不同灭菌方法对茜草组织培养污染率控制的研究

2017-08-09陈建常权记

吉林农业 2017年14期

关键词：氯化汞茜草高锰酸钾

陈建，常权记

（安康学院，陕西安康725000）

不同灭菌方法对茜草组织培养污染率控制的研究

陈建，常权记

（安康学院，陕西安康725000）

利用不同灭菌方法对茜草外植体进行处理，观测组织培养污染率、愈伤组织诱导率。实验表明：10%高锰酸钾溶液浸泡3分钟效果最佳，污染率30%，愈伤组织诱导率25%；75%酒精溶液灭菌10s处理效果较差，污染率60%，愈伤组织诱导率为10%。

茜草；灭菌；组织培养；污染率；诱导率

茜草（Rubiasylvatica），又名锯锯藤、红茜草、挂拉豆、小血藤、过山龙等，茜草科茜草属，为多年生攀援草本植物。其味苦,归肝心经,有凉血止血作用,可用于治疗吐血、外伤出血,经脉阻塞、关节麻木、跌扑肿痛等，其成分具有消炎、抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、抗辐射、镇咳祛痰等功效，在医药上具有很高的应用价值[1]。

自然界茜草生长缓慢,野生茜草根茎自然产量低，茜草的药用价值主要是在根茎，由于人们的大量采挖，导致野生资源趋于枯竭。野生种驯化移栽成活率低。为了保护国内茜草品种以及产量资源,对野生品种进行驯化，满足茜草生产规模化栽培的需要，弥补国内茜草资源不足，开展茜草快速繁殖及组织培养的研究就显得更为迫切和重要。本试验是探究不同灭菌方法对组织培养污染率控制，经过不同灭菌方法的处理，旨在探索出最适组织培养的灭菌方法，使其达到快速繁殖甚至工厂化提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

茜草原材料采自陕西省安康市汉滨区长岭村火车道旁。外植体采用当年生生长健壮、污染较少的幼嫩枝条为实验材料，直径为0.1～0.2厘米。

1.2 培养基及培养条件

本实验使用MS+2.4-D2.0毫克/升/l+KT0.1mg/l[2]。培养基pH调至6.0。在26℃温度条件下，光照1000lx，环境相对湿度70%～80%。茎段接种平放和斜插入培养基，叶片接种时叶片正面朝上，平放在培养基上[3]。

1.3 实验处理

消毒剂选择：

A1：0.1%次氯酸钠15min+75%酒精10S+0.1%氯化汞8S

A2：10%高锰酸钾溶液3min+75%酒精10S+0.1%氯化汞8S

A3：0.1%过氧化氢溶液10m in+75%酒精10S+0.1%氯化汞8S

A4：75%酒精10S+0.1%氯化汞8S

在消毒剂选择中，A1：次氯酸钠消毒后，用无菌水清洗3次，75%酒精消毒后，无菌水清洗3次，0.1%氯化汞灭菌后用无菌水清洗5次。A2：高锰酸钾消毒后，用无菌水清洗3次，用保鲜膜包裹，静置8小时[4]，75%酒精消毒后，无菌水清洗3次，0.1%氯化汞灭菌后用无菌水清洗5次。A3：过氧化氢消毒后，用无菌水清洗3次，用保鲜膜包裹，75%酒精消毒后，无菌水清洗3次，0.1%氯化汞灭菌后用无菌水清洗5次。A4：75%酒精消毒后，无菌水清洗3次，0.1%氯化汞灭菌后用无菌水清洗5次。全部外植体边使用边切，保证外植体的生理活性。

2 实验结果及分析

不同灭菌方法对污染率及愈伤组织诱导的影响（污染率=污染外植体/接种外植体数×100%，愈伤组织诱导率=发生愈伤组织数/接种外植体数×100%）。

表1 不同灭菌方法对茜草组培污染率及愈伤组织的影响

由表1得出：使用不同灭菌方法的处理后，效果最好的是10%的高锰酸钾溶液，污染率30%，愈伤组织诱导率也较高，为25%；效果最差为只使用75%酒精+0.1%氯化汞的方法，污染率为60%，愈伤组织诱导率10%。10%的高锰酸钾氧化性比较小，对外植体的损害较小，虽然消毒灭菌时间比较长，但是效果比较明显，能够显著诱导愈伤组织形成；过氧化氢处理后，因为消毒灭菌后，产生较多氧离子，对茜草损害比较大，导致不能产生较多的愈伤组织。使用氯化汞消毒灭菌时，由于其毒性大，对外植体损害大，因此使用氯化汞只灭菌8S。