高胰岛素和高血糖对糖尿病患者IGF2BP2基因表达的影响

龚琳+刘佳+卫兴国+曹莹

[摘要] 目的 研究胰岛素量与血糖量对1型和2型糖尿病的患者IGF2BP2基因表达的影响。方法 自白细胞提取总mRNA，作为模板进行反转录得到cDNA，以Real-Time PCR方法测定目的基因的表达量。 结果 测定了18例Ⅰ型糖尿病患者、25例2型糖尿病患者和20名正常人中的IGF2BP2基因表达量。 结论 该研究在Ⅰ型和2型糖尿病的患者、正常人群中测定了IGF2BP2基因的表达量水平，发现胰岛素值低、血糖高的1型糖尿病组的IGF2BP2基因表达正常，胰岛素与正常组无差异、血糖高的2型糖尿病组IGF2BP2基因高表达，推测胰岛素值、血糖值与IGF2BP2基因无直接联系，但是IGF2BP2可能与胰岛素抵抗有关。

[关键词] IGF2BP2基因；胰岛素；血糖

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2017）04（b）-0024-02

[Abstract] Objective To research the effect of insulin dose and blood glucose dose on the IGF2BP2 gene expression of type 1 diabetes patients and type 2 diabetes patients. Methods The total mRNA was extracted by white cell as templets for reverse transcription thus obtaining cDNA， and the expression level of target gene was measured by the Real-Time PCR method. Results The IGF2BP2 gene expression levels of 18 cases of patients with type 1 diabetes， 25 cases of patients with type 2 diabetes and 20 cases of normal people were measured. Conclusion The measurement shows that the IGF2BP2 gene expression in the type 1 diabetes group with low insulin value and high blood glucose is normal， and there is no difference in the insulin compared with the normal group thus speculating that the insulin value， blood glucose value have no direct correlation with the IGF2BP2 gene， but the IGF2BP2 may be related to the insulin resistance.

[Key words] IGF2BP2 gene； Insulin； Blood glucose

近年來，随着平均寿命延长，生活习惯和饮食结构变化，国人糖尿病的发病率逐年增加。近10年来，通过常见病与候选基因关联各种研究，研究人员发现了一些和糖尿病发病率增加密切相关的具有多态性的基因[1]，其中就包括IGF2BP2（胰岛素样生长因子2结合蛋白2），在不同类型糖尿病患者中，IGF2BP2基因的表达量有很大差异。因此，在各常见类型糖尿病的患者和正常人中，该研究对IGF2BP2基因的表达量进行测定，研究IGF2BP2基因表达量水平与胰岛素量、血糖量的联系，以期在基因水平对各型糖尿病的发生机制进行了探索，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

样本由长沙市第四医院提供，为临床确诊的Ⅰ型、2型糖尿病患者血样，已征得本人同意。正常人血样采自非糖尿病的捐献者。以常规抽血检验的方法检测的空腹胰岛素（FINS） 和空腹血糖量（FPG），核算胰岛素抵抗值，胰岛素抵抗值计算公式为：HOMA-IR = FPG×FINS/22.5。

1.2 试剂与仪器

PCR产物纯化试剂盒、Trizol Reagent、RNase、Oligo dT（Invitrogen公司产品）；Power SYBR Green PCR Master Mix、Taqman Universal PCR Master Mix试剂盒（ABI公司产品）；Sensiscript RT试剂盒（QIAGEN公司产品）；其余反应中所用试剂均为分析纯。实时荧光定量PCR仪（ABI公司产品）。

1.3 引物和探针设计

引物为5-CACCGGAAGCCCAGTTCAA-3和 5-CCACCTTTGCCAATCACCC-3；探针序列为5-TGAAGCTGGAAGCGCATATCAGAG-3。引物和探针皆由上海生工生物工程技术公司合成。

1.4 样本总RNA提取

取血样2～3 mL，使用Trizol Reagent提供的方法提取血液中白细胞的总RNA，提取的RNA含量用紫外分光光度仪进行测定，OD260/280在1.8～2.0之间，-80℃保存待使用。

1.5 样本cDNA合成

取0.2 μg样本总RNA与Sensiscript RT 试剂盒中逆转录试剂进行反应；将反应体系都放在37℃孵育60 min，生成的cDNA置于-20℃保存待使用。

1.6 样本IGF2BP2基因表达量的检测

以样本总cDNA作为模板，按照Taqman Universal PCR Master Mix试剂盒说明备好反应体系，在ABI Prism 7300实时荧光PCR仪中进行反应，测定样本中IGF2BP2基因表达量。通过反应物梯度稀释和Real-Time PCR构建基因定量标准曲线，通过标准曲线对样本中的IGF2BP2基因表达量进行确定。每次测定时，待测基因均与持家基因GAPDH同时进行反应，以确保数据的可信性。

1.7 统计方法

该课题中，以IGF2BP2基因的表达量/GAPDH的表达量作为目的基因的表达量。利用SPSS 10.0统计学软件进行分析，3组数据差异的比较采用单因素方差分析；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Ⅰ型、2型糖尿病患者数据都是与正常对照组比较，Ⅰ型糖尿病组的空腹胰岛素值显著低于正常组（P<0.05），2型糖尿病组均值高于正常组，但是差异无统计学意义。Ⅰ型、2型糖尿病患者的空腹血糖值显著高于正常对照组（P<0.05）。利用实时荧光定量PCR方法来测定IGF2BP2基因在样本中的表达量，并使用持家基因GAPDH进行校正，2型糖尿病组的IGF2BP2基因相对表达量显著高于对照组，Ⅰ型糖尿病组未见表达量增高（见表1）。综合3组数据，可以看出仅2型糖尿病患者IGF2BP2基因表达量增加，这一现象与胰岛素量和血糖量并无直接对应关系。核算了各组的胰岛素抵抗值，2型糖尿病组胰岛素抵抗值显著增高于另外两组，其均值为正常组的2.56倍，IGF2BP2基因相对表达量也高于Ⅰ型糖尿病组和正常组，推测两者可能具有相关性。

3 讨论

极少数特殊类型的糖尿病是单基因疾病，但大部分2型糖尿病是与胰岛素抵抗和B细胞分泌障碍而导致高血糖的复杂多基因病，其发病机制至今未完全阐明。遗传因素在2型糖尿病的产生中起重要作用，但同时还受到诸多环境因素影响。2型糖尿病是种复杂多基因疾病，具备多基因病的特点——参与发病的遗传因素为多个，每个基因对发病影响大小不同，大多数基因作用小；疾病的最终发生是各基因作用的综合结果[2]。IGF2BP2也是2型糖尿病的相关基因之一，经过该课题组实验，2型糖尿病患者的IGF2BP2基因表达量高于正常对照组，Ⅰ型糖尿病患者的该基因却表达不高，经过检测，发现胰岛素值低、血糖高的Ⅰ型糖尿病组IGF2B P2基因表达正常，胰岛素与正常组无差异、血糖高的2型糖尿病组IGF2BP2基因高表达，推测胰岛素值、血糖值与IGF2BP2基因无直接正相关或者负相关，但是不管哪一组，胰岛素抵抗值却和IGF2BP2基因表达量同升同降，可能存在一定的联系。

然而，除了遺传易感性，环境因素在2型糖尿病发病中的作用也不小。很多临床研究显示，饮食控制、加强运动、控制体重可以使糖尿病得以预防或延缓发展[3]。遗传因素决定个人的疾病易感性，而环境因素则可促发糖尿病。因此，来自临床的患者在进行基因检验时无法排除每个人不同环境因素的影响，课题组拟用可排除环境因素影响的糖尿病模型动物或者胰岛素抵抗的细胞株进一步探索IGF2BP2基因表达和胰岛素的联系。

[参考文献]

[1] Rong R，Hanson RL，Ortiz D，et al.Association analysis of variation in/near FTO， CDKAL1， SLC30A8， HHEX， EXT2， IGF2BP2， LOC387761， and CDKN2B with type 2 diabetes and related quantitative traits in Pima Indians[J].Diabetes， 2009，58（2）：478-488.

[2] 高静，段畅，李丽娟.2型糖尿病发病机制的研究进展[J].医学综述，2015（21）：3835-3938.

[3] 牛洁，刘铜华，杨丽霞.环境因素在2型糖尿病发生中的作用[J].中国慢性病预防与控制，2008，16（4）：440-442.

（收稿日期：2017-01-19）