S100A8在口腔鳞癌中的水平检测及其临床意义

程晴洁，马 洪

（1.贵州医科大学，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，贵州 贵

阳 550004）

S100A8在口腔鳞癌中的水平检测及其临床意义

程晴洁1，马 洪2

（1.贵州医科大学，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，贵州 贵

阳 550004）

采用q-PCR方法检测S100A8mRNA在正常口腔组织40例及口腔鳞癌组织40例中的水平。结果显示40例口腔鳞癌组织中S100A8mRNA与正常口腔组织比较表达明显增高，且表达水平与口腔鳞癌组织病理分级密切相关，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示S100A8可能参与OSCC的发生与发展。

S100A8；mRNA；口腔鳞癌；q-PCR

近年来在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）发病机制的研究方面，随着实验技术的进步，从基因（DNA）和基因转录（mRNA）水平开始进行了大量的研究。现已有研究报道S100A8在众多恶性肿瘤中表达升高。同时课题组前期研究发现OSCC患者外周血S100A8蛋白与正常随机对照组相较呈高表达[1-2]。本文旨在通过使用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，q-PCR）检测OSCC与正常口腔黏膜组织中S100A8mRNA表达水平，分析S100A8mRNA表达与OSCC临床病理特征的关系，探讨S100A8在口腔鳞癌发生发展过程中的作用及意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年～2016年收治的外科手术切除的后经病理确诊的口腔鳞癌组织40例，其中高分化25例，中低分化15例。术前均未接受其他治疗。对照组口腔正常组织40例，均取自外伤、唇腭裂等手术时去除的口腔组织。试剂：Dynabeads mRNA DIRECTTMKit试剂盒（Dynal公司）；逆转录试剂盒（德国 Roche公司）；LightCycler®480 SYBR Green I Master（德国 Roche公司）

1.2 方法

q-PCR检测组织中S100A8的mRNA表达水平按mRNA提取试剂盒说明书，提取组织中mRNA约13 μL。按逆转录合成试剂盒说明书配置7.5 μL cDNA综合体系，加入提取的13 μL mRNA经热循环逆转录得到双链cDNA模板20 μL。SYBR Green染料5.0 μL与6.0 μL cDNA 模板中加上下游引物（引物由上海生工生物公司设计合成，碱基序列见表1）混合物4.0 μL进行实时荧光定量PCR反应。RT-PCR反应条件：95℃ 10min，95℃ 10s，65℃ 6s，72℃6s，76℃，1s；重复循环2～5步7次，每循环一次第3步降温0.6℃；95℃ 10s，60℃ 6s，72℃ 6s，76℃，1s；重复循环6～9步54次；95℃ 10s，65℃ 10s。使用2-ΔΔCT法对数据进行

分析。见表1。

表1 q-PCR引物的序列

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 S100A8mRNA在正常口腔粘膜组织和OSCC组织中表达水平比较

q-PCR结果显示：S100A8在OSCC组、对照组中均表达。与对照组作比较，S100A8 mRNA在OSCC组表达增高，差异显著，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 S100A8mRNA在OSCC、正常组织中的表达（±s）

表2 S100A8mRNA在OSCC、正常组织中的表达（±s）

组别 n S100A8/β-actin口腔鳞癌 40 1.24±0.16正常口腔黏膜 40 1.58±0.04 F 53.96 P 0.000

2.2 S100A8mRNA的表达与OSCC临床病理特征相关性分析

OSCC组中S100A8 mRNA表达与患者的年龄、性别无关，但与病理分化程度显著相关。且发现高分化组表达量明显低于中低分化组。见表3。

表3 S100A8mRNA的表达与OSCC临床病理特征的关系（±s）

表3 S100A8mRNA的表达与OSCC临床病理特征的关系（±s）

临床病理特征 例数 log T/N P值年龄 ≥60岁 13 0.61±0.41 ＞0.05＜60岁 27 0.54±0.40性别 男 29 0.63±0.41 ＞0.05女11 0.40±0.35病理分级 高分化 25 0.26±0.41 ＜0.01中低分化 15 1.07±0.11

3 讨 论

据国内外的相关文献报道，头颈部的鳞状细胞癌的病例数每年新增约50多万例。目前经治疗后，患者的5年生存率仅为60%。因此迫切需要寻找OSCC肿瘤分子标志物，以便为早期诊断恶性肿瘤提供条件，从而提高患者的生存率及愈后。

S100A8蛋白在肿瘤中的作用已经在诸多肿瘤中得到了证实，并且可以充当在某些类型的癌症的预后标志物[3-4]。研究发现在癌细胞中，S100A8通过调节细胞分化和粘附细胞外基质，以抑制细胞周期进展、增长和迁徙侵袭[5-6]。Mie Ichikawa[7]的研究指出指出糖基化终末产物受体和S100A8在肿瘤细胞中协同表达升高并且共同激活肿瘤下流信号通路，进而导致细胞增殖。这与课题组研究结果一致。S100A8是与OSCC病理分级极显著相关的上调基因，提示它可能为OSCC肿瘤分子标志物之一，并在OSCC发生发展过程中具有潜在的生物学意义。

综上所述，S100A8表达水平可能对口腔鳞癌有预警及诊断的作用，并可获得较高的诊断效能，有望成为临床上筛选及诊断口腔鳞癌的肿瘤分子标志物。

[1] 马 洪,王金生,潘 卫,等.比较蛋白组学在口腔鳞癌患者及健康人血清的初步研究[J].实用口腔医学杂志,2012,28(1):98-101.

[2] 马 洪,赵天江,王金生,等.口腔鳞癌肿瘤标记物血清蛋白组学的初步研究[J].重庆医学,2012,41(8):766-768.

[3] Becker A, Große Hokamp N,Zenker S, et al. Optical in vivo imaging of the alarmin S100A9 in tumor lesions allows for estimation of the individual malignant potential by evaluation of tumor-host cell interaction[J].J Nucl Med,2015,56(3):450-456.

[4] Tidehag V,Hammarsten P,Egevad L,et al.High density of S100A9 positive infammatory cells in prostate cancer stroma is associated with poor outcome[J].Eur J Cancer,2014,50(10):1829-1835.

[5] Cormier K,Harquail J,Ouellette RJ,et al.Intracellular expression of inflammatory proteins S100A8 and S100A9 leads to epithelial-mesenchymal transition and attenuated aggressivity of breast cancer cells[J].Anti-cancer agents in medicinal chemistry,2014,14(1):35-45.

[6] Choi JH,Shin NR,Moon HJ, et al.Identification of S100A8 and S100A9 as negative regulators for lymph node metastasis of gastric adenocarcinoma[J].Histology and histopatholo gy,2012,27(11):1439–1448.

[7] Mie Ichikawa,Roy Williams,Ling Wang,et al.S100A8/A9 activate key genes and pathways in colon tumor progression[J].Mol Cancer Res,2011,9(2):133–148.

本文编辑：赵小龙

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ISSN.2095-8242.2017.23.4468.02