EGFR基因突变与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

丁 昊 王 灿



EGFR基因突变与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

丁 昊 王 灿

目的 研究临床病理特征及相关实验室检测指标与非小细胞肺癌患者外科手术治疗预后的关系。方法手术切除的非小细胞肺癌患者标本一共190例，采用实时荧光PCR法，检测EGFR 基因第 18、19、20 和 21 号外显子的突变情况。分析EGFR基因突变与其临床病理关系、EGFR基因突变丰度和临床特征的关系。结果 EGFR基因突变的影响因素包括：性别、吸烟史、病理分型，高危因素包括：女性、吸烟者、腺癌。190例 NSCLC 患者肿瘤组织中，成功检测出90例存在 EGFR 基因突变，EGFR 突变丰度与性别(P=0.962)、吸烟史(P=0.809)无相关性；EGFR突变丰度与病理分型相关。和非腺癌对比，腺癌患者EGFR基因突变丰度明显更高，(χ2=14.110，P=0.000)。术前腺癌血清VEGF水平明显低于非腺癌组，P<0.05；术后腺癌血清CD44v6明显高于非腺癌患者，P<0.05；术后Ⅲ～Ⅳ期组血清VEGF、CD44v6水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，P<0.05。结论 非小细胞肺癌EGFR基因突变的高危因素为吸烟者、女性、腺癌，与年龄、性别、肿瘤分期、吸烟史无明显相关性。

临床病理特征；实验室检测指标；非小细胞肺癌；外科手术；预后

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1233～1236)

目前，肺癌的发病率和病死率位居全球恶性肿瘤之首，并且正在逐年增长，尤其在在发展中国家[1]。非小细胞肺癌在肺癌总病例中占比高达80%，但是绝大多数患者发现患病时为时已晚，导致病灶转移，以失去手术切除治疗的时机[2]。目前，多种新型的抗肿瘤药物诞生，并且有效地延长晚期非小细胞肺癌患者的疾病进展生存期，例如紫杉烷类、拓扑异构酶抑制剂、吉西他滨等等[3-4]。根据国外研究结果，晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变阳性对吉非替尼存在高度敏感性[5]。以EGFR为靶点的分子靶向治疗通过对EGFR酪氨酸激酶磷酸化产生抑制的作用，并借助于下游信号的传导，以对肿瘤细胞的生长、增殖、转移、侵袭、凋亡产生反应。现有研究证明，EGFR 基因突变和多方面影响因素有关，包括性别、吸烟史、病理分型[6-7]。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应技术对190例NSCLC患者进行检测，分析术后标本中EGFR基因突变、突变丰度和血清VEGF、CD44v6水平、临床病理特征之间的关系，为临床治疗方案的制定和预后的评价提供可靠的依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

2013年1月至2015年12月手术切除的非小细胞肺癌患者标本一共190例，年龄(59.1±2.9)岁；96例男性、94例女性。对所有标本进行病理学检查，包括：甲醛固定、石蜡包埋、HE染色等等，由病理医师判定结果，并评估肿瘤细胞含量后进行检测。

1.2 检测方法

1.2.1 EGFR基因检测 采用实时荧光PCR法，使用人EGFR基因突变定性检测试剂盒(北京雅康博生物科技有限公司)对标本进行EGFR基因检测，检测的外显因子包括：EGFR基因第18、19、20和21号外显子。严格按照试剂盒说明书进行操作。经历40个循环，其中包括：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃1 min。反应时间为1.5 h，对各反应孔扩增曲线进行分析，并判读结果。样本突变结果判读标准：当突变点扩增，Ct值≤35，则判定为阳性；当无扩增出现，或Ct值>38，则判定为阴性；当Ct值>35但≤38，则判定为疑似阳性，可重复试验加以确定。样本突变丰度判定标准：当突变量超过20%，则判定为高丰度突变；当突变量≤20%，则判定为低丰度突变。

1.2.2 血清VEGF、CD44v6检测 术前一周和术后一周采集患者清晨空腹静脉血，5 ml，室温放置30 min，离心处理(5 000 r/min，10 min)，取其血清300 μl，放置于-20 ℃冷冻以备用。采用酶联免疫吸附方法检测血清VEGF、CD44v6，严格按照血清VEGF、CD44v6试剂盒说明书操作，在酶标仪读取光密度值，并计算血清VEGF、CD44v6的相对含量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 EGFR基因突变与NSCLC临床病理的关系

EGFR基因突变的影响因素包括：性别、吸烟史、病理分型；高危因素包括：女性、吸烟者、腺癌。

表1 EGFR基因突变与NSCLC临床病理的关系/例

2.2 EGFR基因突变丰度与NSCLC临床特征的关系

190例 NSCLC 患者中，成功检测出90例存在 EGFR 基因突变，EGFR 突变丰度与性别(P=0.962)、吸烟史(P=0.809)无相关性；EGFR突变丰度与病理类型有相关性。 与非腺癌对比，腺癌患者EGFR基因突变丰度明显更高(χ2=14.110，P=0.000)。

表2 EGFR基因突变丰度与NSCLC临床特征的关系/例

2.3 血清VEGF、CD44v6水平与肺癌临床病理特征的关系(表3)

术前腺癌患者血清VEGF水平明显低于非腺癌者，P<0.05；术后腺癌患者血清CD44v6水平明显高于非腺癌患者，P<0.05；术后Ⅲ～Ⅳ期患者血清VEGF、CD44v6水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，P<0.05。

3 讨论

3.1 EGFR基因与肺癌临床病理、术后预后关系

目前，肺癌发病率正处于上升的趋势，并且越来越显示出年轻化的特点[9-10]。高达80%肺癌患者确诊患病病情已经出现远处转移，难以通过手术进行根治，近能够通过化疗进行治疗，以延长生存期。目前，临床标准的化疗方案为含铂双联化疗，虽然应用广泛，但是疗效已经达到平台。目前，吉非替尼作为以EGFR 分子为靶标，是临床常用的靶向药物，在全世界范围内得到广泛的应用。根据早期研究结果，EGFR 异常活化会导致肿瘤细胞产生恶性生物学行为，二者密切相关，EGFR 基因突变阳性的非小细胞肺癌对吉非替尼具有高度敏感性。经过深入研究，吉非替尼在 EGFR 基因敏感突变的非小细胞肺癌中，疗效确切，可有效地延长患者的生存期和提高患者的生存质量。预示着EGFR第18-21号外显子突变是 EGFR-TKIs疗效预测因子[11-12]。

表3 血清VEGF、CD44v6与肺癌临床病理特征的关系

注：*为与非腺癌比较，P<0.05；#为与Ⅰ～Ⅱ期比较，P<0.05。

本研究显示，EGFR基因突变和性别、吸烟史、病理分型具有显著的分型，女性、吸烟者、腺癌具有明显更高的EGFR基因突变风险。190例NSCLC 患者肿瘤组织中，成功检测出90例存在 EGFR 基因突变，EGFR 突变丰度与性别(P=0.962)、吸烟史(P=0.809)差异无统计学意义；EGFR突变丰度与病理分型差异有统计学意义。和非腺癌对比，腺癌患者EGFR基因突变丰度明显更高(χ2=14.110，P=0.000)。由此可见，和非腺癌患者对比，腺癌EGFR基因突变率明显更高，但非腺癌患者依然存在EGFR基因突变的风险。根据相关研究结果[13-14]，和非腺癌患者对比，腺癌EGFR 突变阳性患者采用吉非替尼进行治疗疗效更为显著，换言之，吉非替尼更适用于腺癌患者，而非腺癌患者疗效相对较差，但仍然存在一定的临床有效性。由此预示着，非腺癌患者并非可以完全杜绝EGFR突变可能性，建议对非腺癌患者进行EGFR突变检测，可为临床治疗方案的制定提供更为全面的信息。与此同时，EGFR 突变丰度状况影响因素不包括性别、吸烟史、临床分期。本研究采用实时荧光定量PCR 检测技术进行EGFR突变检测，通过荧光基团的加入，利用信号积累，对整个检测过程进行实时监测，操作简便、快速、灵敏性，结果判读直观、明确，污染低，费用低廉[15-18]。可见，实时荧光定量PCR 检测技术可作为临床靶向治疗预测效果的有效方式，有利于提高靶向治疗的精确性及准确性。非小细胞肺癌患者的个体化治疗目前已经成为临床治疗中的重要方案，可有利于优化肺癌分子，而EGFR基因突变丰度检测是增加治疗方案合理程度的关键措施，必须对EGFR基因突变丰度进行更为深入的研究，以延长NSCLC患者的生存期和改善预后生活质量。

3.2 血清VEGF、CD44v6和肺癌临床病理、术后预后关系

血清VEGF可对血管内皮细胞产生特异作用，促进血管分裂增殖，有利于新生血管形成，增加肿瘤血管的通透度，促使癌细胞加快扩散，在血管内皮细胞增殖、迁移、血管构建中发挥着重要的作用。本研究显示，术前腺癌血清VEGF明显低于非腺癌组，P<0.05；术后Ⅲ～Ⅳ期组血清VEGF明显高于Ⅰ～Ⅱ期组，P<0.05。说明肿瘤病情越严重，分期越高级，其血清VEGF水平越高，由于血管内皮生长因子过度表达，预示着该类患者肿瘤更容易发生转移。

CD44v6广泛分布在细胞表面的跨膜糖蛋白，可在淋巴细胞、成纤维细胞、上皮细胞表面检出，具有多方面的生理作用，正常人群的血清CD44v6水平含量非常低。在肿瘤侵袭和转移过程中，会出现黏附、基底膜降解、迁移等一系列的变化，而血清CD44v6在这个过程中发挥着重要的作用。本研究显示，术后腺癌血清CD44v6明显高于非腺癌组，P<0.05；术后Ⅲ～Ⅳ期组血清CD44v6明显高于Ⅰ～Ⅱ期组，P<0.05。预示着腺癌术后血清CD44v6含量更高，晚期患者血清CD44v6更高，符合相关研究的结果：腺癌更容易发生转移，病理分期越晚，淋巴结转移越严重，术后血清CD44v6含量降低不明显，可见术后血清CD44v6含量高者更容易发生转移。

综上所述，非小细胞肺癌EGFR基因突变的高危因素在于吸烟者、女性、腺癌，和年龄、性别、肿瘤分期、吸烟史无明显相关性。

[1] 胡雅兵.EGFR、VEGF在非小细胞肺癌中的表达意义及与微血管密度之间的关系〔J〕.四川医学，2011，32(7):1007-1011.

[2] Ohashi K，Sequist LV，Arcila ME，et al.Lung cancers with acquired resistance to EGFR inhibitors occasionally harbor BRAF gene mutations but lack mutations in KRAS，NRAS，or MEK1〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，2012，109(31):E2127-E2133.

[3] Sutto L，Gervasio FL.Effects of oncogenic mutations on the conformational free-energy landscape of EGFR kinase〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2013，110(26):10616-10621.

[4] Massarelli E，Johnson FM，Erickson HS，et al.Uncommon e- pidermal growth factor receptor mutations in non-small cell lung cancer and their mechanisms of EGFR tyrosine kinase inhibitors sensitivity and resistance〔J〕.Lung cancer，2013，80(3):235-241.

[5] Lièvre，A.From KRAS mutations to RAS mutations: Towar- ds a better definition of response to anti-EGFR antibodies in metastatic colorectal cancer [Des mutations de KRAS aux mutations de RAS: vers une meilleure définition de la réponse aux anticorps anti-EGFR dans le cancer colorectal métastatique]〔J〕.Oncologie，2014，16(2/3):120-128.

[6] Kim HR，Cho BC，Shim HS，et al.Prediction for response d- uration to epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors in EGFR mutated never smoker lung adenocarcinoma〔J〕.Lung cancer，2014，83(3):374-382.

[7] Shan Y，Eastwood MP，Zhang X，et al.Oncogenic mutations counteract intrinsic disorder in the EGFR kinase and promote receptor dimerization〔J〕.Cell，2012，149(4):860-870.

[8] Fiala O，Pesek M，Finek J，et al.Gene mutations in squamous cell NSCLC: Insignificance of EGFR，KRAS and PIK3CA mutations in prediction of EGFR-TKI treatment efficacy〔J〕.Anticancer Res，2013，33(4):1705-1712.

[9] Misale S，Yaeger R，Hobor S，et al.Emergence of KRAS mutations and acquired resistance to anti-EGFR therapy in colorectal cancer〔J〕.Nature，2012，486(7404):532-536.

[10] 郑 军，谢贵元，李 姣,等.非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床意义研究〔J〕.中国肿瘤临床，2014，41(14):904-907.

[11] Chang YT，Chang MC，Huang KW，et al.Clinicopathological and prognostic significances of EGFR，KRAS and BRAF mutations in biliary tract carcinomas in Taiwan〔J〕.J Gastroenterol Hepatol，2014，29(5):1119-1125.

[12] 胡春燕，周建华，邓征浩，等.ADAM23、αvβ3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2010，26(4):433-437，441.

[13] Hosgood HD 3rd，Pao W，Rothman N，et al.Driver mutations among never smoking female lung cancer tissues in China identify unique EGFR and KRAS mutation pattern associated with household coal burning〔J〕.Respir Med，2013，107(11):1755-1762.

[14] 唐艳萍，谭晓玉，蔡政民，等.非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变和 EM L4-ALK 融合基因表达的研究〔J〕.检验医学与临床，2016，13(24):3458-3460.

[15] Munfus-McCray D，Cui M，Zhang Z，et al.Comparison of EGFR and KRAS mutations in primary and unpaired metastatic lung adenocarcinoma with potential chemotherapy effect〔J〕.Hum Pathol，2013，44(7):1286-1292.

[16] Lee H，Kang T，Yoon KA，et al.Colorimetric detection of mutations in epidermal growth factor receptor using gold nanoparticle aggregation〔J〕.Biosens Bioelectron，2010，25(7):1669-1674.

[17] Ohba T，Toyokawa G，Kometani T，et al.The mutations of the EGFR and K-ras genes in resected stage i lung adenocarcinoma and their clinical significance〔J〕.Surg Today，2014，44(3):478-486.

[18] 王 俊，彭珍子，董叶萍，等.长链非编码RNA C6orf176两个转录本在非小细胞肺癌中的表达及意义〔J〕.中南大学学报(医学版)，2016，41(6):560-565.

(编辑：吴小红)

Relationship between EGFR Gene Mutation and Clinical Pathological Features ofNon-small Cell Lung Cancer

DING Hao，WANG Can.

Xuancheng Central Hospital,Xuancheng,242000

Objective To study the relationship between EGFR gene mutation and clinical pathological features of non-small cell lung cancer.Methods 190 cases of non-small cell lung cancer specimens treated with surgical resection used real-time fluorescent PCR method，to detect EGFR gene mutation in exon 21 and 18，19，20 sub.Relationship between EGFR gene mutation and clinical pathological characteristics and abundance of mutations in the EGFR gene were analyzed.Results The influence factors of EGFR mutations: gender，smoking history，disease Physical type，risk factors include: women，smokers，adenocarcinoma.In tumor tissues of 190 NSCLC patients，90 cases were successfully detected EGFR gene mutation，EGFR mutation abundance and gender(P=0.962)，smoking history(P=0.809) had no significant difference；EGFR mutation type differences in abundance and pathology statistical significance.Compared with non adenocarcinoma，gland cancer patients with EGFR gene mutation abundance was significantly higher(χ2=14.110，P=0.000).Preoperative adenocarcinoma serum VEGF was significantly lower than non adenocarcinoma group，P<0.05；postoperative cancer serum CD44v6 was significantly higher than non adenocarcinoma group，P<0.05 Ⅲ～Ⅳ group；serum VEGF after operation，CD44v6 was significantly higher than that of Ⅰ～Ⅱ group，P<0.05.Conclusion The risk factors of EGFR gene mutation in non-small cell lung cancer in smokers，female，adenocarcinoma，and age，sex，tumor staging，smoking history obvious correlation.

Clinical pathological characteristics；Laboratory test；Non-small cell lung cancer；Surgery；Prognosis

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.004

R734.2

A

1001-5930(2017)08-1233-04

2017-04-13

2017-06-12)