油橄榄叶提取物生物活性研究进展

王碧霞

摘要：指出了油橄榄叶是地中海人用于治疗某些疾病最传统的植物茶之一。油橄榄叶提取物中富含橄榄苦苷、羟基酪醇、黄酮等酚类化合物，其中橄榄苦苷具有强抗氧化、抗高血压、降血糖、降胆固醇和保护心脏等功效。对油橄榄叶提取物生物活性的研究，目前主要集中在抗氧化、抗菌、抗动脉粥样硬化和低胆固醇、低血糖以及酚类化合物成分方面，其酚类化合物在医药和保健方面广阔的运用前景已引起人们的广泛关注。因此，提出了油橄榄叶作为一种丰富又廉价的原材料，应鼓励将其高附加值作为抗氧化剂的来源进行工业生产，应用于药品、化妆品、保健品和功能性食品等方面。

关键词：油橄榄叶；酚类化合物；抗菌成分；抗氧化活性

中图分类号：R284

文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2017）14-0278-05

1 引言

油橄榄（Olea europaea L.）为木犀科（Oleaceae）木犀榄属（Olea）常绿乔木，又名洋橄榄、欧橄榄、齐墩果，是亚热带的重要经济林木和地中海生产橄榄油的重要来源[1]，在我国油橄榄主要分布在甘肃、广东、广西、云南、四川等省区。地中海国家的油橄榄栽培、橄榄油生产及化合物药用已有几千年历史，油橄榄叶的酚类化合物在醫药和保健方面的运用在近几十年里也日益增多。对油橄榄叶和油橄榄衍生物提取的产品一般被称为“油橄榄副产品”[2]，每年因修枝、自然落叶和加工业而产生大量的副产品和残留物，但大多数都被丢弃或焚烧，许多橄榄油生产商甚至向农户们收取油橄榄叶的处理费用，从而造成大量的资源浪费和生态环境的严重破坏[3]。实际上，进行油橄榄叶加工提取时仅需其废弃物的10%[4]。因此，油橄榄叶是一种丰富又廉价的原材料，可作为具有高附加值的产品进行开发利用。

油橄榄叶含有丰富的酚类化合物，在医药和保健方面的广泛运用已成为国内外的研究热点。研究显示，酚类化合物在动物和人体中具有强抗氧化力和增强机体抵抗力[5，6]，如降血压[7，8]、降胆固醇[9]、镇痛[10]、消炎和减肥[11]。油橄榄叶提取物中酚类化合物主要是羟基酪醇、橄榄苦苷、毛蕊花糖苷和木犀草苷[12]。通过查阅国内外文献，对油橄榄叶的益处及提取物生物活性进行了归纳总结，不仅为油橄榄叶的开发利用提供理论依据，同时也为医药和保健方面的科研工作者提供参考。

2 油橄榄叶提取物的多酚类化合物

油橄榄树不同部位的酚类化合物含量和成分具有差异，如在叶、果实和种子中均不一致，化学成分主要取决于品种、树龄、温度、水分和土壤等条件[12～15]，且在果实和叶片不同生长期的酚类成分也差异显著[15，16]。油橄榄叶中酚类化合物主要有五类[17]：橄榄苦苷、类黄酮、黄酮、黄烷醇和酚类替代物。也有文献报道，油橄榄叶酚类化合物含有如芦丁、木犀草苷、木犀草素和芹菜素[18]。油橄榄叶中含量最高的化合物是橄榄苦苷，其次是羟基酪醇、黄酮（木犀草素、芹菜素和毛蕊花苷）。从表1可以看出不同品种提取物的变化范围在30.80～57.20 mg/g，其中总酚含量的变化为73.05～144.19 mg/g（p < 0.05），总黄酮含量的变化为56.75～125.64 mg/g（p < 0.05）[19]。

注：数据来源于文献[19] 对油橄榄叶酚类成分的研究已很深入，如Pereira等[20]发现油橄榄叶水提取物中酚类化合物的含量高于水和甲醇以及混合品种的提取物。油橄榄树叶不同部位的提取物具有不同的抗氧化能力和清除能力（如橄榄苦苷含量在0.005%～0.12%，而油橄榄叶中则在1%～14%），这些性质皆归因于油橄榄叶的酚类化合物[21]。另外，油橄榄叶提取物产生四环和五环三萜烯、甾醇、赤藓醇、芜香醇和齐墩果酸[21]。Somova等[22]报道了非洲橄榄叶提取物主要成分中齐墩果醇混合物酸及其异构体熊果酸的比例是1∶1。研究人员还发现希腊和欧洲油橄榄叶齐墩果酸的含量是0.71%和2.47%，而熊果酸却不确定[23]。

橄榄苦苷是一种苦味化合物，具有抗菌消炎的强抗氧化特性[24]。橄榄苦苷的主要降解产物是羟基酪醇，即橄榄苦苷浓度降低则羟基酪醇浓度增加；在果实成熟期或油橄榄果加工过程中还发生化学和酶反应[25]。橄榄苦苷已显示出对自由基具有明显的抗氧化作用，主要是橄榄苦苷的化学结构具有强抗氧化性的邻儿茶酚结构，防止自由基形成，催化自由基产生反应[26]，同时还抑制部分炎症酶，如脂氧合酶[27]。橄榄苦苷和羟基酪醇都已被证明能清除超氧阴离子以及抑制中性粒细胞呼吸和自由基次氯酸衍生的爆发[28]。表2显示黄酮是橄榄叶多酚类化合物中分布最常见和最广泛的成分[19，29，30]。该基团的成员通过三个碳连接形成两个芳环，组成氧化杂环[31]。

橄榄苦苷的苦味是强效抗氧化剂，如Benavente-Garcia等[12]以鉴定油橄榄叶中主要酚类化合物成分为目的，阐述了这些化合物的抗氧化活性差异，并通过与白细胞的相互作用，发现羟基酪醇、橄榄苦苷、咖啡酸和酪醇能够防止活性氧的产生却没有毒副作用。橄榄苦苷与其代谢物羟基酪醇的结构不同（儿茶酚组），其抗氧化能力和清除能力也不同。油橄榄叶茶具有抗氧化的效果，能够防止DPPH和过氧化氢自由基的产生[32]，其提取物还可以在人体内获得氧化应激及在糖尿病上的酶促和非酶促氧化反应[33]。为了综合评价油橄榄叶提取物的体外抗氧化活性，测量了其提取物的DPPH自由基清除活性，与BHT的IC50值（17.02 μg/mL）比较后发现，油橄榄叶提取物能够清除自由基，它们具有比BHT更强的抗氧化能力。的确，部分品种还表现出比BHT的活性高，比如Chemlali（7.90 μg/mL）、Rosicola（0.88 μg/mL）、Limouni（12.25 μg/mL）、Chetoui（15.09 μg/mL）、Meskid（15.24 μg/mL）、Lucques（16.10 μg/mL）[33]。油橄榄叶较强的抗氧化能力可以归因于它们较高的总多酚含量，且所有种类叶提取物的主要化合物均是橄榄苦苷[33]。Bouaziz等[34]的研究也表明，随着油橄榄叶和它们水解产物的提高，即丰富了油橄榄的提炼和果壳油，还因叶提取物中酚类成分的抗氧化活性而显著抑制了氧化的加剧。

4 油橄榄叶提取物的生物活性

研究表明，油橄榄叶提取物已应用于体外和体内，其内容为抗氧化活性[8，35，36]，防辐射效应[37]，对白血病细胞的抗增殖作用，诱导细胞凋亡[38]、细胞毒活性，对抗人乳腺癌细胞[39]、HIV病毒效应、真菌活性[10]，以及减轻糖尿病神经性疼痛[33，40]，并改善庆大霉素肾毒性[33]。也有文献也综述了抗氧化、抗动脉粥样硬化、降血糖和心脏保护等生物活性[36，41]。

橄榄苦苷是油橄榄叶中多酚类裂环烯醚萜的主要成分，通过降低细胞外信号调节激酶在肝细胞中的激活以降低游离脂肪酸诱导的脂肪生成[8]。橄榄苦苷是由羟基酪醇和芥酸组成的脂类，女贞子苷（ligstroside）是由酪醇和芥酸组成的脂类[17，30]。此外，它的抗氧化性是作用于肠粘膜损伤诱导[33]，已证明橄榄苦苷具有强抗氧能力和强抗炎特性。橄榄苦苷能防止自由基形成可能是具有螯合金属离子（如铜和铁）的能力，从而催化自由基产生反应[13]，并抑制部分炎症酶，但不影响环氧合酶通路[11]。还有研究表明，橄榄苦苷有助于保护膜免于脂质氧化以防止心脏病[41]，有助于影响冠状动脉血管扩张并阻止抗心律失常[36]，有助于改善脂质代谢、保护酶和预防癌症中的高血压细胞死亡以及抗病毒的特性[7，11]。

羥基酪醇是橄榄苦苷的降解产物，也具有橄榄苦苷的部分生物活性，如抗菌、降血糖、降血脂、低胆固醇、抗氧化和清除自由基[9，28]。在新鲜油橄榄叶（Ortice品种）酚类提取物中，羟基酪醇含量为0.2g/100g，得率约为33.3%（w/w）[42]。与Bouaziz和Sayadi报道的含量相近[43]。羟基酪醇是橄榄苦苷的衍生物，与橄榄苦苷的作用相似，能改善心脏疾病、肿瘤疾病及保护动脉粥样硬化并预防糖尿病神经性病变[27]。油橄榄叶提取物中裂环烯醚萜衍生物（oleuropeoside）具有舒张、放松血管的特性。

目前，人们对食品中含有生物活性的天然抗氧化剂的关注越来越多，水果和蔬菜富含保护心血管的部分有效成分，能预防疾病和某些癌症，且某些癌症已部分归因于抗氧化剂的作用[41]。橄榄苦苷在肥胖症中的作用也有研究，尤其是从生理和分子的途径上能根本性改变肥胖患者的能量代谢。研究表明，油橄榄叶提取物的保健作用与抗氧化特性紧密相关，这是由于一些酚类化合物及其衍生物的生物活性，如橄榄苦苷、毛蕊花苷、女贞子苷、酪醇和羟基酪醇[36～38]。

油橄榄叶提取物还有助于保护皮肤的黄酮类和齐墩果酸，其组分刺激结缔组织并使其正常化，增强皮肤健康，防止其老化。油橄榄叶富含酚类化合物，特别是欧洲油茶，包括黄酮、黄酮醇、儿茶素和酚酸类。近年来对植物多酚的测定是研究热点，因为这些化合物含有天然抗氧化活性。表3和表4显示了油橄榄叶的酚类化合物[24]，与确定条件下的Trolox相比，橄榄苦苷的抗氧化活性与它结构中的羟基酪醇含量有关，乙醇提取物对自由基的抑制最强，甲醇提取物次之（表4）。 另外，油橄榄叶的正丙醇提取物差异显著（p <0.05），其抗氧化活性最低[44]。

4.1 油橄榄叶多酚对低胆固醇血症的影响

地中海人们心血管疾病的发病率很少，也与油橄榄叶和橄榄油的酚类化合物有关，作为氧化剂能将身体内的自由基减少到最低。油橄榄叶中多酚的脂质物起着重要作用，如已被报道的总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）和甘油三酯（TG）[7]，这种减少略低于非诺贝特和较好的抗甘油三酯剂[45]。应用富含酚类化合物的提取物能够恢复脂质谱，尤其是能够接受橄榄苦苷和羟基酪醇浓度为16mg/kg的体重，表明油橄榄叶提取物富含的橄榄苦苷和羟基酪醇可以显著改善高胆固醇血症和高血糖[9]。

众所周知，油橄榄叶是传统的抗糖尿病药和抗高血压草药，也被用作治疗糖尿病性高血糖、高血压和感染性疾病的药用植物，在欧洲还被公认为是糖尿病和高血压的传统补救措施。在糖尿病中橄榄苦苷的低血糖效应有两种机制可以解释：①潜在影响葡萄糖诱导胰岛素释放，②增加外周摄取葡萄糖效果[33]。另外，橄榄苦苷对糖尿病及并发症的部分影响是源自于其抗氧化活性[19]，在糖尿病家兔中发现橄榄苦苷对低血糖和抗氧化的作用 [33]。根据这些结果，橄榄苦苷可能有效抑制了糖尿病诱导的高血糖症和氧化应激，同时还表明橄榄苦苷的应用可能是有助于预防糖尿病并发症相关的氧化应激。Komaki等人[46]通过油橄榄叶提取物研究了糖尿病大鼠的餐后血糖，结果表明，木犀草素和齐墩果酸作用后，餐后血糖受到抑制，糖尿病大鼠增加，油橄榄叶中的橄榄苦苷加速了细胞对葡萄糖的摄取。此外，部分低血糖效果应归因于橄榄苦苷的抗氧化能力[33]。Jemai等人[9]评估了油橄榄叶提取物中橄榄苦苷和羟基酪醇作用在糖尿病小鼠中的浓度效果，其体重分别为16和8 mg/kg。

4.3 油橄榄叶的抗动脉粥样硬化效果

地中海人们心脏病发病率较低，与饮食中的油橄榄叶和橄榄油的酚类化合物有密切关系。因此，这些抗氧化剂通过清除自由基防止食物氧化的有害影响，从而抑制氧化和延迟动脉粥样硬化[47]。欧洲油橄榄叶中提取物对心血管的作用也已被全面研究，起主要作用的主要成分是橄榄苦苷和油酸[48]，而作用于舒张血管和起缓解作用则是提取物中的裂环衍生物（oleuropeoside）和酚类化合物。

经过定量分析后发现，油橄榄叶中存在酚类化合物的单体且已被鉴定。但大多数研究油橄榄叶提取物的抗菌活性则是从以下几个方面[19， 36，37，42，49]：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌（Gram +）、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌（革兰氏）细菌、白色假丝酵母（C.albicans）和新型隐球菌提取物，测试这些细菌和真菌的抑菌效果显示，广谱抗菌活性取决于油橄榄叶提取物的浓度。在不同浓度下，根据微生物生长速率的大小，其抗菌能力的顺序为：蜡状芽孢杆菌～白色念珠菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌> C.新型隐球菌？肺炎克雷伯菌？铜绿假单胞菌>枯草芽孢杆菌。蜡状芽孢杆菌（革兰氏阳性）和白色念珠菌（真菌），最敏感的微生物，呈现IC25值低于1 mg/mL [19]。羟基酪醇和橄榄苦苷属于其他酚类化合物已被证明，可抑制或延迟几种人体肠道或呼吸道病原体（即嗜血杆菌）的生长速率，如流感嗜血杆菌、粘膜炎莫拉菌、伤寒沙门氏菌、弧菌副溶血菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌[49]。以前研究的关于油橄榄叶提取物中抗菌组合的稀少和抗真菌作用，与Markin等人报道的相一致[50]。

5 结论

油橄榄树和橄榄油加工产生大量的叶被认为是富含酚的副产物。酚类化合物定性和定量的变化，取决于如下几个因素：水分、盐分、营养成分、地理位置、年份和气候条件。 在过去十年里，油橄榄叶中丰富的酚类化合物对健康的应用，具有广阔的应用前景，应鼓励将油橄榄叶的高附加值作为抗氧化剂的来源进行工业生产，如药品、化妆品、保健品和功能性食品。地中海地区油橄榄叶和油橄榄叶茶具有传统的用法和广泛的运用，但在众多产品中，油橄榄叶的副产品具有巨大的升值潜力。

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