血清miRNA-499-5p在缺血性脑卒中的表达及临床意义

徐 健，刘金龙，丁丽萍，江 娇

（潍坊市妇幼保健院，山东 潍坊 261011）

·基础研究·

血清miRNA-499-5p在缺血性脑卒中的表达及临床意义

徐 健，刘金龙，丁丽萍，江 娇

（潍坊市妇幼保健院，山东 潍坊 261011）

目的 探讨血清miRNA-499-5p在缺血性脑卒中患者中的临床意义。方法 收集缺血性脑卒中患者60例，选取同期在医院健康体检者40例为对照组。采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测血清miRNA-499-5p的表达。结果 脑卒中患者血清miRNA-499-5p表达与对照组比较表达上调，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 缺血性脑卒中患者血清中miRNA-499-5p表达显著上升，可预测缺血性脑卒中疾病的发生及判断其危险程度，估计病情的发展状况，是其可能的生物学标记物之一。

缺血性脑卒中；miRNA-499-5p；生物学标记物

缺血性脑卒中是一种急性起病的局灶性脑供血障碍性疾病。对缺血性脑卒中的病因和发病机制尚未完全阐明。文献表明，microRNA通过碱基互补配对方式识别靶基因，调控多种基因的表达。脑组织中的miRNA的表达和分布与脑卒中有着密切的联系[1]。许多miRNA与脑组织的发育、分化、生理功能及病变等密切相关，与靶基因共同参与炎症、细胞凋亡、神经血管再生[2]。miRNA-499-5p在大脑细胞中都有表达。本研究利用荧光定量PCR的方法检测缺血性脑卒中患者血清中miRNA-499-5p的表达，探讨其在缺血性脑卒中的发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

搜集2016年4月～2017年4月潍坊市人民医院接收的缺血性脑卒中患者60例，并收集同期在潍坊人民医院进行健康体检患者40例。实验分为缺血性脑卒中组和和健康体检组。缺血性脑卒中组和和健康体检组一般资料相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 血液样本收集

收集缺血性脑卒中组和和健康体检组静脉血，3000 rpm/min，离心10 min，取上清冻存于-80℃，准备后续RT-PCR检测，其操作方法严格按照说明书进行操作。

1.2.2 荧光定量PCR检测

PCR反应体系如下所示：cDNA1ul；2×SYBR Green Mix 9 ul；上游primer0.5 ul；下游primer（10uM）0.5ul；水9 ul；总体积20 ul。PCR扩增反应参数：预变性95℃、3 min，94℃、30 s，60℃退火30 s，72℃延伸15 s，35个循环。以cel-miR-39为内参，上游引物5’CTC CAGCTG TCA AGA G CAA TAA CGA A3’，下游引物5’TCCAGT GCA GGG TCC GAG GT3’。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 临床资料结果

脑卒中组患者与健康对照组在性别、年龄方面差异无统计学意义。而在高血压史、糖尿病史方面明显高于健康对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 缺血性脑卒中组和健康对照组一般资料比较

2.2 血清miR-499-5p表达检测

运用定量PCR方法检测脑卒中组和健康对照组血清中miR-499-5p的表达水平，结果示脑卒中组血清miR-499-5p相对表达量明显高于健康对照组，差异有显著性（P＜0.01），见表2。

表2 缺血性脑卒中组与健康对照组血清miR-499-5p表达水平

3 讨 论

本研究通过研究发现卒中性患者血清miR-499-5p表达水平显著升高，疾病组与健康组在性别、年龄方面无统计学差异。而疾病组在高血压史、糖尿病史方面明显高于健康对照组[3]（P＜0.05）。许多研究表明miRNA参与了神经系统的发生、发育、病理损伤和修复过程[4]。本研究结果提示，miR-499-5p在脑卒中组表达显著上调，其可能作为脑卒中的生物学标志物之一被更广泛用于临床诊断和治疗脑卒中，具体的作用机制目前还了解甚少，需要进一步研究。

[1] 王 丽,王媛媛,刘海莉,等.MicroRNA与神经系统发育的研究进展[J].中南大学学报医学版,2013,38(3):323-328.

[2] 钮 超,孙丽华.microRNA在高血压诱发脑卒中疾病发展中的作用[J].中国临床药理学杂志,2013,29(7):551-553.

[3] 保玉莲,朱榆红.MicroRNA与缺血性脑卒中关系的研究进展[J].中国实用神经疾病杂志,2014,17(4):94-97.

本文编辑：吴 卫

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ISSN.2095-8242.2017.22.4171.02