SRC-3、MMP-9在乳腺癌中的表达及临床意义①

汪洪盛，李 壮，曹玉杰，周海玲，田 煜

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

SRC-3、MMP-9在乳腺癌中的表达及临床意义①

汪洪盛，李 壮，曹玉杰，周海玲，田 煜

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：观察乳腺癌组织中类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况，探讨并分析其与临床病理参数的关系及其意义。方法：选取手术切除乳腺癌标本45例作为阳性实验组；选择45例乳腺癌旁正常组织作为对照组。采用免疫组织化学SP法检测SRC-3、MMP-9在实验组和对照组中的表达情况。结果：SRC-3在实验组和对照组中的切片阳性染色率各为62.2%，17.8%。差异具有统计学意义(P<0.05)。且与乳腺癌组织分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子有关(P<0.05)。与年龄大小、月经状况及肿块大小无关(P>0.05)；MMP-9在实验组和对照组中的切片阳性染色率各为66.7%，28.9%。差异具有统计学意义(P<0.05)。同时与乳腺癌组织分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子有关(P<0.05)。与年龄、是否绝经及肿块大小无关(P>0.05)。SRC-3与MMP-9二者为正相关关系(r=0.324)。结论：高表达SRC-3及高表达MMP-9可能与乳腺癌的发生、进展紧密关联，并且SRC-3可能促进MMP-9降解细胞外基质和基底膜，最终导致乳腺癌的浸润及转移。

乳腺癌;SRC-3;MMP-9;免疫组织化学(SP)

目前在我国乳腺癌发病率逐年升高[1]。对恶性肿瘤来讲，会经历从肿瘤形成到逐步发展再到转移这三个阶段。在其整个过程中，至少有两个以上基因发生变化。它们所具功能存在差异，因此发挥的作用也不同，但从三维的角度来看，它们彼此又能够相互协调。倘若我们尽早发现、尽早治疗必然能使患者的存活率提高。因此，医学界致力于寻找与乳腺癌相关的影响因子。类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)作为新的原癌基因，在众多肿瘤进展过程中其蛋白高表达，其在许多生物学功能方面具有重要作用[2]。在所有基质金属蛋白酶类(MMPs)当中，基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是分子量最大的一种，也叫W型胶原酶，是癌基因中的一种。新近研究报告，该胶原酶蛋白是调控多数癌细胞增长繁殖的关键因素。本次实验通过采用免疫组化(SP)研究，来检测SRC-3与MMP-9两因子在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达情况，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取佳木斯大学附属第一医院肿瘤科2015-03～2016-08乳腺癌45例，包括乳腺癌组织、癌旁正常组织以及手术切除的淋巴结。所选标本来源都是女性，年龄29～72岁。绝经情况、组织学分化程度及淋巴结转移情况(见表2)。根据2015年NCCN乳腺癌临床实践指南TNM分期法，对所选标本分期(见表2)。患者术前都未经过任何治疗。对照组选取癌旁正常组织45例(距癌组织超过5cm，病理确认)。所有实验资料都经过两位病理科资深医师多次核对。

1.2 主要试剂

即用型鼠抗MMP-9(56-2A4)抗体3mL(无需修复)。兔抗人SRC-3多克隆抗体，配合使用福州迈新SP试剂盒，DAB显色剂，PBS缓冲液。

1.3 免疫组化SP法

采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法，所有步骤都服从SP试剂盒操作申明执行，阴性对照选取磷酸盐缓冲液作为一抗。选择已知乳腺癌中SRC-3，MMP-9切片深染作为阳性对比。

1.4 结果处理

SRC-3主要是细胞核染色在高倍镜下可观察到颜色呈深棕黄色。MMP-9则主要是细胞质深染。在高倍镜下进行观察癌细胞数量，所得染色数量占的比例，可计为不超过5%为0分；6%～25%为1分；26%～50%为2分；超过51%为3分。再观察染色深浅：几乎不染色为0分；浅染为1分；中强染为2分；深棕染3分。综合上述两项分数得出不超过3分当作阴性(-)，超过4分当作阳性(+)。

1.5 统计学方法

采用SPSS18.0软件进行所得实验结果进行处理。计数资料均采取卡方检验。相关性分析通过采用Spearman等级相关分析法,检验标准为α=0.05。

2 结果

2.1 SRC-3、MMP-9在实验组和对照组中的表达

SRC-3主要在细胞核上表达阳性(少数胞浆出现较浅染色)，其在实验组和对照组的切片阳性染色率各为62.2%、17.8%。组间差异有统计学意义(χ2=18.529,P<0.05)。MMP-9主要在细胞质上表达阳性(少数胞核较浅染色)，其在实验组和对照组阳性率分各为66.7%、28.9%。组间差异有统计学意义(χ2=12.870，P<0.05)。见表1。

表1 乳腺癌组织及癌旁组织中SRC-3 及MMP-9的表达

*χ2=18.529，P<0.001；**χ2=12.870，P=0.001。

2.2 SRC-3、MMP-9表达与乳腺癌临床病理参数的联系

根据表2所示，在乳腺癌组织中SRC-3的表达与组织分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子2有关(P<0.05)，其中与乳腺癌的分化程度、雌激素受体及孕激素受体成负相关(r分别为-0.633、-0.337、-0.362)。但与年龄、肿块直径、是否绝经无关(P>0.05)。同样在乳腺癌组织中MMP-9的表达与分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子2有关(P<0.05)，其中与乳腺癌的分化程度、雌激素及孕激素受体也成负相关(r分别为-0.630、-0.402、-0.329)。但与患者年龄，是否绝经，肿物直径无关(P>0.05)。见表2。

2.3 乳腺癌组织中SRC-3及MMP-9的表达相关性运用Spearman方法计算，分析SRC-3、MMP-9 二者在乳腺癌中的表达的相关性，两者均在乳腺癌组织中切片阳性染色率高，但在对照组中染色率低。结果显示SRC-3与MMP-9表达呈正相关性(r=0.421)差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 乳腺癌组织中SRC-3及MMP-9的表达相关性

3 讨论

类固醇受体辅助活化因子-3是P160类固醇受体共激活因子(SRC)家族的成员，又名AIB1、ACTR、TRAM1、NCoA3、RAC-3,以及P/CIP。其同类成员为SRC-1、SRC-2(TIF2或GRIP1)。辅活化因子3与核激素受体如雌激素和孕激素受体和其他转录因子如PEA3，E2F1，和AP-1作为转录共激活因子。在正常细胞中，通常存在限制浓度。它的激活还包括磷酸化、泛素化、甲基化修饰调控，和异构化等方式。这些修饰是受类固醇激素，生长因子和细胞因子调控同时也与细胞周期的进展相联系。Haugan等[3]研究AIB1 mRNA在乳腺癌中过度表达，而在正常乳腺组织是低表达，两者比较相差明显。本次试验数据分析也说明辅活化因子3在乳腺癌一组当中的切片阳性染色率为62.2%，而癌旁组织当中这一数据仅为17.8%，显然前者高于后者，这意味着SRC-3可能参与了乳腺上皮的恶变。结合研究数据分析，患者中辅活化因子3表达高的存在组织学分级低、临床分期高，发生较多淋巴结转移，意味着在乳腺癌当中辅活化因子3的过表达在很大程度上影响甚至形成恶性生物学行为，还可能有不良的预后。再者在HER-2阳性一组中SRC-3为高表达，它和HER-2的表达是正相关关系(r=0.527)，已有研究得出结论，在乳腺肿瘤细胞中如果人类表皮生长因子2出现过表达，肿瘤细胞就会活跃增殖，那么就更容易导致细胞的转移浸润。因此，对于肿瘤的恶性程度以及预后的好差，SRC-3可以当作一种标准。

目前普遍认为，在促进癌细胞的增殖和侵袭方面，基质金属蛋白酶类(MMPs)是已知的因素。这些酶类能敲除致密的细胞外基质(ECM)分子从而为肿瘤细胞运动创造空间。与此同时它们并且能产生与ECM或者细胞表面相关的某些生长因子。研究发现，乳腺癌组织中 MMP-9 的阳性率与正常或良性病变组织对比显著升高，但其与乳腺癌临床病理参数的关系的相关研究却不尽相同。这项研究我们数据表明，在乳腺癌一组实验中蛋白酶9切片阳性染色率达到66.7%，然而在正常组织中却是28.9%，前后两者相差较明显，且与组织学分级、淋巴结转移、临床分期、雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子有关(P<0.05)，而与年龄、肿块直径及是否绝经无关(P>0.05)。这些结果表明蛋白酶9在乳腺癌的向外扩散过程中是不可或缺的，并且在高表达的患者中具有差的预后。相关研究发现[4]，AIB1和PEA3形成的蛋白复合物可共激活MMP-2和MMP-9的启动子，最终发生癌细胞的发生和扩散。按照辅活化因子3及蛋白酶9的两者相关性分析数据说明，癌细胞中辅活化因子3的表达与蛋白酶9呈正相关关系(r=0.421，P=0.04)，提示SRC-3可能通过多种渠道帮助MMP-9降解基底膜及细胞外基质，从而促进癌细胞突破基底膜向外侵袭。虽然在调控乳腺癌转移中确切作用和分子机制是未知的，但我们据此可以推测，作为乳腺癌的一个潜在的干预靶点控制的PEA3 /SRC-3的途径可抑制MMP-9的表达，对乳腺肿瘤的转移与复发的预防都具有重要的现实意义。

[1]王新，范立君.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义[J].黑龙江医药科学，2014，37(6):89-91

[2]廉奇鑫，苏俊强.FBXW7和SRC-3在乳腺癌中的表达及其意义[J].黑龙江医药科学，2015，38(3):72-74

[3]Haugan Moi LL,Hauglid Flageng M,Gandini S,et al．Effect of low-dose tamoxifen on steroid receptor coactivator 3/amplified in breast cancer 1 in normal and malignant human breast tissue[J].Clin Cancer Res,2010,16(7):2176-2186

[4]Li Q,Lan L,Redmond A,et al.The AIB1 oncogene promotes breast cancer metastasis by activation of PEA3-mediated matrix metalloproteinase 2(MMP2)and MMP9 expression[J].Mol Cell Biol,2008,28(19):5937-5950

汪洪盛(1989～)男,江苏盐城人，在读硕士研究生。

李壮(1963～)男，黑龙江佳木斯人，学士，副教授，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail:1260349026@ qq.com。

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1008-0104(2017)04-0125-02

2016-12-09)