CCR7和D2-40在宫颈鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系①

宋亚男，宋继荣

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)

CCR7和D2-40在宫颈鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系①

宋亚男，宋继荣

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨在宫颈鳞癌中趋化因子受体7(CCR7)和D2-40的表达状况,二者与淋巴结转移的相关性。方法：使用免疫组化方法分别测定64例宫颈鳞癌(25例有淋巴结转移，39例无淋巴结转移)和30例正常宫颈中CCR7、D2-40的表达状况,淋巴管内皮细胞用D2-40染色，计数微淋巴管密度(MLVD)。 结果：CCR7和D2-40 标记的MLVD均在有盆腔淋巴结转移组中高表达，与无盆腔淋巴结转移组及正常宫颈组比较有显著差异，且CCR7和D2-40 标记的MLVD呈正相关。 结论：CCR7、D2-40高表达于有盆腔淋巴结转移的宫颈鳞癌患者,且两者为正相关。将CCR7结合D2-40检测目的就在于更精确的判断宫颈鳞癌淋巴结转移。

CCR7；D22-40；宫颈鳞癌；转移

女性恶性肿瘤排名第2位的是宫颈癌[1],宫颈癌的早期治疗效果较好,治疗效果较差的为中晚期,关系到其预后较为关键的要素为淋巴结转移。CC族趋化因子受体CCR7, 绝大多数在内皮细胞和免疫细胞的胞膜上表达,参与机体反应主要通过与其配体作用。近期，研究证明[2,3]肿瘤转移和CCR7与配体结合相关，因此大家把肿瘤淋巴结转移的原因聚焦在CCR7上。目前普遍认为D2-40为有代表性的标记淋巴管物质[4],在探究肿瘤淋巴管与肿瘤生物学相关性方面被普遍运用[5],对肿瘤组织微淋巴管形成、癌细胞是否出现浸润和转移的判定有很大帮助。在宫颈癌病例中,鳞癌病例所占比例为75%～80%,本课题探讨在宫颈鳞癌中趋化因子受体7和D2-40的表达状况,二者与淋巴结转移的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料

实验组织均来自2014-01～2016-10在佳木斯大学附属第一医院妇产科行手术治疗后的保存蜡块，其中宫颈鳞癌组织64例(包括有盆腔淋巴结转移25例，无盆腔淋巴结转移39例),30例正常宫颈组织。

入组标准：(1)病理医师需对切片进行反复确诊；(2)患者有完整病历资料、组织切片及存档蜡块；(3)患者术前未行抗肿瘤相关治疗；(4)患者除外其他恶性肿瘤疾病。

1.2 主要试剂

鼠抗人CCR7单克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。鼠抗人D2-40免疫组织化学单克隆抗体、即用型快捷免疫组织化学Max Vision 检测试剂盒、DAB 显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。

1.3 方法

CCR7和D2-40均选用柠檬酸缓冲液(pH=6.0)高温高压抗原修复法对常规组织切片进行抗原修复,采用免疫组化染色，具体实验方法参考试剂盒标注。按1∶100浓度稀释CCR7。已知CCR7阳性组织及淋巴管瘤切片分别作CCR7和D2-40阳性对照,PBS取代一抗作阴性对照。DAB显色,复染，封片,再用光镜察看。

1.4 结果判定

CCR7阳性阴性的判定方法: 细胞膜和(或)细胞质显现棕黄色记为着色。(1) 依照着色细胞占细胞总数比例评分,3分：≥50%；2分：10%～50%；1分：<10%；0分：无阳性细胞。(2)依照细胞着色强度评分,3分：重度染色(棕褐色)；2分：中度染色(棕黄色)；1分：轻度染色(浅黄色)；0分：无染色。两种评分<3分记作阴性(-),≥3分记作阳性(+) 。D2-40结果判定方法: 首先低倍镜(×100)下察看正常组织、瘤周及癌瘤内细胞着色最密集区域,再高倍镜(×400)下计算淋巴管数目,每个阳性染色的单个微小脉管、内皮细胞簇和内皮细胞均算为1个微淋巴管。各例取3个视野,算其平均值。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 CCR7、 D2-40标记的MLVD在正常宫颈和宫颈鳞癌中的表达

CCR7在两种组织中存在阳性表达，较少表达于成熟血管外周，较多表达于不成熟的血管外周。D2-40在两种组织中存在阳性表达，D2-40在微淋巴内皮细胞的胞质内染色，呈棕黄色至棕褐色，染色区域主要集中在瘤周淋巴管上皮细胞，瘤间质内淋巴管稀疏染色。CCR7和D2-40均在宫颈鳞癌组织中高表达，与正常宫颈组织比较有显著差异，见表1。

表1 CCR7、 D2-40标记的MLVD在正常 宫颈和宫颈鳞癌中的表达

2.2 CCR7、 D2-40标记的MLVD在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达

CCR7和D2-40均在有淋巴结转移组中高表达，与无淋巴结转移组比较有显著差异，见表2。

表2 CCR7、 D2-40标记的MLVD在有淋巴结 转移组和无淋巴结转移组中的表达

2.3 宫颈鳞癌中CCR7与MLVD表达的相关性

D2-40标记的MLVD计数在CCR7阴性组(13.87±5.22)低于阳性组(17.77±5.17),差别有统计学意义(P<0.05)。根据Spearman相关分析得出CCR7和MLVD的关系为正相关(rs=0.444，P<0.05)。

3 讨论

细胞的迁移主要依靠趋化因子发挥作用,细胞从趋化因子低浓度方向向高浓度方向移动,趋化因子受体在靶细胞表面有选择性表达。CCR7属于CC趋化因子受体亚家族的成员,功能性表达于多种组织和细胞类型, 其在机体发挥作用是通过结合相应配体CCL19、CCL21[6]，特别是在肿瘤生长和转移相关研究中占据重要地位。大部分集中在外周免疫器官或组织的CCL21为CCR7的重要配体，CCL21发挥趋化作用的对象为大量免疫细胞。肿瘤细胞表面CCR7与淋巴结T细胞区CCL21结合, 诱发细胞内机动蛋白聚合，此过程促进伪足形成，伪足为肿瘤细胞发生浸润和转移至关重要的条件，导致肿瘤细胞沿淋巴结发生运动浸润继而转移到远处。在宫颈癌中,Kodama[7]等发现在宫颈鳞状上皮细胞癌中CCR7高表达,并且和淋巴管或淋巴结转移有着紧密的联系。D2-40作为单克隆抗体,能够忽略血管内皮细胞，而精确的标识淋巴管内皮细胞[8],可应用在肿瘤的淋巴管内皮,在肿瘤组织微淋巴管形成、判定癌细胞发生转移方面有很大帮助。国内研究示[9]D2-40抗体测定肿瘤的淋巴管具备特异性强和敏感度高的特点,有助于预测淋巴结转移及预后,在宫颈鳞癌治疗方面发挥至关重要的作用。文献报道, D2-40水平在恶性肿瘤(如肺癌、口腔癌、结直肠癌、胃癌等)中和淋巴结转移呈正相关。CCR7通过上调VEGF-C(淋巴管生成因子)使肿瘤淋巴管增生,通过与相应受体特异性结合,活化酪氨酸激酶传导通路,促进肿瘤淋巴管形成,目前标识淋巴管具有特异性的物质为D2-40,故用此计算微淋巴管密度。本研究显示: CCR7、D2-40高表达于有盆腔淋巴结转移的宫颈鳞癌患者,且两者为正相关。直接蔓延及淋巴转移为宫颈癌的重要转移方式,浸润与转移是造成患者死亡的主要原因[10]，因此宫颈癌的淋巴结转移更得到大家的重视。CCR7、D2-40作为评价宫颈鳞癌淋巴结转移潜能的标志物,联合监测为淋巴结转移提供更为有效的指标,同时对临床治疗方案选择起指导作用,为宫颈癌医治及抑制淋巴结转移提供充足的参考资料。

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宋亚男(1990～)女，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生。

宋继荣(1969～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。E-mail:786577037@qq.com。

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1008-0104(2017)04-0164-02

2016-12-19)