翻白草总黄酮提取工艺及化学成分分析

付立明

（北京卫生职业学院，北京 101149）

翻白草总黄酮提取工艺及化学成分分析

付立明

（北京卫生职业学院，北京 101149）

目的 分析翻白草总黄酮的提取工艺及化学成分。方法 利用三种不同方法提取翻白草总黄酮，观察提取结果；使用乙醇、丙酮及水测量翻白草总黄酮的含量，记录测量结果；提取分析药材，检测不同萃取物的减压回收后的量；萃取分离乙酸乙酯萃取物，观察分离出来的化学成分。结果 提取总黄酮时，如使用乙醇溶剂，获得最多粗提物量的浓度为70%；如使用丙酮溶剂，粗提物量与浓度成反比；提取总黄酮时，含量最高的为70%乙醇，最低的为水；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取物量分别为9.25 g、15.34 g、20.23 g；经鉴定，化合物包含乌苏烷型三萜化合物、β-谷甾醇、齐墩果酸、十四烷酸、十六四烷酸、3′，4′，3，5，7-五羟基黄酮。结论 提取翻白草总黄酮时，溶剂提取-醚萃取的方法简便易用，且具有较高的准确度，通分析出的化合物看，多数的作用为降血脂、消炎。

翻白草；总黄酮；提取工艺；化学成分

黄酮类化合物为翻白草中的成分之一，具有药理活性，在糖尿病及其并发症治疗中具有良好的作用，可将自由基清除，对β细胞功能产生影响，增强免疫功能等。国内外多位学者表明，糖尿病治疗中，翻白草安全有效，且不会产生毒副作用，而黄酮类化合物作为其药效发挥的有效成分，如何提取及其化学成分成为研究的重点，本研究即分析了翻白草总黄酮的提取工艺及化学成分。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验时采用的仪器包含精密显微熔点测定仪、电子天平、水浴锅、红外光谱仪、层次用硅胶等；材料为翻白草，在铜佛寺中采集，经实验室专业人员鉴定确定，泥沙洗去后晾干，粉碎。

1.2 方法

1.2.1 总黄酮提取方法（1）乙醇提取-醚萃取法：在3个锥形瓶中分别加入25 g翻白草，再分别将50%、70%、90%浓度乙醇溶剂加入到锥形瓶中，重量均为原料的15倍，经24 h浸泡后，于水浴锅内放置，进行2、2、1 h的回流，温度均80℃，过滤，滤液合并，溶剂收回时利用旋转蒸发器，浸膏获取后，去离子水加入其中，冷冻，渣去除，3次后，清液合并，利用乙醚萃取，乙醚层与水层合并，回收乙醚，干燥后的粉末即为粗提物，记录粗提物量。（2）丙酮提取-醚萃取法：提取与萃取方法均与第一种相同，不同的为浸泡溶剂为丙酮。（3）水提-醚萃取法：提取与萃取方法均与第一种相同，不同的为浸泡溶剂为水，且不设置不同的浓度。

1.2.2 测定总黄酮含量：样品液称取适量，碱性条件（存在15%亚硝酸钠0.3 mL）下，利用硝酸铝显色后，空白比选择试剂，螯合物吸收度检测时，波长范围为420～700 nm，最大吸收出现在510 nm处，以此作为测定波长；亚硝酸钠溶液的浓度为50g/l，吸光度趋势为增大；硝酸铝溶液的浓度为100 g/L，具有相对稳定的吸光度；氢氧化钠溶液的浓度为40 g/L，具有相对稳定的吸光度。在105℃条件下，精准称取10每个芦丁标准品，定容时利用70%乙醇，达到100ml时停止，于6支试管中分别置入0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL的芦丁标准液，之后将不同量的水加入试管中，保证试管内溶液量为5.0 mL，再加入0.3 mL 0.5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6 min，接着加入0.3 mL 10%硝酸铝溶液，静置6 min，最后加入4 mL 4%氢氧化钠溶液、0.4 mL水，摇匀，静置15 min后，进行吸光度测试。测定样品液总黄酮含量时，方法与上述相同。

1.2.3 药材的提取分离：称取2.5 kg翻白草全草粗粉，加热回流时利用95%乙醇，时间为2 h，进行2次提取，趁热过滤提取液，滤液合并，乙醇减压回收，得到浸膏，于水中溶解浸泡，制成混悬液，萃取先后利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行，减压回收各萃取液。

1.2.4 乙醇乙酯萃取物的分离：柱层析反复进行后，化合物共得到6个，分别为白色无定形粉末、白色针状晶体、白色粉末、白色蜡状固体、无色针状结晶、黄色粉末。

2 结 果

2.1 总黄酮提取结果

第一种提取方法提取后，粗提物量分别为5.25 g、6.45 g、2.47 g；第二种提取方法提取的粗提物量分别为6.41 g、4.96 g、3.29 g；第三种方法提取后的粗提物量为6.08 g。以上结果说明，提取总黄酮时，如使用乙醇溶剂，获得最多粗提物量的浓度为70%；如使用丙酮溶剂，粗提物量与浓度成反比。

2.2 总黄酮含量测定结果

提取总黄酮时，含量最高的为70%乙醇，最低的为水，具体测定结果。见表1。

表1 总黄酮含量测定结果（n，%）

2.3 药材提取分离结果

经测定，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取物量分别为9.25 g、15.34 g、20.23 g。

2.4 乙醇乙酯分离结果

萃取分离的6个化合物中，经鉴定，白色无定形粉末为乌苏烷型三萜化合物、白色针状晶体为β-谷甾醇、白色粉末为齐墩果酸、白色蜡状固体为十四烷酸、无色针状结晶十六四烷酸、黄色粉末为3′，4′，3，5，7-五羟基黄酮。

3 讨 论

翻白草属于药用植物，总黄酮属于其成分中具有药理作用的有效成分。本文在提取总黄酮时，采取了三种不同的方法，结果显示，浓缩乙醇提取液并将等量水加入其中后，能够沉淀杂质，使干扰排除，再利用乙醚萃取后，提取液变得澄清，证明有效的去除了叶绿素等杂质[1]。提取工艺中，溶剂分别选用不同浓度乙醇、丙酮、水，获得不同的提取率，最高的为70%乙醇，可见，提物总黄酮时，最佳溶剂为70%乙醇[2]。在70%乙醇溶剂条件下，总黄酮提取效果还会受到回流时间、固液比等因素的影响，实验显示，工艺条件优化后，经2次提取，总黄酮含量约为19%[3]。乙醇乙酯萃取物分离时，采用方法为硅胶柱层次分离，分析后获得的化合物共6种，经鉴定后，属于乌苏酸、β-谷甾醇、齐墩果酸、肉豆蔻酸、棕榈酸与槲皮素，这6种化合物中，槲皮素属于黄酮类化合物，在糖尿病中有着较高的价值[4]。此外，齐墩果酸可对肿瘤生长发挥抑制作用，保护化学性损伤的肝细胞。

综上，提取翻白草总黄酮时，可利用70%乙醇提取-醚萃取方法，具有较高的总黄酮收率；翻白草中鉴定出的化合物中，多数在糖尿病中有着使用价值及药用价值。

[1] 彭 飞,杨越冬,程才红,等.安梨总黄酮微波辅助提取工艺的优化及其成分初步分析[J].食品科技,2015,10(11):196-203.

[2] 张 野,杨世海.酸枣仁总黄酮成分的提取工艺及其含量分析[J].人参研究,2012,21(02):28-30.

[3] 包怡红,段伟丽,王 芳,等.响应面法优化艾叶精油的提取工艺及其化学成分分析[J].食品工业科技,2015,8(14):287-292+298.

[4] 李 翔,王 卫,刘达玉,等.麻竹叶挥发油提取工艺及化学成分的GC-MS分析[J].中国食品添加剂,2013,15(06):92-98.

本文编辑：赵小龙

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ISSN.2095-8242.2017.24.4713.02