DLX2在结肠癌中的表达及其临床意义

张 荣,乔 文

(1西安交通大学第一附属医院消化内科,西安 710061;2延安大学咸阳医院消化内科;*通讯作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)



DLX2在结肠癌中的表达及其临床意义

张 荣1,2,乔 文1*

(1西安交通大学第一附属医院消化内科,西安 710061;2延安大学咸阳医院消化内科;*通讯作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)

目的 探讨DLX2在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达差异及在结肠癌中的意义。 方法 收集96例结肠癌患者的癌组织及相应癌旁正常组织,应用免疫组织化学技术检测DLX2的表达,分析其表达与结肠癌临床病理参数的关系。 结果 结肠癌组织中DLX2 呈阳性表达,与癌旁正常组织相比,其表达水平显著升高(P<0.01)。DLX2的表达在结肠癌的不同TNM分期、不同分化程度和是否有淋巴结转移之间,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 DLX2的高表达可能促进结肠癌的发生发展,深入研究其功能有可能为结肠癌的诊断治疗及预后提供新的靶标。

DLX2基因; 结肠癌; TNM分期

结肠癌是常见的恶性肿瘤之一,随着社会经济的发展,其发病率逐年上升,然而其发病机制并不明确[1]。研究显示,基因异常是肿瘤发生的关键所在,一直以来都是肿瘤分子机制研究的热点。因此,寻找结肠癌相关基因对其诊治具有重要意义。distal-less 同源盒基因2(distal-less homeobox 2,DLX2)是同源盒基因亚家族DLX基因家族成员之一,近年研究表明,其异常表达与多种血液系统肿瘤及实体肿瘤的进程密切相关[2-5]。然而,DLX2与结肠癌的关系并不清楚。我们应用免疫组织化学的方法,检测DLX2基因在结肠癌及相邻的正常癌旁组织中的表达特征,分析其表达与结肠癌患者临床病理因素的关系,为结肠癌的分子诊断及靶向治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 组织标本 研究所需标本来自2013-01～2015-12延安大学咸阳医院确诊为原发性结肠癌96例患者行手术切除的结肠癌及相应癌旁正常组织。所有标本均经病理确诊,并采用4%中性甲醛固定和石蜡包埋。所有患者术前均未接受过化疗、放疗或生物制剂等治疗。患者共96例,年龄32-83岁,平均年龄(48.5±11.2)岁,其中男性65例,女性31例;高分化癌30例,中分化35例,低分化31例;临床分期中,Ⅰ期6例,Ⅱ期45例,Ⅲ期24例,Ⅳ期21例;55例病人有淋巴结转移。

1.1.2 主要试剂 鼠抗人的DLX2单克隆抗体购自美国Abcam公司,SP免疫组化试剂盒购自美国Zymed Lab公司,HRP标记羊抗鼠IgG抗体购自美国Gibco公司,APES防脱片胶购自北京中杉公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学检测 采用SP法,按试剂盒说明书操作步骤进行。将包埋好的标本进行5 μm的连续切片;脱蜡水化;然后加入3%的H2O2,室温下放置10 min;再将切片放置于柠檬酸缓冲液(10 mmol/L,pH 6.0)中,微波加热以修复抗原(95 ℃,10 min);冷却至室温后加入山羊血清封闭30 min;加入鼠抗人DLX2多克隆抗体(1 ∶150),保湿盒中过夜(4 ℃);复温(37 ℃,1 h),PBS振洗 3次(5 min/次);加入生物素标记的二抗 (1 ∶2 000),放置于保湿盒中,置于37 ℃,30 min,PBS振洗 3次(5 min/次);加入反应液,放置于保湿盒中,置于37 ℃,1 h,PBS振洗 3次(5 min/次);加入DAB试剂后根据观察控制显色时间,用蒸馏水冲洗(15 min);苏木精复染(1 min),蒸馏水冲洗后脱水透明,用中性树胶封片后备用。

1.2.2 染色评分 由两位高年资病理医师进行染色评分,评分医师对患者的临床以及病理资料均不知情。评分时随机抽选5个视野,根据每个视野中染色阳性细胞所占细胞总数的百分比以及染色的深浅进行评分。阳性细胞百分比如果≤1%细胞染色为0分;1%-25 %细胞染色为1分; 26%-50 %细胞染色为2分; 51%-75 %细胞染色为3分;76%-100 %细胞染色为4分。染色强度评分标准为:细胞无着色为0分;弱染色(淡黄色)为1分;中等强度染色(棕黄色)为2分;强染色(棕褐色)为3分。将两个分数相加作为最终评分,最终评分如果大于3分则判定为阳性。

1.3 统计学分析

采用SPSS20.0统计学软件(SPSS,Chicago,Illinois)进行分析。样本间计数资料的比较采用χ2检验进行。若P<0.05则被认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 DLX2在结肠癌组织中显著高表达

对结肠癌和癌旁正常结肠组织标本进行免疫组织化学分析,结果显示,DLX2主要表达在细胞核中,而结肠癌组织中DLX2的表达水平显著增高(见图1)。统计结果显示,结肠癌组织中DLX2阳性表达的增高与癌旁正常结肠组织相比具有统计学差异(P<0.01,见表1)。

图1 结肠癌及癌旁正常组织中DLX2的表达 (×200)Figure 1 Expression of DLX2 in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues (×200)

表1 DLX2在结肠癌及癌旁正常组织中的表达

Table 1 DLX2 expression in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues

分组nDLX2表达阳性阴性χ2P结肠癌组织96712556.5540.000癌旁正常组织961977

2.2 DLX2表达与结肠癌临床病理指标的相关性分析

统计结果显示,DLX2的高表达与结肠癌的分化程度关系密切,分化程度越低,DLX2表达的阳性率越高(P<0.05)。DLX2在TNMⅢ期和Ⅳ期的结肠癌的阳性表达率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期的结肠癌(P<0.05);有淋巴结转移的结肠癌组织中DLX2的阳性表达率显著高于不伴转移的结肠癌组织标本(P<0.05);而DLX2的表达在不同年龄及不同性别的结肠癌组织中没有明显差异(P>0.05,见表2)。

3 讨论

结肠癌是我国乃至世界范围内发病率和死亡率均很高的恶性肿瘤[6],在我国位于消化系统肿瘤发病率的第三位。而且随着人民的饮食习惯和饮食结构的改变,我国结肠癌的发病率和死亡率均逐年上升,且患病人群有年轻化的趋势。CEA、CA199等传统肿瘤标志物敏感性较差,在早期结肠癌患者中阳性率低,不利于早期筛查。目前,结肠癌的诊断主要依赖肠镜及腹部CT 等方法,大多数患者发现时已处于肿瘤晚期,失去了最佳的治疗时机,因此寻找特异的关键分子及治疗靶点对结肠癌的早期诊断、预后判断、新药开发和临床治疗具有重要意义。

表2 DLX2的表达与结肠癌临床病理特征的相关性分析

Table 2 Relationship of the immunohistochemical expression of DLX2 with clinicopathological parameters in colon cancer

临床病理参数nDLX2阳性阴性χ2P性别0.2850.594 男654718 女31247年龄0.1730.678 <50岁34268 ≥50岁624517分化程度 高30282 中352694.169*0.041* 低31171411.676*0.001*TNM分期4.8360.028 Ⅰ-Ⅱ513318 Ⅲ-Ⅳ45387淋巴结转移6.2360.012 无412516 有55469

*表示与高分化比较

同源盒基因(homeobox gene,Hox)是在果蝇体内发现的基因,其不仅参与胚胎时期消化道的发育,而且与消化系统肿瘤的发生、发展及预后密切相关[7-10]。distal-less 同源盒(distal-less homeobox,DLX)基因家族是同源盒基因家族的亚家族,DLX2是DLX家族中的一员,其在肿瘤中的研究仍处于起始阶段,近年来研究发现其异常表达与急性髓性白血病、淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、胃癌的进程密切相关,能促进肿瘤的增殖和转移[2-5,11-13]。但关于DLX2与结肠癌的关系并不明确,仅有的一项关于DLX2在结肠癌中表达的研究显示,DLX-2在结肠癌组织中呈现一种多样化的表达特征,即相比正常组织DLX2出现表达上调、相似或下调等不同情况[14],那么DLX2在结肠癌中是什么样的表达模式就值得关注,而明确DLX2在结肠癌中的表达特征是深入研究其在结肠癌中的作用及机制的基础。

本研究采用免疫组织化学染色观察结肠癌组织及癌旁组织DLX2的表达。结果显示无论在癌组织或者癌旁组织,DLX2主要表达在细胞核中。96例结肠癌组织中,有71 例呈 DLX2阳性高表达,而相应癌旁正常组织呈显著低表达甚至表达缺失,其统计学具有显著差异。分析结肠癌患者临床病理参数和DLX2的表达关系,结果表明,DLX2的高表达在不同性别和不同年龄的患者中差异无统计学意义,但与结肠癌的恶性程度有密切关系,即TNM分期越高的结肠癌组织中DLX2阳性表达率越高,并且DLX2的阳性高表达还与淋巴转移情况密切相关。DLX2可能成为一种结肠癌患者新的监测指标,以辅助临床的诊断治疗以及随访。

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Expression and clinical significance of distal-less homeobox 2 in colon cancer

ZHANG Rong1,2,QIAO Wen1*

(1DepartmentofGastroenterology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China;2DepartmentofGastroenterology,XianyangHospitalofYan’anUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:qiaowen1202@126.com)

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Distal-less homeobox 2 (DLX2) protein in colon cancer.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of DLX2 protein in 96 colon cancer tissues and adjacent non-tumor tissues.Statistical analysis was used to evaluate the relationship between the clinicopathological parameters and the expression of DLX2.ResultsThe DLX2 expression was significantly higher in colon cancer tissues than that of the corresponding non-tumor tissues(P<0.01).The up-regulation of DLX2 was significantly related with TNM stage,differentiation grade and lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionThe results suggest that higher expression of DLX2 may promote the carcinogenesis and progression of colon cancer.Further study on the function of DLX2 may provide a new strategy for the diagnosis,treatment and prognosis of colon cancer.

distal-less homeobox 2(DLX2)； colon cancer； TNM stage

张荣,女,1980-09生,学士,主治医师,E-mail:zhangrzt@126.com

2017-01-10

R735.35

A

1007-6611(2017)04-0362-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.04.013