胶体金免疫层析法检测血清隐球菌抗原在肺隐球菌病诊断中的应用价值

黄佳斯，石磊，唐爱国，胡敏，唐玲丽，梁好，李影

(中南大学湘雅二医院a.检验科，b.病理科，长沙 410011)

·临床实验研究·

胶体金免疫层析法检测血清隐球菌抗原在肺隐球菌病诊断中的应用价值

黄佳斯a，石磊b，唐爱国a，胡敏a，唐玲丽a，梁好a，李影a

(中南大学湘雅二医院a.检验科，b.病理科，长沙 410011)

目的 探讨血清隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(CrAg-LFA)在肺隐球菌病诊断中的应用价值。方法 回顾性研究2016年1至11月中南大学湘雅二医院收治的肺隐球菌病及非肺隐球菌病患者共547例，采用CrAg-LFA筛查血清中隐球菌抗原，分析血清CrAg-LFA对肺隐球菌病诊断的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果 10例肺隐球菌病组患者采用CrAg-LFA测定阳性8例，敏感性为80.0%(8/10)；非肺隐球菌病组患者537例，CrAg-LFA测定阴性534例，特异性为99.4%(534/537)，阳性预测值和阴性预测值分别为72.7%和99.6%。结论 CrAg-LFA是一种简单快速的肺隐球菌病筛查试验，可用于肺隐球菌病的辅助诊断。

肺隐球菌病；隐球菌抗原；胶体金法

随着免疫功能低下患者增多，肺隐球菌病(pulmonary cryptococcosis，PC)发生率呈增加趋势[1]。隐球菌在肺组织内呈局限性浸润感染，传统的痰墨汁染色和培养阳性率很低[2]。血清学隐球菌荚膜抗原检测对隐球菌感染具有较好的辅助诊断价值。文献报道，隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(cryptococcal antigen lateral flow immunochromatographic assay，CrAg-LFA)测定脑脊液样本对隐球菌性脑膜炎的诊断敏感性和特异性达到95%左右[3]，而血清样本CrAg-LFA对PC的诊断效能国内未见报道。本研究应用CrAg-LFA法结合临床病理穿刺结果，探讨血清CrAg-LFA在PC诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 回顾性研究中南大学湘雅二医院呼吸科2016年1月至11月确诊PC组10例，男7例，女3例，年龄(47.1±11.6)岁，肺组织病理组织学染色均发现隐球菌椭圆形孢子样结构，孢子周边可见厚荚膜；非PC组537例，其中男335例，女202例，年龄(42.5±13.1)岁，组织病理或临床诊断排除PC，包括肺炎223例，慢性阻塞性肺病62例，肺癌43例，肺结核33例和支气管炎35例，其余肺病99例，非肺部疾病42例。根据2010年《隐球菌感染诊治专家共识》中PC诊断标准[4]进行诊断。

1.2 标本采集 采集患者空腹静脉血约4 mL于无菌干燥采血管中，3 000×g离心10 min取血清。

1.3 血清隐球菌抗原检测 隐球菌抗原检测(胶体金法)检测试剂盒购自美国Immuno-Mycologics公司。按照试剂盒说明书进行：将1滴样本稀释液加入到无菌试管中，加入40 μL血清样本进行混合，将隐球菌抗原检测试纸条检测端没入混合样本液中，10 min后读取结果。结果判读：检测条带和对照条带均出现为阳性；仅出现对照条带为阴性；若对照条带未出现，说明检测无效，应重新检测。

1.4 统计学分析 用SPSS 22.0统计软件进行。根据四格表资料计算血清CrAg-LFA诊断PC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。

2 结果

10例PC组患者中8例血清CrAg-LFA法检测呈阳性(强阳性)，2例为阴性；537例非PC组患者中3例血清CrAg-LFA法检测弱阳性，其余534例均为阴性。见表1。血清CrAg-LFA诊断PC的敏感性为80.0%，特异性为99.4%，阳性预测值为72.7%，阴性预测值为99.6%。

表1 血清CrAg-LFA对肺隐球菌病检测结果

3 讨论

目前血清学隐球菌荚膜抗原检测方法主要包括乳胶凝集法(LA)、酶联免疫法(EIA)和侧向层析法(CrAg-LFA)[5]。研究表明，CrAg-LFA比LA法和EIA具有更高的准确性，其在室温下稳定，10 min即可出结果，对实验室设备的要求不高，易于操作[6]。本研究10例PC患者中8例血清CrAg-LFA测定为强阳性，2例为阴性。阴性结果可能与隐球菌在肺部局限性浸润生长，隐球菌抗原较难释放入血有关。因此，CrAg-LFA测定阴性，临床高度怀疑PC时，仍需结合患者宿主因素及其他指标综合判断。537例非PC组患者中3例血清CrAg-LFA测定均为弱阳性，提示隐球菌抗原滴度较低或某些因素导致的交叉反应。以上3例患者最终诊断为耶氏肺孢子虫病、社区获得性肺炎伴类风湿关节炎和肺占位性病变，病理组织学均提示非隐球菌感染，提示耶氏肺孢子虫或类风湿因子可能在一定程度上与隐球菌抗原存在交叉反应，但尚需大样本数据进行进一步论证。本研究结果显示血清CrAg-LFA法诊断PC的敏感性和特异性分别为80.0%和99.6%，阳性预测值和阴性预测值分别为72.7%和99.6%，提示该方法对PC有较好的辅助诊断价值，可应用于PC的快速筛查。

[1]Park BJ, Wannemuehler KA, Marston BJ,etal. Estimation of the current global burden of cryptococcal meningitis among persons living with HIV/AIDS[J].AIDS,2009, 23(4):525-530.

[2]于洪志,吴琦.国内肺隐球菌病临床资料汇总分析[J].西南军医, 2009,11(4):606-608.

[3]Boulware DR, Rolfes MA, Rajasingham R,etal. Multisite validation of cryptococcal antigen lateral flow assay and quantification by laser thermal contrast[J]. Emerg Infect Dis, 2014, 20(1):45-53.

[4]《中国真菌学杂志》编辑委员会.隐球菌感染与诊治专家共识[J].中国真菌学杂志, 2010,5(2):65-68.

[5]Saha DC, Xess I, Biswas A,etal. Detection ofCryptococcusby conventional, serological and molecular methods[J].J Med Microbiol, 2009,58(Pt8):1098-1105.

[6]Lindsley MD, Nanthawan M, Baggett HC,etal. Evaluation of a newly developed lateral flow immunoassay for the diagnosis of cryptococcosis[J]. Clin Infect Dis, 2011, 53(4): 321-325.

(本文编辑：周万青，刘群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.10

黄佳斯，1986年生，女，技师，硕士研究生，从事凝血机制研究。

李影，主管技师，硕士，E-mail：liying.xiangya@163.com。

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2017-03-13)