠杆菌感染而其防御能力不足以抵抗或完全丧失时，常会引起典型的继发性局部或全身性感染。此病可引起鸡的胚胎死亡、脐炎、败血症、输卵管炎、关节炎和滑膜炎、肉芽肿、卵黄性腹膜炎、眼炎等一系列病症。该病的发病率为11%～69%，死亡率为3.8%～72.9%，致死率为40.2%～90.3%。该病在任何季节、地区、品种、日龄的鸡群中均可发生，但以冬末春初和梅雨季节多发，特别是饲养密度过大、环境卫生差、场地被严重污染的鸡场发生率较高。2016年2月，河北省黄骅市某养殖户饲养的大部分蛋鸡突然发生一种以下痢和产蛋率下降为主要临床特征的疾病，经病理学检查、微生物学检查确诊为大肠杆菌病。

一、材料和方法

1.材料。病料为2016年2月黄骅市某规模化养殖场送检的病鸡。普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、细菌生化试验培养基、革兰氏染液均购自正规公司。试验所用的药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司。

2.方法。

（1）流行病学的调查。通过向鸡场饲养员、技术员询问鸡群饲养状况、管理条件及发病时间，了解发病情况。

（2）临床症状及病理解剖观察。通过对鸡群精神状态、鸡冠肉髯色泽、粪便颜色及剖检后皮肤、脏器、胃肠道、气囊等观察，对疾病做出初步诊断。

（3）细菌的分离与培养。用接种环无菌钩取病鸡少许肝组织、脾组织划线分别接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基，37℃培养24小时后取出观察。选取麦康凯琼脂培养基上的单个红色菌落，用接种环从该菌落中挑一部分涂片，革兰氏染色镜检。

（4）细菌生化试验。培养细菌用麦康凯培养基增菌后选取单个红色菌落，将细菌培养物分别接种于木糖、吲哚、甲基红、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖培养基上，做分离菌的糖发酵试验。

（5）药敏试验。用灭菌接种环挑取麦康凯板培养24小时待试细菌的纯培养物（选择的菌落尽量大小一致），采用“十”字划线法将细菌涂布到普通营养琼脂板（细菌尽可能涂布均匀）。用灭菌尖头镊子，取已制备好的各种干燥抗菌药敏片，分别密贴于上述培养基表面，用镊子轻按下纸片，试纸片与培养基接触紧密，每种药敏片标记清楚。将贴药敏片的平板置37℃温箱中培养18小时，取出观察结果，测量抑菌圈直径。按抑菌圈直径大小作为判定敏感性的标准：20毫米以上，极敏；15～20毫米，高敏；10～14毫米，低敏；10毫米以下，耐药。

二、试验结果

1.发病情况调查。河北省沧州市黄骅市某规模化养殖场所养的1万只蛋鸡采食量不断减少，其中900只表现下痢，产蛋率下降15%，少数病鸡死亡。

2.临床症状观察。病鸡的临床症状表现为采食量少，精神沉郁，羽毛蓬乱，两翅下垂，排浅绿色或灰白色稀粪、肛门周围粘有黄白色腥臭稀粪，腹部肿大、两脚关节肿大不能站立，产蛋量下降，个别病鸡突然死亡。

3.病理学检查结果。剖检可见病死鸡消瘦，气囊浑浊；腹腔有淡黄色半透明积液，时间稍长即变为胶冻样；心脏、肝脏等脏器被乳白色纤维膜包裹，并与其他组织粘连，切开包膜可见轮层；肝脏瘀血，胰腺、十二指肠黏膜出血；其中多只送检鸡的小肠、盲肠和输卵管浆膜、肝脏、心脏、脾脏和肾脏被膜等处还可见大小不等的白色结节，呈圆形或椭圆形，有绿豆大至玉米粒大，有明显的蒂；结节质地坚实，有完整的包膜，表面光滑，切面呈灰白色、均质。

4.细菌的分离与培养。在麦康凯培养基上长有边缘整齐或波状、稍凸起、表面光滑湿润、直径1.5～2毫米粉红色或深红色菌落；在普通琼脂平板上长有表面光滑、湿润、半透明、灰白色圆形、微凸起的中等大小菌落。染色镜检可观察到该细菌为革兰氏阴性，两端钝圆短粗的小杆菌，多数单个散在，个别成双排列，无芽孢。

5.细菌生化试验。生化试验结果见表1。

6.药敏试验。具体结果详见表2。

通过药敏试验结果表明，庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、氟苯尼考对大肠杆菌极敏；链霉素、新霉素、氧氟沙星对大肠杆菌高敏；强力霉素、四环素、阿莫西林对大肠杆菌耐药。

表1 细菌生化试验结果

三、讨论

根据病鸡的临床表现、剖检病理变化以及采集的病死鸡的病料接种于麦康凯培养基上，培养基长出中等大小的粉红色光滑菌落，取典型菌落抹片染色镜检可见革兰氏阴性中等大的杆菌，生化试验对葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，与大肠杆菌的特征一致。

根据药敏试验可得出结论，临床上应用较多的四环素、强力霉素、阿莫西林对大肠杆菌的耐受性很强。应用较少的氟苯尼考、氨基糖苷类药对大肠杆菌有高度的敏感性。

表2 药敏试验结果

该病可根据药敏试验的结果选择合适的药物进行治疗，因此建议在临床上应停用已普遍产生耐药性、临床上已明显无效的药物，选用目前应用较少、经药敏试验证明对大肠杆菌敏感的药物。环丙沙星、庆大霉素和氟苯尼考等，对本病通常具有较好的治疗效果。另外，还应考虑采取联合用药、交叉或轮换用药等方法。用药物治疗效果不理想时，用当地分离的菌株制备的大肠杆菌灭活苗对该病也有较好的防治效果。生产中发现，通过接种疫苗来预防大肠杆菌病，效果比较明显，接种疫苗后即使发病也比较轻，而且用药后也容易治愈。