武汉地区汉族人群纤溶酶原激活物抑制物基因多态性分析

马良鹏，唐静宜，蒋捷，胡磊，张耕

(武汉市第一医院，武汉 430030)

武汉地区汉族人群纤溶酶原激活物抑制物基因多态性分析

马良鹏，唐静宜，蒋捷，胡磊，张耕

(武汉市第一医院，武汉 430030)

目的 分析武汉地区汉族人群纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多态性。方法 采用荧光染色原位杂交技术检测1 533例(男728例、女805例)武汉汉族人群PAI-1-675基因多态性，并结合文献比较不同地区及种族PAI-1-675位点等位基因、基因型频率。结果 武汉地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因及基因型分布不具有性别差异(P>0.05)。武汉地区汉族人群4G等位基因频率低于广州地区，4G/4G基因型频率低于广州、长沙地区，4G/5G基因型频率高于广州、长沙地区，P均<0.01。武汉汉族人4G等位基因频率高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、马其顿人、日本人、南非人；4G/5G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于马其顿人；P均<0.01。结论 武汉地区汉族人群PAI-1基因多态性有地区、种族差异，但无性别差异。

纤溶酶原激活物抑制物-1；武汉市；汉族；基因多态性

静脉血栓栓塞(VTE)是血栓在形成部位脱落，随血液流动时部分或完全堵塞静脉血管，引起相应组织或器官缺血坏死的病理过程。VTE是一种环境及遗传因素共同促发的障碍性疾病，多见于长期卧床、肢体制动、大手术或创伤后、晚期肿瘤或有遗传风险因素的患者。遗传因素促发VTE约占60%[1]，多项研究指出纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多态性为VTE形成的遗传风险因素之一[2]。此外，由于基因多态性分布在不同地区、种族、性别间可能存在差异，且目前国内外尚无关于PA1-1基因多态性分布的性别、地区、种族差异性研究。本研究对武汉地区汉族人群PAI-1多态性进行分析，并探讨不同性别、地区及种族间的差异，旨在为VTE的遗传流行病学研究提供方向。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年1～6月来武汉市第一医院进行PAI-1基因检测的1 533例汉族人群，男728例，女805例；年龄21～95岁；相互之间无亲缘关系，且籍贯为武汉市户籍。

1.2 PAI-1-675基因多态性分析 ①血液采集和处理：静脉采血2 mL，加至EDTA抗凝管中，并充分混匀，避免凝血或溶血。血液标本采集后应及时处理(-20 ℃保存不超过7周)，送检。②白细胞提取：取出200 μL混匀全血，分别加入1 mL 1×NH4Cl预处理液，颠倒混匀，室温静置5 min，隔2～3 min混匀1次，至液体颜色为橙清红色。3 300 r/min离心5 min，弃上清，以1×NH4Cl小心洗涤沉淀，弃上清，加入30 μL PHARM-GENE 01 SNP分析保存液，涡旋震荡10 s至混匀。③加入耀金分：取1.5 μL白细胞样本，加入相应的耀金分基因分析检测试剂中，混匀。④上机杂交：双击“Microseq”检测程序，选择标本放置的管口及检测位点后运行检测程序，待检测完成后仪器在结果栏自动给出检测结果的基因类型。⑤结果分析：PAI-1-675位点多态性分为5G/5G(野生型)、5G/4G(突变杂合型)、4G/4G(突变纯合型)。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。等位基因、基因型频率用%表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检验及PAI-1-675位点等位基因、基因型分布 本研究对收集到的汉族人群PAI-1基因启动子区-675 bp处的检测数据进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验，计算检验结果P=0.54，符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验，样本具有本区域群体代表性。武汉地区汉族人群PAI-1-675 4G、5G等位基因频率分别为56.72%和43.28%，4G/4G、4G/5G、5G/5G基因型频率分别为32.55%、48.34%、19.11%。

2.2 不同性别武汉地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因、基因型频率比较 结果见表1。由表1可知，不同性别之间的等位基因和基因型频率比较无统计学差异(P均>0.05)。

2.3 不同地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因、

表1 不同性别武汉地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因、基因型分布比较

基因型频率比较 结果见表2。由表2可知，武汉地区汉族人群4G等位基因频率低于广州地区，4G/4G基因型频率低于广州、长沙地区，4G/5G基因型频率高于广州、长沙地区，P均<0.01。

2.4 不同种族人群PAI-1-675位点等位基因、基因型频率比较 结果见表3。由表3可致，武汉汉族人4G等位基因频率高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、马其顿人、日本人、南非人；4G/5G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于马其顿人；P均<0.01。

表2 不同地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因、基因型分布比较

表3 不同种族人群PAI-1等位基因、基因型分布比较

3 讨论

VTE是多因素参与的常见病、多发病，病死率高。国外流行病学资料[16,17]显示，VTE年发病率为1/1 000～2/1 000，其高发病率给患者和国家带来了沉重的医疗负担。PAI-1通过特异性抑制血管纤溶酶原激活物(PA)来调节纤溶系统活性，若PAI-1-675位点发生突变，可能导致PA活性降低，进而导致血管内纤维蛋白凝块溶解降低，最终导致VTE发生[18]。

在遗传流行病学领域，基因型的群体变异、种族变异被认为是研究遗传因素和疾病关系的重要桥梁。由于PAI-1的基因多态性分布存在明显的性别、地区及种族差异，所以本研究对武汉地区1 533例汉族人群PAI-1-675位点进行基因分型，并比较了不同性别、地区及种族间PAI-1-675位点等位基因及基因型频数频率分布差异，旨在为VTE的流行病学研究提供遗传分子基础。本研究我们发现，武汉地区汉族人群PAI-1-675位点等位基因及基因型分布不具有性别差异，提示性别可能不是武汉汉族人PAI-1-675位点4G/5G多态性分布的影响因素。

本研究还将本文结果与既往研究数据进行比较，我们发现武汉汉族PAI-1-675位点4G等位基因频率显著低于广州，与青岛、石家庄、潍坊、北京、长沙相比无显著性差别。4G/4G基因型频率显著低于广州、长沙，与青岛、石家庄、潍坊、北京地区无显著性差异；4G/5G基因型频率显著高于广州、长沙，与青岛、石家庄、潍坊、北京地区无显著性差异。以上结果提示地区可能是PAI-1-675位点4G/5G多态性分布的影响因素，华中华北地区可能具有相似的PAI-1-675位点遗传背景，而华南地区PAI-1-675位点遗传多态性可能有自己的独特性。

由于我国幅员辽阔民族多样，导致遗传背景可能存在差别，又由于本研究所采用的样本量较大，有一定的代表性，因此我们选择以武汉汉族人代表中国人与其他种族进行比较。通过比较我们发现，武汉汉族人4G等位基因频率显著高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，与荷兰人、马其顿人无显著性差异；4G/4G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、马其顿人、日本人、南非人；4G/5G基因型频率高于加纳人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于马其顿人，与荷兰人无显著性差异。以上结果提示种族可能是PAI-1-675位点遗传多态性的影响因素。

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张耕(E-mail： 370924938@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.031

R968

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1002-266X(2017)31-0098-03

2017-03-13)